本发明专利技术公开了一种抗CD20抗原的抗体L5H6及其应用。本发明专利技术提供的抗CD20抗原，命名为L5H6抗体，是一种IgG，其轻链由轻链可变区和轻链恒定区组成，其重链由重链可变区、铰链区和重链恒定区组成；所述轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第61-74位氨基酸残基、第89-102位氨基酸残基和第112-123位氨基酸残基；所述重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第57-67位氨基酸残基、第81-96位氨基酸残基和第106-119位氨基酸残基。本发明专利技术还保护所述L5H6抗体在制备用于B细胞淋巴瘤治疗药物中的应用。本发明专利技术对于B细胞淋巴瘤的治疗具有重大应用价值。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抗CD20抗原的抗体L5H6及其应用。本专利技术提供的抗CD20抗原，命名为L5H6抗体，是一种IgG，其轻链由轻链可变区和轻链恒定区组成，其重链由重链可变区、铰链区和重链恒定区组成；所述轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第61-74位氨基酸残基、第89-102位氨基酸残基和第112-123位氨基酸残基；所述重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第57-67位氨基酸残基、第81-96位氨基酸残基和第106-119位氨基酸残基。本专利技术还保护所述L5H6抗体在制备用于B细胞淋巴瘤治疗药物中的应用。本专利技术对于B细胞淋巴瘤的治疗具有重大应用价值。【专利说明】抗CD20抗原的抗体L5H6及其应用
本专利技术涉及一种抗⑶20抗原的抗体L5H6及其应用。
技术介绍
2008年世界卫生组织造血和淋巴组织肿瘤分类确定了超过25种具有广泛生物学和临床特征的B细胞淋巴瘤组织学亚型。美国癌症学会估计，2012年美国共有70130例B细胞淋巴瘤新病例被诊断，并且18940例患者将死于该病。在美国成人中，B细胞淋巴瘤占所有癌症的4%和癌症相关死亡的3%。在欧洲和北美，弥漫性大B细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)的最常见类型(占大约30%的病例)，被视为一种需要立即治疗的侵袭性癌症。滤泡性淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的第二最常见组织学类型(占大约25%-30%的病例)。传统上，淋巴分化过程都是通过组织学分析辨别出在淋巴细胞发生特定阶段表达的细胞表面标志物来鉴定。CD20抗原是一种B细胞特异性分化抗原，在成熟B细胞和超过95%B细胞非霍奇金淋巴瘤表达，但不在早期B细胞祖细胞或晚期成熟浆细胞表达。CD20抗原由297个氨基酸残基组成，分子量为33kD，在膜上比较暴露，容易接近，与单克隆抗体结合后无显著内化及脱落，也不会因为与抗体的结合而发生抗原调变，故成为治疗B细胞淋巴瘤的理想靶点。利妥昔单抗(Rituximab)是一种可识别人类⑶20抗原的嵌合性单克隆抗体(整合了人类免疫球蛋白Gl重链和鼠免疫球蛋白可变区)。1997年11月利妥昔单抗获得美国食品和药物管理局批准用于治疗淋巴瘤的抗体。1998年，欧盟也批准利妥昔单抗上市，商品名为MabThera。利妥昔单抗在复发性、惰性非霍奇金淋巴瘤病例中有显著治疗效果，开创了单克隆抗体治疗癌症的时代。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗⑶20抗原的抗体L5H6及其应用。本专利技术提供的抗⑶20抗原，命名为L5H6抗体，是一种IgG，其轻链由轻链可变区和轻链恒定区组成，其重链由重链可变区、铰链区和重链恒定区组成；所述轻链可变区中的⑶R1、⑶R2和⑶R3依次为序列表的序列I自N末端第61-74位氨基酸残基、第89-102位氨基酸残基和第112-123位氨基酸残基；所述重链可变区中的⑶R1XDR2和⑶R3依次为序列表的序列3自N末端第57-67位氨基酸残基、第81-96位氨基酸残基和第106-119位氨基酸残基。所述轻链具体可为如下(a)或(b): (a)序列表的序列I自N末端第21_234位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列I所不的蛋白质；所述重链具体可为如下(C)或(d): (C)序列表的序列3自N末端第20-470位氨基酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列3所不的蛋白质。本专利技术还保护编码所述L5H6抗体的基因，其特征在于: 编码所述轻链的基因为如下(I)或(2)或(3):(I)序列表的序列2自5’末端第74-715位核苷酸所示的DNA分子；(2)序列表的序列2自5’末端第14-718位核苷酸所示的DNA分子；(3)序列表的序列2所示的DNA分子；编码所述重链的基因为如下(4)或(5)或(6):(4)序列表的序列5自5’末端第58-1410位核苷酸所不的DNA分子；(5)序列表的序列5所示的DNA分子；(6)序列表的序列4所示的DNA分子。本专利技术还保护所述L5H6抗体在制备用于杀伤B细胞淋巴瘤细胞的药物中的应用。所述B细胞淋巴瘤细胞为表达CD20抗原的B细胞淋巴瘤细胞。所述B细胞淋巴瘤细胞具体可为Daudi细胞。本专利技术还保护一种用于杀伤B细胞淋巴瘤细胞的药物，其活性成分为所述L5H6抗体。所述B细胞淋巴瘤细胞为表达CD20抗原的B细胞淋巴瘤细胞。所述B细胞淋巴瘤细胞具体可为Daudi细胞。本专利技术还保护所述L5H6抗体在制备用于B细胞淋巴瘤治疗药物中的应用。 本专利技术对于B细胞淋巴瘤的治疗具有重大应用价值。【专利附图】【附图说明】图1为实施例2中的洗脱曲线。图2为实施例2中的10%SDS_PAGE图谱。图3为实施例4中的ADCC的结果。图4为实施例4中的⑶C的结果。【具体实施方式】以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。pcDNA-3.3 载体(线性质粒):1nvitrogen 公司，目录号 K8300-01。pOptiVEC 载体(线性质粒)Jnvitrogen 公司，目录号 12744-017)。CH0-DG44 细胞 Jnvitrogen 公司，目录号 A13737-01。0ptiPR0?SFM 培养液:Invitrogen 公司，目录号 12309-050。月旨质体(FreeStyle?MAX Reagent):1nvitrogen 公司，目录号 16447-100。CD DG44Medium:Invitrogen 公司，目录号 12610-010。CD 0ptiCH0?Medium:Invitrogen 公司，目录号12681-011。利妥昔单抗(溶液形式；100mg/10ml,无色透明液体；IgG,其轻链如序列表的序列6所示,其重链如序列表的序列7所示):德国Roche Diagnostics GmbH,产品批号H0119,查询序列号:10000661731142)。利妥昔单抗具有30%左右的鼠源蛋白，长期使用会引起鼠抗人抗体反应而无法使用。因此，寻求更为有效的抗CD20抗原的抗体用于B淋巴瘤的治疗显得尤为迫切。专利技术人基于大量摸索、分析、验证，进行计算机建模和人源化改造，设计了一种抗CD20抗原的抗体(命名为L5H6抗体)。L5H6抗体为IgG，其轻链(命名为轻链L5)如序列表的序列I所示，其重链(命名为重链H6)如序列表的序列3所示。序列表的序列I中，自N末端第1-20位氨基酸残基组成前导肽，第21-131位氨基酸残基组成轻链可变区VL (其中，第61-74位氨基酸残基组成⑶R1、第89-102位氨基酸残基组成⑶R1、第112-123位氨基酸残基组成⑶R3)，第132-234位氨基酸残基组成轻链恒定区CL。序列表的序列3中，自N末端第1-19位氨基酸残基组成前导肽，第20-140位氨基酸残基组成重链可变区VH (其中，第57-67位氨基酸残基组成⑶R1、第81-96位氨基酸残基组成⑶R2、第106-119位氨基酸残基组成⑶R3)，第141-238位氨基酸残基组成重链恒定区CHl，第本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种IgG，其轻链由轻链可变区和轻链恒定区组成，其重链由重链可变区、铰链区和重链恒定区组成；所述轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第61‑74位氨基酸残基、第89‑102位氨基酸残基和第112‑123位氨基酸残基；所述重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第57‑67位氨基酸残基、第81‑96位氨基酸残基和第106‑119位氨基酸残基。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：戴维·威孚，杨凌，曹诚，靳彦文，米歇尔·瑞奇韦兹，张部昌，朱林，贾茹，姚溢，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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