用于叶酸过表达癌细胞快速检测的比色方法技术

本发明专利技术公开了一种叶酸过表达癌细胞快速检测的方法。将金纳米颗粒与不同比例的K2PtCl6和H2PdCl4混合制备出Au@PtPd纳米材料；利用6-巯基-己醇和叠氮-11-烷基-硫醇对Au@PtPd纳米粒子表面修饰，通过点击化学技术与炔基化的叶酸进行偶合；叶酸受体靶向的Au@PtPd纳米材料与癌细胞进行孵育，连接于细胞表面，Au@PtPd纳米材料能够催化过氧化氢氧化显色剂发生颜色变化，将其溶液低于色谱纸亲水区，晾干后利用扫描仪对其进行扫描，对所呈现颜色进行色度分析，K562细胞浓度为200-10000cells/mL时，K562细胞与所呈现的色度差展现出良好的线性关系，其线性回归方程为ΔI=38.69+0.075c，相关系数R=0.9931，据此建立了一种操作简便，快速，费用低和无需专业人士即可检测癌细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及癌细胞的检测方法，具体地说是一种基于AuOPtPd纳米材料制备用于比色方法测定癌细胞。
技术介绍
肿瘤的发生严重影响着人们的生活质量，危及着人们的生命安全，实现肿瘤细胞及其生理活动的准确、快速、简便检测，对于疾病的确诊与治疗具有非常重要的意义。目前，有关检测方法已有一些报道，但普遍操作繁琐费时、不易定量、仪器昂贵，且要求工作人员有较高的专业技能。因此实现目标物的高灵敏、快速、简单测定癌细胞有着非常重要的意义。目前对细胞检测流式细胞术是一种能够对细胞或亚细胞结构进行快速检测的新型分析和分选技术，其主要特点是检测速度快，并且可进行多参数测量。随着流式细胞术研究的逐步深入和成熟，其应用范围已经从科学研究扩展到临床诊断，在临床医学领域里有着极大的应用潜力。但是，由于其昂贵的分析成本(仪器价格、试剂盒时间消耗等)及对操作人员专业训练的严格要求，这种分析技术只能在条件比较完善的大型实验室或检测不能才能实现。同时，由于这类仪器一般还具有较为庞大的体积，因此也在一定程度上限制了其应用和普及。细胞检测方法的发展离不开新的材料和技术，没有材料和技术的新突破，就很难有细胞检测方法的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于叶酸过表达的癌细胞的快速检测方法，其特征是包括以下步骤：（1）将金纳米颗粒与不同比例的K2PtCl6和H2PdCl4混合制备出Au@PtPd纳米材料；（2）利用6‑巯基‑己醇和叠氮‑11‑烷基‑硫醇对Au@PtPd纳米粒子表面修饰，通过点击化学技术与炔基化的叶酸进行偶合；（3）叶酸受体靶向的叶酸/Au@PtPd纳米材料与癌细胞进行孵育，离心分离；（4）取（3）悬浮液与显色剂混合，加入显色剂溶液底物；（5）比较（4）得到溶液颜色，将其溶液滴在色谱纸亲水区（样品区）上，晾干，扫描仪扫描对其色度分析。

【技术特征摘要】
1.一种用于叶酸过表达的癌细胞的快速检测方法，其特征是包括以下步骤: (1)将金纳米颗粒与不同比例的K2PtCl6和H2PdCl4混合制备出AuOPtPd纳米材料； (2)利用6-巯基-己醇和叠氮-11-烷基-硫醇对AuOPtPd纳米粒子表面修饰，通过点击化学技术与炔基化的叶酸进行偶合； (3)叶酸受体靶向的叶酸/AuOPtPd纳米材料与癌细胞进行孵育，离心分离； (4)取(3)悬浮液与显色剂混合，加入显色剂溶液底物； (5)比较(4)得到溶液颜色，将其溶液滴在色谱纸亲水区(样品区)上，晾干，扫描仪扫描对其色度分析。2.根据权利要求1在步骤(1)中，所述AuOPtPd纳米材料制备方法,量取80mL去离子水于三口烧瓶中，加热至90°C，加入0.8mL 1%的HAuCl4,加热至96°C并保持一分钟，之后加入2.8 mL 1%柠檬酸钠，继续搅拌15min，自然冷至室温，秤取0.048g K2PtCl6于50 mL水中，0.035 g PdCl2溶于2 mL 0.2 mol/L的盐酸并加水稀释至100 mL，取5 mL金纳米溶液与40 μ L 2mmol/L K2PtClf^MOyL 2mmol/L H2PdCl4溶液混合，加入10倍量的抗坏血酸，剧烈震荡，溶液颜色由棕色变为灰色。3.根据权利要求1在步骤(2)中，所述的对AuOPtPd纳米材料表面进行叶酸功能化具体方法，6-巯基-己醇，叠氮-11-烷基-硫醇和AuOPtPd按照物质的量比为20:10:1混合，所得溶液在25°C下放置72小时，采用分子量30 kDa的半透膜进行透析30min，AuOPtPd纳米材料表面形成6-巯基-己醇和叠氮-11-烷基-硫醇包覆物(A); 1.0 g叶酸溶入10 mL二甲基甲酰胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛慎光，于京华，葛磊，颜梅，张彦，黄加栋，刘伟艳，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37