一种快速提取百合鳞茎DNA的方法技术

本发明专利技术涉及一种植物基因组提取方法，公开了一种快速提取百合鳞茎DNA的方法，包括新鲜百合鳞茎样品研磨、加入预冷的预处理液去除杂质、加入预热的裂解液进行裂解、用氯仿和乙醇和异戊醇的混合溶液去除蛋白、用70%乙醇去除残留醇类物质和用TE溶液溶解保存DNA步骤。本方法能快速、简便、高效提取百合鳞茎中的完整基因组DNA，操作难度低，不受次生代谢物的污染，提取的DNA可以用于分子生物学分析，从而为百合的遗传多样性分析、种质资源保护和利用提供一项技术手段，具有重大科学意义和实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物基因组提取方法，尤其涉及了一种快速提取百合鳞茎DNA的方法。 
技术介绍
百合（Lilium.）为百合科百合属多年生草本球根植物，是世界上重要花卉品种之一，被誉为“球根花卉之王”，主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区，全球发现的品种达百种，其中我国是最主要的起源地，自然分布品种就有50多种。随着植物分子生物学研究的不断进步，分子生物技术已被广泛应用于植物资源鉴定、植物选种、育种和遗传改良等方面，而高质量DNA的提取是进行分子生物实验的基础。基因工程育种将是未来百合育种的主要研究方向和科研工作的重点，而任何一项基因工程技术均离不开DNA的提取和操作。 百合的鳞茎中富含多糖、酚、色素及多种次生代谢物质，百合中分离获得的DNA由于富含多酚，易被氧化成棕褐色，此外，由于多糖、单宁等物质与DNA的理化性质相似会结合成粘稠的胶状物，很难将其分离，因此，获得的DNA产量低、质量差、易降解，影响了DNA质量和纯度，不能进行酶切及作为模板进行试验。 目前对的植物叶片和罗布麻属植物的基因组DNA提取方法，均通过液氮冷冻研磨法，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速提取百合鳞茎DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取80～120mg新鲜百合鳞茎样品,放入离心管内，加入预冷的预处理液600～1000uL室温放置5～10min，4500～5500rpm离心5～8min，弃上清液；（2）向步骤（1）的离心沉淀物中迅速加入预热的CTAB提取缓冲液600～800ul，混合均匀，于60～65℃水浴40～50min；（3）向步骤（2）的混合物中加入400～500uL的抽提液，抽提液为体积比为76:20:4的氯仿和乙醇和异戊醇的混合液，颠倒混匀成乳浊液，于8000～12000rpm离心6～10min，留上清液；（4）向步骤（3）的上清液中加入0.6～0....

【技术特征摘要】
1.一种快速提取百合鳞茎DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）取80～120mg新鲜百合鳞茎样品,放入离心管内，加入预冷的预处理液
600～1000uL室温放置5～10min，4500～5500rpm离心5～8min，弃上清液；
（2）向步骤（1）的离心沉淀物中迅速加入预热的CTAB提取缓冲液600～800ul，
混合均匀，于60～65℃水浴40～50min；
（3）向步骤（2）的混合物中加入400～500uL的抽提液，抽提液为体积比为
76:20:4的氯仿和乙醇和异戊醇的混合液，颠倒混匀成乳浊液，于8000～12000rpm
离心6～10min，留上清液；
（4）向步骤（3）的上清液中加入0.6～0.8倍体积的预冷的异丙醇，混合均匀后
在冰冻条件下放置10～20分钟，离心，弃上清；
（5）用预冷70%的乙醇漂洗步骤（4）的离心沉淀物，室温干燥，加入180～220uL
1×TE溶液重悬沉淀，即得百合鳞茎DNA。
2.根据权利要求1所述的一种快速提取百合鳞茎DNA的方法，其特征在于：步
骤（1）加入预处理液前还需要将百合样品打磨成匀浆。
3.根据权利要求1所述的一种快速提取百合鳞茎DNA的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴超，郭方其，黎侠，丁晓瑜，林森洪，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33