本发明专利技术提供了转基因苜蓿事件KK179-2。本发明专利技术还提供了与所述事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商品以及对于所述事件是独特的并且通过将转基因DNA插入苜蓿植物的基因组来产生的DNA分子。本发明专利技术进一步提供了用于检测所述苜蓿事件核苷酸序列在样本中的存在的方法，用于检测诊断所述苜蓿事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供了转基因苜蓿事件KK179-2。本专利技术还提供了与所述事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商品以及对于所述事件是独特的并且通过将转基因DNA插入苜蓿植物的基因组来产生的DNA分子。本专利技术进一步提供了用于检测所述苜蓿事件核苷酸序列在样本中的存在的方法，用于检测诊断所述苜蓿事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。【专利说明】对应于转基因事件KK179-2的苜蓿植物和种子及其检测方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§ 119(e)有权要求于2011年6月30日提交的美国临时专利申请号61/503，373和2012年6月26日提交的美国临时专利申请号61/664，359的优先权，所述美国临时专利申请的公开内容通过引用整体并入本文。序列表的并入称为“57978_seq_listing.txt” 的序列表为 10，564 字节(在 MS-WINDOWS 中测量)，以电子形式提交，创建于2012年5月I日，并且通过引用并入本文。专利
本专利技术涉及苜蓿转基因事件KK179-2。本专利技术还提供了与所述事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商品，以及对于事件是独特的并且通过将转基因DNA插入苜蓿植物的基因组来产生的DNA分子。本专利技术进一步提供了用于检测所述苜蓿事件核苷酸序列在样本中的存在的方法，用于检测诊断所述苜蓿事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。专利技术背景苜蓿(Medicago sativa)是世界上栽培最多的豆类作物，其中美国是头号苜蓿生产国。生物技术的方法已应用于苜蓿以改善产品的农艺性状和质量。一种这样的农艺性状是增加的木质素含量。·木质素是第二丰富的陆地生物聚合物且占有机碳的30%。木质素对于细胞壁的结构完整性是至关重要的并且其赋予茎硬度和强度。木质素含量与奶牛的饲料消化率逆相关。可通过表达能够提供木质素的减少并且同时提供增加的苜蓿消化率的RNA抑制构建体来在转基因植物中获得此类减少。已知外源基因或抑制分子在植物中的表达受很多因素影响，这些因素例如使用的调控元件、转基因插入物的染色体定位、靠近转基因插入位点的任何内源调控元件的接近度(proximity)、以及环境因素例如光和温度。例如，已观察到在类似产生的事件之间在转基因抑制的总体水平上或转基因抑制的空间或时间模式上存在变化。为此原因，通常必需筛选数百个独立转化事件以最终鉴定对于商业农业目的有用的一个事件。一旦被鉴定为具有期望的抑制表型、分子特征和改善的性状，那么可使用植物育种方法将这样的事件用于将该改善的性状渗入其他遗传背景。所得的后代可含有转基因事件，并且因此可具有原始转化体的该性状的相同特征。这可用于产生许多不同的包含改良的性状并且经适当地改造适合于特定地方生长条件的作物品种。能够检测特定植物的转基因/基因组DNA的存在以便确定有性杂交的后代是否含有所关注的转基因/基因组DNA将是有利的。此外，用于检测特定植物的方法当遵守需要上市前批准和标记来源于转基因作物植物的食品的规程时将是有用的。抑制元素的存在或不存在可通过任何公知的核酸检测方法例如聚合酶链式反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交来检测。这些检测方法一般集中于常用的遗传元件例如启动子、终止子、标记基因等。这样，此类方法可能不用于区分不同转化事件，特别是使用相同DNA构建体产生的那些，除非邻近插入DNA(“侧翼DNA”)的染色体DNA的序列是已知的。事件特异性 PCR 测定例如由 Tavemiers 等(J.Agric.Food Chem.,53:3041-3052, 2005)进行了讨论，其中显示了转基因玉米品系Btll、Btl76和GA21以及油菜(canola)事件GT73的事件特异性跟踪系统。在该研究中，基于每个事件的基因组/转基因接合处的序列设计事件特异性引物和探针。转基因植物事件特异性DNA检测方法也在美国专利号7，632，985 ；7，566，817 ;7，368，241 ;7，306，909 ;7，718，373 ;7，189，514,7, 807，357 和 7，820，392 中描述。专利技术概述本专利技术为命名为事件KK179-2的苜蓿转基因事件，其具有以登录号PTA-11833保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的代表性种子样本。本专利技术提供了植物、种子、细胞、后代植物或植物部分，它们包含来源于包含事件KK179-2的植物、细胞、植物部分或种子的事件。本专利技术因此包括，但不限于花粉、胚珠、花、牙、根和叶。本专利技术的一个方面提供了用于检测来自苜蓿事件KKl79-2植物或种子的DNA转基因/基因组接合区域的存在的组合物和方法。提供了包含选自SEQ ID NO=USEQ ID NO:2及其互补序列的至少一个转基因/基因组接合DNA分子的DNA分子，其中接合分子横跨插入位点。苜蓿事件KK179-2和包含这些DNA分子的种子是本专利技术的方面。提供了来自苜蓿事件KK179-2的DNA转基因/基因组区域SEQID NO:3或其`互补序列的新颖DNA分子。其基因组中包含SEQ ID NO:3的苜蓿植物和种子为本专利技术的方面。在本专利技术的另一方面，提供了为DNA转基因/基因组区域SEQ ID NO:4或其互补序列的DNA分子，其中该DNA分子在苜蓿事件KK179-2中是新颖的。其基因组中包含SEQ ID NO:4的苜蓿植物和种子为本专利技术的方面。本专利技术提供了涉及事件KK179-2的DNA分子。这些DNA分子可包含代表或来源于如下的核苷酸序列:事件KK179-2的转基因插入与侧翼基因组DNA的接合处、和/或位于插入DNA侧翼的基因组DNA的区域、和/或位于插入位点侧翼的所整合的转基因DNA的区域、和/或所整合的转基因表达盒的区域、和/或任何此类区域的连续序列。本专利技术还提供了用作诊断该事件的引物和探针的DNA分子。提供了包含这些分子的植物、细胞、植物部分、商品、后代和种子。根据本专利技术的一个方面，提供了用于检测来自命名为KK179-2的新型苜蓿植物的转基因/基因组插入区域的存在的组合物和方法。提供了DNA序列，其包含选自SEQ ID NO:I(对应于 SEQ ID NO:6 的位置 1038 至 1057，图1 )和 SEQ ID N0:2(对应于 SEQ ID NO:6的位置3620至3639，图1)及其互补序列的KK179-2的至少一个接合序列；其中接合序列为横跨插入到基因组中的异源DNA与苜蓿细胞基因组DNA连接的点的核苷酸序列并且在含有苜蓿DNA的生物样本中该序列的检测诊断苜蓿事件KK179-2DNA在所述样本中的存在(图1)。苜蓿事件KK179-2和包含这些DNA分子的苜蓿种子为本专利技术的方面。根据本专利技术的另一方面，提供了用于DNA检测方法的两个DNA分子，其中第一 DNA分子包含具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的DNA分子的转基因区域的任何部分的足够长度的连续多核苷酸的核苷酸序列的多核苷酸，并且第二 DNA分子包含SEQ ID NO:3的5’侧翼苜蓿基因组DNA区域的任何部分的类似长度的多核苷酸，其中所述DNA分子用作DNA引物，当所述DNA引物与来源于事件KK179-2的模板一起用于扩增反应时以产生诊断样本中的事件KK179-2DNA的扩增子。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种命名为KK179‑2的苜蓿植物种子，其具有以专利保藏号PTA‑11833保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的代表性种子。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·利弗林，D·惠伦，S·坦普尔，M·麦卡斯林，M·S·雷迪，W·希亚特，W·伯恩斯，R·E·塞尔尼，
申请(专利权)人：孟山都技术公司，福拉格遗传国际有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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