【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种利用寡核苷酸和可消除的质粒共转化用于对大肠杆菌基因组上的必需基因进行点突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：将寡核苷酸和可消除的质粒pLS1755共转化至表达重组酶的大肠杆菌;筛选氨苄青霉素抗性菌株，再从氨苄青霉素抗性菌株中筛选寡核苷酸发生重组而实现的点突变菌株；然后将再消除点突变菌株中的质粒pLS1755；所述寡核苷酸长度为91个碱基，第46个碱基为突变位点，寡核苷酸的前面四个碱基以硫磷酰基连接；所述质粒pLS1755通过以下构建得到：以pST98‑AS为模板，正向引物含酶切位点、50bp LacZ片段和18个碱基的I‑SceI酶切位点，反向引物含酶切位点和18个碱基的I‑SceI酶切位点，PCR扩增得到tetR‑ptetA‑I‑SceI的片段，酶切后克隆至R6K复制子和氨苄青霉素抗性基因的载体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：尚广东，骆希，张青，杨晨，花月，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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