微生物发酵制备广昌白莲降血压多肽的方法技术

一种微生物发酵制备广昌白莲降血压多肽的方法，将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方（kg/L）为：3-6%白莲粉、1-5%碳源、水，自然pH值；取菌龄处于28-44h的活化菌株，把地衣芽孢杆菌ND稀释成1mL中含1*107CFU后，按2-6%接种量将种子液接种于发酵液培养基中，37℃，125r/min摇床培养，培养32-52h；取发酵液，10000r/min下离心20min，沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液0.45μm微孔滤膜过滤，滤液真空干燥；用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶Sephadex-G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD220，发酵产物经凝胶层析后，收集第2个吸收峰真空干燥。本发明专利技术工艺简单，成本低，获得的混合多肽分子量多数小于1500D，且其降血压活性比使使用木瓜蛋白酶获得的多肽更好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于自然资源中肽的提取，特别涉及降血压活性肽的提取。技术背景血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)可以使血压升高。能抑制ACE活性的物质称为血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin Converting Enzymeinhibitor,ACEI),研究发现许多天然蛋白水解肽可以抑制ACE的活性。这些多肽在预防和治疗高血压方面具有巨大的开发潜力。食源性蛋白降血压肽由于其无毒、无副作用、安全性高，可开发成降压药物或者降压保健品。广昌白莲具有高蛋白、低脂肪，氨基酸含量丰富的特点，是药食共用的优良保健食品。通过对广昌干白莲莲子中蛋白的组成、溶性和品质进行研究，发现含蛋白质24.94 %，目前利用木瓜蛋白酶从广昌白莲中获得了降血压活性肽，但是植物蛋白酶(如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等)效率低，受外界环境因素影响大，成本高，生产工艺复杂，不适合工业化生产。微生物发酵法生产多肽不需要蛋白酶的提取过程，而是直接利用微生物生长过程中产生的各种酶类。此酶系非单一蛋白酶而是多种蛋白酶混合的复合酶系，包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶等一系列蛋白酶。简化生产工艺，可有效的降低生产成本。
技术实现思路
本专利技术的目地是针对现有广昌白莲降血压多肽获取存在的两个问题，即成本高，生产工艺复杂，提供一种获得降血压活性较高的白莲多肽的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的。将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方(kg/L)为:3-6%白莲粉、1-5%碳源、水，自然pH值。取菌龄处于28-44h的活化菌株，把地衣芽孢杆菌ND稀释成ImL中含1*107CFU后，按2-6%接种量将种子液接种于发酵液培养基中，37°C，125r/min摇床培养，培养32_52h。取发酵液，10000r/min下离心20min，沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液微孔滤膜过滤(0.45 μ m)，滤液真空干燥。用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶S印hadex-G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD22tl,发酵产物经凝胶层析后出现3-5个吸收峰，收集第2个吸收峰进行真空干燥，其ACE抑制率为60-89%。本专利技术所述的碳源为葡萄糖、蔗糖、淀粉、麦芽糖、麸皮或玉米粉中的一种。本专利技术的最优条件:将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方(kg/L)为:5%白莲粉、2%葡萄糖、余为水，自然pH值。取菌龄处于36h的活化菌株，把地衣芽孢杆菌ND稀释成ImL中含1*107CFU后，按5%接种量将地衣芽孢杆菌ND种子液接种于发酵液培养基中，37 °C，125r/min摇床培养,培养46h。取发酵液，10000r/min下离心20min,沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液微孔滤膜过滤(0.45 μ m)，滤液真空干燥。用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶SephadeX-G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD22tl，发酵产物经凝胶层析后出现5个吸收峰。收集第2个吸收峰进行真空干燥。其ACE抑制率为88.5%。本方法工艺简单，成本低，HPLC-MS分析结果表明多肽分子量集中在500-1900D之间。降血压肽的活性除与其氨基酸的组成及结构有关外，还与分子量有关。一般认为分子量小于1500D的组分降血压活性最强，目前已经分离和纯化得到的降血压肽多为2-12肽。本研究获得的混合多肽分子量多数小于1500D。且其降血压活性比使使用木瓜蛋白酶获得的多肽更好。【附图说明】图1为本专利技术发酵液多肽经葡聚糖凝胶S印hadex-G25分离后的降血压混合多肽HPLC-MS 图谱。【具体实施方式】本专利技术将通过以下实施例作进一步说明。实施例1。将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方(kg/L)为:4%白莲粉、3%葡萄糖、余为水，自然PH值。取菌龄处于36h的活化菌株，按5%接种量将地衣芽孢杆菌ND种子液接种于发酵液培养基中，37°C，125r/min摇床培养，培养46h。取发酵液，10000r/min下离心20min，沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液微孔滤膜过滤(0.45 μ m)，滤液真空干燥。用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶SephadeX-G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD22tl，发酵产物经凝胶层析后出现4个吸收峰。收集第2个吸收峰进行真空干燥。其ACE抑制率为为 64.13%。实施例2。将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方(kg/L)为:5%白莲粉、2%葡萄糖、余为水，自然PH值。取菌龄处于38h的活化菌株，按4%接种量将地衣芽孢杆菌ND种子液接种于发酵液培养基中，37°C，125r/min摇床培养，培养42h。取发酵液，10000r/min下离心20min，沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液微孔滤膜过滤(0.45 μ m)，滤液真空干燥。用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶SephadeX-G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD22tl，发酵产物经凝胶层析后出现3个吸收峰。收集第2个吸收峰进行真空干燥。其ACE抑制率为为 75.44%ο本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物发酵制备广昌白莲降血压多肽的方法，其特征是将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方（kg/L）为：3‑6%白莲粉、1‑5%碳源、水，自然pH值；取菌龄处于28‑44h的活化菌株，把地衣芽孢杆菌ND稀释成1mL中含1*107CFU后，按2‑6%接种量将种子液接种于发酵液培养基中，37℃，125r/min 摇床培养，培养32‑52h；取发酵液，10000r/min下离心20min，沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液0.45μm微孔滤膜过滤，滤液真空干燥；用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶Sephadex‑G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD220，发酵产物经凝胶层析后，收集第2个吸收峰进行真空干燥。

【技术特征摘要】
1.一种微生物发酵制备广昌白莲降血压多肽的方法，其特征是将白莲研磨成粉，发酵液培养基的配方(kg/L)为:3-6%白莲粉、1-5%碳源、水，自然pH值；取菌龄处于28_44h的活化菌株，把地衣芽孢杆菌ND稀释成ImL中含1*107CFU后，按2_6%接种量将种子液接种于发酵液培养基中，37°C，125r/min摇床培养，培养32_52h ； 取发酵液，10000r/min下离心20min，沉淀为菌体和未水解的白莲组分，取上清液0.45 μ m微孔滤膜过滤，滤液真空干燥；用蒸馏水溶解后在葡聚糖凝胶S印hadeX-G25下对其进行分离纯化，根据各个收集管的OD22tl，发酵产物经凝胶层析后，收集第2个吸收峰进行真空干燥。2.根据权利要求1所述的微生物发酵制备广昌白莲降血压多肽的方法，其特征是所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽萍，段元丹，李恒，袁建赣，李曼，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西;36