一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法，包括如下步骤：（1）将红曲霉菌株接种于PDA斜面培养基上，活化培养，制得活化菌株；（2）将活化菌株接种于PDA种子培养基中，经培养，制得发酵种子；（3）将发酵种子接种于红曲霉发酵培养基中，经培养，即得。本发明专利技术利用木糖母液作为发酵培养基的碳源，将木糖母液变废为宝，并且有效降低了桔霉素的产生，降低桔霉素浓度与发酵液色价比值，提高红曲产品的安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法
本专利技术涉及一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法，属于微生物发酵

技术介绍
紫色红曲菌（Monascuspurpureus)是红曲红色素和降血脂药的重要生产菌株，其发酵产物也被广泛应用于饮食烹饪。1995年，Blanc在红曲发酵产物中发现了肾毒素桔霉素（citrinin)，桔霉素会导致肾脏肿大，肾小管扩张，上皮细胞坏死，同时还具有致畸致癌作用，因此红曲产品的安全性受到了质疑。传统的红曲霉培养方式以大米（淀粉）为原料，有调察显示中国市场内约有一半的红曲产品桔霉素含量超标（Yanli.,2012）。为了降低红曲产品中桔霉素的产量，研究者对红曲菌进行大量的菌种改良和发酵工艺改良研究。这其中有对红曲霉菌株进行基因工程改造（周礼红,江南大学），使用60Co辐照诱变（许赣荣，江南大学），有研究利用大豆水解液为氮源优化发酵工艺降低桔霉素产量（陈蕴，江南大学）。如中国专利文献CN102987180A（申请号201210536354.9）公开了一种低桔霉素红曲米的生产方法，其采用紫色红曲菌发酵大米而成，该方法的工艺步骤为：（1）将清洗干净的大米放入加有桔霉素抑制剂的水中浸泡；（2）浸泡后的大米经沥干、蒸米、降温、接种，再堆积培养后转入通风培养；所述通风培养期间通过补加水使物料的含水量保持在50wt%～70wt%，所述补加的水中加入有金属螯合剂；（3）所述通风培养结束前，向物料加入氧化剂以去除红曲米上的桔霉素；所述通风培养结束后，出料烘干，即可得到低桔霉素红曲米。中国专利文献CN1807576A（申请号200610033131.5）公开了一种不含桔霉素的功能性红曲菌菌丝体的培养方法。该方法通过调节培养室或塑膜温室送风量排风量或敞开式通风系统，在菌丝体生长对数期以低浓度醋酸雾状物以及点燃稻草产生烟熏进行刺激,以及加大通气量,使菌丝体培养阶段昼夜间变温、调湿,调控培养基料含水量,保持淀粉质培养基料疏松，加速菌丝体生长速率及功能性代谢产物MonacolinK的合成和积累，同时有效抑制MonascidinA(Citrinin)的形成。但上述研究仍然不能满足市场的需求。将玉米秸、玉米芯、棉籽壳、甘蔗渣、稻草、小麦秸秆等植物原料进行加压加热预处理以及酸水解后，再对水解液进行木糖浓缩结晶，在结晶分离后得到的废液——木糖母液；木糖母液采用菲林法测定其还原糖含量为3%～80%的生产废弃糖液；通常采用高效液相色谱法（HPLC）测定其可溶性糖为木糖、葡萄糖、阿拉伯糖各种糖的浓度，该废液的木糖含量为25～70%，葡萄糖含量为5～25%，阿拉伯糖含量为5～25%。针对上述木糖母液，目前还没有很好的利用方法。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法。本专利技术的技术方案如下：一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法，包括如下步骤：（1）将红曲霉菌株接种于PDA斜面培养基上，在25～35℃活化培养4～5天，制得活化菌株；（2）将步骤（1）制得的活化菌株接种于PDA种子培养基中，在25～35℃、200rpm/min条件下，培养2～4天，制得发酵种子；（3）将步骤（2）制得的发酵种子按照体积比1:10～1:5接种于红曲霉发酵培养基中，在25～35℃、200rpm/min条件下，培养7～10天，即得；所述步骤（3）中的红曲霉发酵培养基，每升组分如下：木糖母液30～50mL，NaNO32～4g，酵母提取物1g，K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，水定容至1000mL，pH5～7。根据本专利技术优选的，每升组分如下：木糖母液30mL，NaNO33g，酵母提取物1g，K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，水定容至1000mL，pH6。根据本专利技术优选的，所述步骤（1）中的红曲霉菌株购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），菌种保藏编号40943。本领域技术人员可以根据实际情况选择不同的红曲霉菌株进行制备红曲制剂。根据本专利技术优选的，所述步骤（1）中的PDA斜面培养基，每升组分如下：去皮马铃薯200g，切块，加水600mL煮沸30分钟，八层纱布过滤，加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，定容至1000mL。根据本专利技术优选的，所述步骤（2）中的PDA种子培养基，每升组分如下：去皮马铃薯200g，切块，加水600mL煮沸30分钟，八层纱布过滤，加入20g葡萄糖，定容至1000mL。根据本专利技术优选的，所述木糖母液的组分如下，均为重量百分比：木糖40～50%，葡萄糖10%，阿拉伯糖10%，余量为水。DNS法测得总还原糖浓度为600～700g/L。有益效果1、本专利技术利用木糖母液作为发酵培养基的碳源，将木糖母液变废为宝，并且有效降低了桔霉素的产生，降低桔霉素浓度与发酵液色价比值，提高红曲产品的安全性；2、本专利技术采用液态发酵法生产红曲霉，相比固态发酵操控性强，且物质利用效率高，节约能源。附图说明图1为红曲菌株经发酵后的发酵液在500nm的发酵液色价、桔霉素浓度和桔霉素浓度与发酵液色价的比值的柱状图；图2为红曲菌株经发酵后的发酵液在400nm和500nm的发酵液色价、桔霉素浓度和桔霉素浓度与发酵液色价的比值的柱状图；具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的技术方案做进一步说明，但本专利技术所保护范围不限于此。培养基实施例中的PDA斜面培养基按如下方法制备：去皮马铃薯200g，切块，加水600mL煮沸30分钟，八层纱布过滤，加入20g葡萄糖，20g琼脂粉，定容至1000mL,充分溶解后，121℃高压蒸汽灭菌30min；实施例中的PDA种子培养基按如下方法制备：去皮马铃薯200g，切块，加水600mL煮沸30分钟，八层纱布过滤，加入20g葡萄糖，定容至1000mL,充分溶解后，121℃高压蒸汽灭菌30min。发酵产物指标（发酵液色价、桔霉素浓度）检测方法如下：发酵液色价检测方法：用发酵液四倍体积的无水乙醇在60℃水浴中萃取1h，12000rpm/min离心5min，取上清，用适量无水乙醇稀释，以无水乙醇做空白对照，测量在400nm和500nm处测量吸光值。色价=500nm波长下吸光值×稀释倍数；或者色价=（400nm波长下吸光值+500nm波长下吸光值）×稀释倍数桔霉素检测方法：用发酵液四倍体积的无水乙醇在60℃水浴中萃取1h，12000rpm/min离心5min，取上清液，用0.22μm的滤膜微滤后，进行HPLC分析。菌株来源：购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），菌种保藏编号40943。木糖母液购自山东龙力生物科技股份有限公司，经检测，木糖母液的组分如下，均为重量百分比：木糖40～50%，葡萄糖10%，阿拉伯糖10%，余量为水。DNS法测得还原糖含量为600～700g/L。实施例1一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法，包括如下步骤：（1）将红曲霉菌株接种于PDA斜面培养基上，在30℃活化培养4天，制得活化菌株；（2）将步骤（1）制得的活化菌株接种于PDA种子培养基中，在30℃、200rpm/min条件下，培养3天，制得发酵种子；（3）将步骤（2）制得的发酵种子按照体积比1:10接种于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将红曲霉菌株接种于PDA斜面培养基上，在25～35℃活化培养4～5天，制得活化菌株；（2）将步骤（1）制得的活化菌株接种于PDA种子培养基中，在25～35℃、200rpm/min条件下，培养2～4天，制得发酵种子；（3）将步骤（2）制得的发酵种子按照体积比1:10～1:5接种于红曲霉发酵培养基中，在25～35℃、200rpm/min条件下，培养7～10天，即得；所述步骤（3）中的红曲霉发酵培养基，每升组分如下：木糖母液30～50mL，NaNO32～4g，酵母提取物1g，K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，水定容至1000mL，pH5～7。

【技术特征摘要】
1.一种利用木糖母液制备红曲制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将红曲霉菌株接种于PDA斜面培养基上，在25～35℃活化培养4～5天，制得活化菌株；（2）将步骤（1）制得的活化菌株接种于PDA种子培养基中，在25～35℃、200rpm条件下，培养2～4天，制得发酵种子；（3）将步骤（2）制得的发酵种子按照体积比1:10～1:5接种于红曲霉发酵培养基中，在25～35℃、200rpm条件下，培养7～10天，即得；所述步骤（3）中的红曲霉发酵培养基，每升组分如下：木糖母液30～50mL，NaNO32～4g，酵母提取物1g，K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，FeSO4·7H2O0.01g，水定容至1000mL，pH5～7；所述木糖母液的组分如下，均为重量百分比：木糖40～50%，葡萄糖10%，阿拉伯糖10%，余量为水。2.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：方诩，自振滔，石文昊，李钰茜，王明钰，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37