一种用于降低牛乳β-乳球蛋白致敏性的非热加工方法，其特征是按以下步骤：1）制备蛋白溶液：用0.05M，pH6.8的磷酸盐缓冲液将β-乳球蛋白稀释成1mg/ml的均匀蛋白溶液；（2）将步骤（1）中的β-乳球蛋白溶液分装于密封的PE管中，采用剂量10kGy钴-60辐照装置进行辐照处理。本发明专利技术有效地降低了牛乳β-乳球蛋白的潜在致敏性，不需特殊复杂的前处理，对于样品的外包装无特殊要求，使用常规的辐照灭菌装置就可以进行操作；较低剂量的辐照即国际允许的安全剂量处理就可满足降低蛋白的致敏性并能维持蛋白质的营养性质以及感官性能。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，其特征是按以下步骤：1）制备蛋白溶液：用0.05M，pH6.8的磷酸盐缓冲液将β-乳球蛋白稀释成1mg/ml的均匀蛋白溶液；（2）将步骤（1）中的β-乳球蛋白溶液分装于密封的PE管中，采用剂量10kGy钴-60辐照装置进行辐照处理。本专利技术有效地降低了牛乳β-乳球蛋白的潜在致敏性，不需特殊复杂的前处理，对于样品的外包装无特殊要求，使用常规的辐照灭菌装置就可以进行操作；较低剂量的辐照即国际允许的安全剂量处理就可满足降低蛋白的致敏性并能维持蛋白质的营养性质以及感官性能。【专利说明】
本专利技术属于生物
，特别涉及一种通过非热加工技术降低牛乳过敏原β -乳球蛋白致敏性的方法。
技术介绍
乳球蛋白是牛乳中主要的过敏原之一。由于乳球蛋白具有耐酸和耐蛋白酶水解等特性，因此该蛋白经过人体胃肠道消化后，还会有部分完整的β_乳球蛋白或其肽段，容易导致过敏人群产生过敏反应。因此利用各种加工手段降低β_乳球蛋白的过敏原性，可保障过敏人群的安全食用。 食物过敏原不是通过完整的蛋白质分子产生过敏反应，这些引起食物过敏反应的免疫学物质基础就是过敏原表位。而表位包括线性表位和构象性表位，是其过敏原性的结构基础。目前已有用于降低牛乳过敏原蛋白β_乳球蛋白的加工方法包括生物加工、化学加工、物理加工等技术。其中，生物加工是利用基因工程技术改变过敏蛋白的基因序列；化学加工则通过酶改性和糖基化等方式改变过敏原蛋白的结构，从而达到降低其致敏性的目的。然而这些技术均存在一定的局限性:β_乳球蛋白主要是以构象性表位为主，难以通过序列变化大幅度改变构象性表位；而β_乳球蛋白具有耐酶解特性，导致酶改性的效果不佳，且糖基化过程中产生的中间产物，会引起人们对食物安全性的考虑。物理加工又可分为热加工和非热加工。热加工是牛乳及其乳制品生产过程中常用的灭菌技术，加热过程中会导致牛乳过敏蛋白产生去折叠或聚合等结构变化，从而诱导牛乳过敏蛋白的潜在致敏性的改变。但是，热加工也会致使牛乳中部分营养物质的损失。而非热加工技术不仅能实现热加工预期的加工效果，并能降低食品中有害微生物菌群的数量，同时可维持食品原有的感官和营养品质，保留其中的热敏性营养成分。在非热加工处理中，同时改变牛乳的潜在致敏性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种降低牛乳β -乳球蛋白致敏性的方法。本专利技术所要解决的技术问题通过以下步骤来实现。(I)制备蛋白溶液:用0.05Μ, ρΗ6.8的磷酸盐缓冲液将β -乳球蛋白稀释成Img/ml的均匀蛋白溶液； (2)将步骤(1)中的β-乳球蛋白溶液分装于密封的PE管中，采用剂量IOkGy钴-60辐照装置进行辐照处理。本专利技术可通过电泳检测和竞争抑制性ELISA评估，判断出过敏蛋白的致敏性变化趋势及程度。本专利技术建立了一种非热加工方法，即辐照技术，实现降低牛乳β -乳球蛋白的潜在致敏性。辐照技术不需特殊复杂的前处理，对于样品的外包装无特殊要求，使用常规的辐照灭菌装置就可以进行操作；较低剂量的辐照即国际允许的安全剂量处理就可满足降低蛋白的致敏性并能维持蛋白质的营养性质以及感官性能。【专利附图】【附图说明】附图1为本专利技术辐照处理对β -乳球蛋白IgE结合能力的影响。【具体实施方式】本专利技术将通过以下实施例作进一步说明。实施例1。1、材料。I)配制缓冲液:称取8.775g磷酸氢二钠，3.975g磷酸二氢钠，超纯水溶解并定容至1L，配制成0.05M, pH6.8的磷酸盐缓冲液。2)制备蛋白溶液:用0.05M, pH6.8的磷酸盐缓冲液将β -乳球蛋白稀释成Img/ml的均匀蛋白溶液。2、方法。I)辐照技术处理β -乳球蛋白 将β -乳球蛋白溶液分装于密封的PE管中，采用剂量率为0.92kGy/3h的钴-60辐照装置进行辐照处理，辐照剂量分别为OkGy (对照)、0.5 kGy、l kGy、5 kGyUO kGy及20kGy。2) 乳球蛋白致敏性变化的定量分析。辐照处理后的β -乳球蛋白溶液作为被分析的蛋白样品，通过竞争抑制性ELISA检测其致敏性的变化。对照未处理蛋白，可以判断出该过敏蛋白致敏性的降低程度。3)检测辐照处理后的β -乳球蛋白的致敏性变化 ⑴构建牛乳过敏患者血清池:选定11位符合既定条件的牛乳过敏患者的血清混合制备而成。这些患者的血清符合以下条件:对牛乳过敏呈阳性；总的IgE水平均>100 IU/mL ；特异性IgE水平均>1 IU/mL。⑵抗原包被:将0.5~20kGy辐照剂量处理后的各个β-乳球蛋白溶液稀释至2.5 μ g /mL，在一块酶标板上分别包被上100 μ L，以未处理β -乳球蛋白溶液为对照。4°C过夜后PBST洗板三次，每次5min。⑶明胶封阻:每孔加入250 μ L 3%明胶，37°C封阻lh。洗板三次。⑷一抗反应:另准备一块酶标板以同样的方式进行封阻，洗涤之后，每孔加入1:20稀释度的人血清100 μ L，37°C反应lh。反应时间结束后，每孔吸取100 μ L转移至第一块板内，37 °C孵育Ih，PBST洗板三次。(5)二抗反应:每孔加入1:5000稀释度的生物素标记羊抗人IgE 二抗100 μ L, 37°C反应lh。PBST洗板。(6)亲和素反应:每孔加入1:60稀释的HRP-链霉素标记的亲和素100 μ L,37°C反应，洗板。(7) OPD显色和检测:每孔加入100 μ L现配制的OPD显色液，37°C避光反应15min，反应结束后每孔50 μ L加入2Μ H2SO4终止液，在490nm处用酶标仪测定OD值 (8)结果的计算,IgE结合能力(%) = (1-B/B。)X 100%, B0:无竞争蛋白时的OD值；B:各加工条件下竞争蛋白对应的OD值。3、结果。经过辐照处理后β -乳球蛋白的潜在致敏性变化如附图1所示。在0.5^20kGy这5个不同剂量的辐照处理下，β -乳球蛋白的IgE结合能力，即潜在致敏性均产生降低。随着辐照剂量的增大 ，β -乳球蛋白的致敏性呈现降低趋势，分别降低了 8%、26.5%,62.6%、78.9%及90.2%。在20kGy剂量处理条件下，几乎可以完全消除β -乳球蛋白的潜在致敏性。【权利要求】1.，其特征是按以下步骤: (1)制备蛋白溶液:用0.05Μ，ρΗ6.8的磷酸盐缓冲液将β -乳球蛋白稀释成lmg/ml的均匀蛋白溶液； (2)将步骤(1)中的β-乳球蛋白溶液分装于密封的PE管中，采用剂量IOkGy钴-60辐照装置进行辐照处理。【文档编号】C07K14/47GK103923206SQ201410148141【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月15日 优先权日:2014年4月15日 【专利技术者】李欣, 陈红兵, 白雨鑫, 高金燕, 孟轩夷, 杨安树, 吴志华, 佟平 申请人:南昌大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于降低牛乳β‑乳球蛋白致敏性的非热加工方法，其特征是按以下步骤：（1）制备蛋白溶液：用0.05M，pH6.8的磷酸盐缓冲液将β‑乳球蛋白稀释成1mg/ml的均匀蛋白溶液；（2）将步骤（1）中的β‑乳球蛋白溶液分装于密封的PE管中，采用剂量10kGy钴‑60辐照装置进行辐照处理。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李欣，陈红兵，白雨鑫，高金燕，孟轩夷，杨安树，吴志华，佟平，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西;36
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