ADP受体p2y12在血管生成中的应用制造技术

本发明专利技术涉及ADP受体p2y12在血管生成中的应用。具体地，ADP的受体p2y12特异地表达于血管内皮细胞，用p2y12特异的抑制剂抑制p2y12的表达，体节间血管出现生长缺陷；p2y12的配体ADP也同样参与血管新生，利用高选择性拮抗剂阻断ADP对p2y12的激活，出现与上述相同的异常；并且ADP-p2y12信号通过调控尖端细胞行为，即迁移和增殖参与血管新生过程；反之，过表达p2y12可以促进尖端细胞命运的获得，表现为出现过度迁移的内皮细胞及参与体节间血管形成的内皮细胞数目显著增加；此外，ADP-p2y12信号通过抑制notch通路，从而起到调节体内血管新生的作用。本发明专利技术为干预血管新生相关疾病提供了新的靶点。

【技术实现步骤摘要】
ADP受体p2y12在血管生成中的应用
本专利技术属于发育生物学和生物医学领域，具体地，ADP受体p2y12在血管生成中的应用。
技术介绍
血管新生是指在原有毛细血管网的基础上，通过血管内皮细胞增殖、迁移进而形成新生血管的过程。血管新生在体内胚胎发育、损伤修复等生理过程中发挥重要作用，同时也是众多新生血管性疾病，如肿瘤生长与转移、增殖性糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、类风湿关节炎等疾病的主要病理变化。因此新生血管抑制剂的研究与应用对于一些难治性新生血管相关疾病具有重要意义。在血管新生的过程中，不同的血管内皮细胞有不同的等级，也具有不同的细胞命运，因此内皮细胞之间表现出非常不同的细胞行为。依细胞学行为的不同，可以将血管内皮细胞分为血管内皮尖端细胞和血管内皮柄细胞。目前已知血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，vegf)与notch信号通路的相互作用在细胞命运决定中发挥重要作用。在血管内皮尖端细胞表达的notch配体dll4可以激活其临近内皮细胞上的notch受体以抑制vegfr3的表达，使其不能获得尖端细胞的命运。尽管如此，何种信号通路控制了尖端细胞dll4的表达水平尚不明确。本领域目前对于血管新生中信号调节的路径和其中各个因子的作用还不了解，因此迫切需要进行此方面的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供ADP受体p2y12在血管生成中的应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种p2y12蛋白的抑制剂、或p2y12基因的抑制剂的用途，它们被用于制备预防或治疗肿瘤的药物组合物；和/或用于制备抑制血管生成的药物组合物。在另一优选例中，所述的p2y12蛋白是ADP的受体蛋白。在另一优选例中，所述的p2y12蛋白选自下组：(A)氨基酸序列如SEQIDNO.:1所示的多肽；(B)将SEQIDNO.:1所示的氨基酸序列经过一个或几个(通常为1-60个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的p2y12蛋白衍生物，或其活性片段；(C)序列与SEQIDNO.:1所示的氨基酸序列相比，同源性≥90%，较佳地≥95%，更佳地≥98%，最佳地≥99%的p2y12蛋白衍生物，或其活性片段。在另一优选例中，所述的p2y12基因编码p2y12蛋白。在另一优选例中，所述的p2y12基因为编码如SEQIDNO.:1所示p2y12蛋白的多核苷酸序列。在另一优选例中，所述的p2y12基因为如SEQIDNO.:2所示的多核苷酸序列。在另一优选例中，所述的p2y12蛋白(氨基酸序列如SEQIDNO.:1所示)或p2y12基因(核苷酸序列如SEQIDNO.:2所示)来源于人。在另一优选例中，所述的p2y12蛋白为氨基酸序列如SEQIDNO.:3所示的多肽。在另一优选例中，所述的氨基酸序列如SEQIDNO.:3所示的p2y12蛋白来源于斑马鱼。在另一优选例中，所述p2y12蛋白的抑制剂选自下组：p2y12蛋白的抗体、p2y12蛋白的结合蛋白、p2y12蛋白拮抗剂、或其组合。在另一优选例中，所述的p2y12蛋白拮抗剂选自下组：MRS2395、clopidogrel(氯吡格雷)、ticagrelor(替格瑞洛)、或其组合。在另一优选例中，所述p2y12基因的抑制剂为：p2y12基因特异性的RNAi、p2y12基因特异性的microRNA、p2y12基因特异性的寡核苷酸或其衍生物、抑制p2y12基因启动子的抑制剂、或其组合。在另一优选例中，所述的p2y12基因的抑制剂为吗啉基寡核苷酸(morpholino)。在另一优选例中，所述的吗啉基寡核苷酸的结构如SEQIDNO.:4所示。在另一优选例中，所述的肿瘤选自下组：乳腺癌、肺癌、结直肠癌、胰腺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、胃癌、肝癌、前列腺癌、卵巢癌、皮肤癌、宫颈癌、或其组合。在另一优选例中，所述的肿瘤选自下组：乳腺癌、肺癌、结直肠癌、或其组合。在本专利技术的第二方面，提供了一种p2y12蛋白或p2y12基因的激动剂或促进剂的用途，它们被用于制备促进血管生成的药物组合物。在本专利技术的第三方面，提供了一种药物组合物，包括药学上可接受的载体和有效量的活性成分，其中所述的活性成分为：p2y12蛋白和/或p2y12基因的抑制剂，或p2y12蛋白或p2y12基因的激动剂或促进剂。在另一优选例中，活性成分为p2y12蛋白和/或p2y12基因的抑制剂的药物组合物用于预防或治疗肿瘤；和/或用于抑制血管生成。在另一优选例中，活性成分为p2y12蛋白或p2y12基因的激动剂或促进剂的药物组合物用于促进血管生成。在另一优选例中，所述p2y12蛋白的抑制剂选自下组：p2y12蛋白的抗体、p2y12蛋白的结合蛋白、p2y12蛋白拮抗剂、或其组合。在另一优选例中，所述的p2y12蛋白拮抗剂选自下组：MRS2395、clopidogrel(氯吡格雷)、ticagrelor(替格瑞洛)、或其组合。在另一优选例中，所述p2y12基因的抑制剂为：p2y12基因特异性的RNAi、p2y12基因特异性的microRNA、p2y12基因特异性的寡核苷酸或其衍生物、抑制p2y12基因启动子的抑制剂、或其组合。在另一优选例中，所述的p2y12基因的抑制剂为吗啉基寡核苷酸(morpholino)。在本专利技术的第四方面，提供了一种体外非治疗性调节血管生成的方法，包括步骤：(1)在p2y12蛋白和/或p2y12基因的抑制剂存在的条件下，培养细胞或组织，从而抑制血管生成；或(2)在p2y12蛋白和/或p2y12基因的激动剂或促进剂存在的条件下，培养细胞或组织，从而促进血管生成。在另一优选例中，与对照的细胞或组织相比，加入p2y12蛋白和/或p2y12基因的抑制剂的细胞或组织，血管生成降低10%以上，较佳地降低20%以上，更佳地降低30%以上，更佳地降低40%以上，更佳地降低50%以上，更佳地降低60%以上，更佳地降低70%以上，更佳地降低80%以上，更佳地降低90%以上，最佳地完全没有血管生成。在另一优选例中，与对照的细胞或组织相比，加入p2y12蛋白抑制剂的细胞或组织，p2y12蛋白的活性或表达降低10%以上，较佳地降低20%以上，更佳地降低30%以上，更佳地降低40%以上，更佳地降低50%以上，更佳地降低60%以上，更佳地降低70%以上，更佳地降低80%以上，更佳地降低90%以上，最佳地完全没有p2y12蛋白的活性或表达。在另一优选例中，与对照的细胞或组织相比，加入p2y12基因抑制剂的细胞或组织p2y12基因的表达降低10%以上，较佳地降低20%以上，更佳地降低30%以上，更佳地降低40%以上，更佳地降低50%以上，更佳地降低60%以上，更佳地降低70%以上，更佳地降低80%以上，更佳地降低90%以上，最佳地完全没有p2y12基因的表达。在另一优选例中，与对照的细胞或组织相比，加入p2y12蛋白和/或p2y12基因的激动剂或促进剂的细胞或组织，血管生成提高10%以上，较佳地提高20%以上，更佳地提高30%以上，更佳地提高40%以上，更佳地提高50%以上。在另一优选例中，与对照的细胞或组织相比，加入p2y12蛋白激动剂或促进剂的细胞或组织，p2y12蛋白的活性或表达提高本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种p2y12蛋白的抑制剂、或p2y12基因的抑制剂的用途，其特征在于，它们被用于制备预防或治疗肿瘤的药物组合物；和/或用于制备抑制血管生成的药物组合物。

【技术特征摘要】
1.一种筛选用于制备调节血管生成的潜在物质的方法，其特征在于，包括步骤：(1)分别向检测体系中加入待检测的物质或阴性对照物，并且所述的阴性对照物对血管新生没有调节作用；和(2)分别检测加入了待检测的物质的样本和加入了阴性对照物的样本中p2y12蛋白的表达水平或活性、和/或p2y12基因的表达水平；如果与加入了阴性对照物的样本相比，加入了待检测的物质的样本的p2y12蛋白的表达水平或活性、和/或p2y12基因的表达水平发生显著变化，则是潜在的用于制备调节血管生成的物质；其中，所述的检测体系为人血管内皮细胞体系，并且所述血管生成是指内皮尖端细胞的迁移和增殖。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，如果与加入了阴性对照物的样本相比，加入了待检测的物质的样本的p2y12蛋白的表达水平或活性、和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：荆清，李文庆，李方方，谌健，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31