一种猴头菌大分子量多糖及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种猴头菌大分子量多糖及其制备方法，其是通过水提醇沉、冷冻、溶解制备得到的。本发明专利技术猴头菌大分子量多糖分子量大于100万，且色素少，多糖含量大大提高，超过80%；对RAW264.7巨噬细胞株释放NO有明显地促进作用，从而可增强机体免疫力、抗肿瘤能力。

【技术实现步骤摘要】
一种猴头菌大分子量多糖及其制备方法
本专利技术涉及食药用菌提取纯化领域，具体地涉及一种猴头菌大分子量多糖及其制备方法。
技术介绍
猴头菌(Hericiumerinaceus)是一种食药两用菌，肉嫩味美，营养丰富。在古代，人们把它与鳖鱼、海参、熊掌刺并列为“四大名菜”，并且有“山珍猴头，海味燕窝”的美称。文献报道，猴头菌具有抗溃疡、抗炎症、抗肿瘤、降血糖、抗衰老、抗突变、保肝等多方面的药理作用。猴头菌多糖作为猴头菌中最重要的活性成分之一，具有增强机体免疫、抗肿瘤、抗氧化延缓衰老、抗炎症等多种生物活性和药理作用。对猴头菌多糖的研究，不同的学者、不同的品种、不同的提取分离纯化方法，结果不同，但目前关于猴头菌多糖的研究主要集中在分子量1-10KDa部分，对其中大分子量部分研究较少，且分离纯化方法普遍采用水提醇沉、离子交换、树脂脱色、凝胶柱纯化等方法，得到的多糖纯度虽高，但操作过程复杂，耗时长，且得率非常低，不利于规模化生产应用。
技术实现思路
本专利技术首先提供了一种猴头菌大分子量多糖，其是通过如下方法制备得到的：①水提醇沉：将猴头菌的沸水提取液，浓缩，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量达到50-70%，4℃静置过夜，离心收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，溶液置于-20～-70℃冷冻，得到冷冻液；③溶解：将步骤②得到的冷冻液于70-100℃水浴加热解冻，离心收集沉淀；即为猴头菌大分子量多糖。优选的，本专利技术的猴头菌大分子量多糖可通过如下方法制备得到：①水提醇沉：将猴头菌的沸水提取液，浓缩，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量达到50-70%，4℃静置过夜，离心收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，溶液置于-20～-70℃冷冻，得到冷冻液；③溶解：将步骤②得到的冷冻液于70-100℃水浴加热解冻，离心收集沉淀；④将步骤③得到的沉淀用水稀释后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比浓度达到20-30%，离心收集沉淀，再用质量百分比浓度为20-30%的乙醇溶液洗涤沉淀2-5次，收集沉淀；将沉淀加水溶解后挥去残留乙醇，冷冻干燥即得到猴头菌大分子量多糖。具体的说，本专利技术的高纯度猴头菌大分子量多糖，是用如下方法制备得到的：①水提醇沉：将新鲜猴头菌的沸水提取液，过滤，滤液减压浓缩至可溶性固形物含量为18°Brix，冷却至室温后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量为50-70%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，离心去除杂质，上清液置于-20～-70℃冷冻过夜，得到冷冻液；③溶解：将步骤②中得到的冷冻液置于70-100℃水浴加热解冻，离心，收集沉淀，即为猴头菌大分子量多糖。进一步优选的，本专利技术的猴头菌大分子量多糖是通过如下方法制备得到的：①水提醇沉：将新鲜猴头菌的沸水提取液，过滤，滤液减压浓缩至可溶性固形物含量为18°Brix，冷却至室温后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量为50-70%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，离心去除杂质，上清液置于-20～-70℃冷冻过夜，得到冷冻液；③溶解：将步骤②中得到的冷冻液置于70-100℃水浴加热解冻，离心，收集沉淀；④将步骤③得到的沉淀用水稀释溶解至可溶性固形物含量为1.0°Brix后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比浓度达到20-30%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀，沉淀用重量百分比浓度为20-30%的乙醇溶液洗涤3-5次，收集沉淀；沉淀加水溶解后挥去残留乙醇，冷冻干燥即得到猴头菌大分子量多糖。本专利技术还提供了制备上述猴头菌大分子量多糖的方法，该方法为：①水提醇沉：将猴头菌的沸水提取液，浓缩，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量达到50-70%，4℃静置过夜，离心收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，溶液置于-20～-70℃冷冻，得到冷冻液；③溶解：将步骤②得到的冷冻液于70-100℃水浴加热解冻，离心收集沉淀，即为猴头菌大分子量多糖。本专利技术制备的猴头菌大分子量多糖分子量大，且色素少，多糖含量大大提高，超过80%。且本专利技术提供的制备方法简便、快速、高效、成本低、绿色环保，适用于规模化生产的应用。并且本专利技术制备的猴头菇大分子量多糖对RAW264.7巨噬细胞株释放NO有明显地促进作用，从而增强机体免疫力、抗肿瘤能力。具体实施方式本专利技术使用的猴头菌由上海市农业科学院食用菌所（上海国森生物科技有限公司栽培，菌株编号：H0605）提供；本专利技术使用的无水乙醇购于国药集团化学试剂有限公司实施例11.水提醇沉：以猴头菌成熟期新鲜子实体为原料，切成约2cm碎块，称取2kg原料沸水提取后，提取液用200目滤网过滤后，4000rpm，30min离心收集上清，减压浓缩至可溶性固形物含量为18°Brix（其中的可溶性固形物采用手持式数显糖度计测定。），冷却至室温后添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量为70%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀。2.冷冻：将上述沉淀加水溶解后，10000g，离心15min去除杂质，上清置于-20℃冷冻。3.溶解：将上述冷冻液置于80℃水浴加热解冻，10000g，离心20min收集沉淀；4.乙醇沉淀及洗涤：将上述沉淀用水溶解稀释至可溶性固形物含量为1.0°Brix后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比浓度达到20%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀，沉淀用20%乙醇洗涤3次，收集沉淀。5.冷冻干燥：上述沉淀加水溶解后挥去残留乙醇，冷冻干燥即获得猴头菌大分子量多糖。多糖含量检测：采用苯酚-硫酸法。分子量测定：采用HPLC法。经测定制备的猴头菌多糖的多糖含量为79.6%，分子量325KDa。实施例21.水提醇沉：以猴头菌成熟期新鲜子实体为原料，切成约2cm碎块，称取1kg原料沸水提取后，提取液用200目滤网过滤后，4000rpm，30min离心收集上清，减压浓缩至可溶性固形物含量为18°Brix，冷却至室温后添加无水乙醇至乙醇质量百分比浓度为60%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀。2.冷冻：将上述沉淀加水溶解后，10000g，离心15min去除杂质，上清置于-20℃冷冻。3.溶解：将上述冷冻液置于100℃水浴加热解冻，10000g，离心20min收集沉淀；4.乙醇沉淀及洗涤：将上述沉淀用水溶解稀释至可溶性固形物含量为1.0°Brix后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比浓度为20%，4℃静置过夜，10000g，离心15min收集沉淀，沉淀用20%乙醇洗涤5次。5.冷冻干燥：沉淀加水溶解后挥去残留乙醇，冷冻干燥即获得猴头菌大分子量多糖。多糖含量检测：采用苯酚-硫酸法。分子量测定：采用HPLC法。经测定制备的猴头菌多糖的多糖含量为81.1%，分子量312KDa。实施例3体外刺激巨噬细胞释放NO活性测定本实施例中RAW264.7骨髓巨噬细胞株，购自美国国家菌种保藏中心（ATCCnumberTIB-71TM）；本实施例中DMEM、RPMI1640购于GIBCO公司。供试样品的配制精确称取实例1、2制备的猴头菌多糖样品于灭菌的eppendorf管中，用PBS缓冲液配置成浓度5mg/mL。充分溶解后以12000rpm/min离心30min，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猴头菌大分子量多糖，其特征在于其是通过如下方法制备得到的：①水提醇沉：将猴头菌的沸水提取液，浓缩，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量达到50‑70%，4℃静置过夜，离心收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，溶液置于‑20～‑70℃冷冻，得到冷冻液；③溶解：将步骤②得到的冷冻液于70‑100℃水浴加热解冻，离心收集沉淀，即为猴头菌大分子量多糖。

【技术特征摘要】
1.一种制备猴头菌大分子量多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：①水提醇沉：将猴头菌的沸水提取液，浓缩，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量达到50-70％，4℃静置过夜，离心收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，溶液置于-20～-70℃冷冻，得到冷冻液；③溶解：将步骤②得到的冷冻液于80-100℃水浴加热解冻，离心收集沉淀，即为猴头菌大分子量多糖。2.根据权利要求1所述的制备猴头菌大分子量多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：①水提醇沉：将猴头菌的沸水提取液，浓缩，添加无水乙醇至乙醇质量百分比含量达到50-70％，4℃静置过夜，离心收集沉淀；②冷冻：将上述沉淀加水溶解后，溶液置于-20～-70℃冷冻，得到冷冻液；③溶解：将步骤②得到的冷冻液于80-100℃水浴加热解冻，离心收集沉淀；④将步骤③得到的沉淀用水稀释后，添加无水乙醇至乙醇质量百分比浓度达到20-30％，离心收集沉淀，再用质量百分比浓度为20-30％的乙醇溶液洗涤沉淀2-5次，收集沉淀；将沉淀加水溶解后挥去残留乙醇，冷冻干燥即得到猴头菌大分子量多糖。3.根据权利要求1所述的制备猴头菌大分子量多糖的方法，其特征在于其包括如下步骤：①水提醇沉：将新鲜猴头菌的沸水提取液，过滤，滤液减压浓缩至可溶性固形物含量为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴迪，杨焱，唐川，刘艳芳，张劲松，汪雯翰，颜梦秋，唐庆九，唐传红，冯娜，周帅，贾薇，张忠，冯杰，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31