【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种试验方法，特别是涉及一种研究高压氧对脑出血大鼠脑内血管新生影响的方法。
技术介绍
脑出血（intracerebralhemorrhage,ICH）后新生血管形成增加受损脑组织的供血供氧，有利于脑组织修复。高压氧（hyperbaricoxygen,HBO）可增加脑组织的供氧，改善微循环，促进损伤组织血管再生，促进神经功能恢复。但国内外关于高压氧对脑出血血管新生影响机制的研究较少，机理尚不清楚。
技术实现思路
10﹪水合氯醛经腹腔麻醉大鼠后，将大鼠固定在鼠脑立体定位仪上，按无菌操作原则，局部消毒进行造模；高压氧处理：将高压氧组大鼠在模型制作3小时后置于动物舱内，关紧舱门，以5～8L/min氧流量均匀变速加压，加压时间为15min，当舱内压力达到0.20MPa时开始稳压，稳压时氧浓度85％以上，稳压60min后匀速减压，减压时间为15min，总治疗时间为90min，脑出血组和假手术组大鼠也置于动物舱内90min，不加压，吸空气，三组大鼠均1次/
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种研究高压氧对脑出血大鼠脑内血管新生影响的方法，包括以下步骤：
1）10﹪水合氯醛经腹腔麻醉大鼠后，将大鼠固定在鼠脑立体定位仪上，按无菌操作原则，
局部消毒进行造模；
2）高压氧处理：将高压氧组大鼠在模型制作3小时后置于动物舱内，关紧舱门，以5～
8L/min氧流量均匀变速加压，加压时间为15min，当舱内压力达到0.20MPa时开始稳压，稳
压时氧浓度85％以上，稳压60min后匀速减压，减压时间为15min，总治疗时间为90min，
脑出血组和假手术组大鼠也置于动物舱内90min，不加压，吸空气，三组大鼠均1次/d，连续
4d、7d、14d、21d、28d；
3）将脑组织置于冰盘上DEPC水处理的培养皿上，分离右侧脑组织，取以苍白球（血肿）
为中心的基底节部分脑髓质约100mg置于冻存管中，浸入液氮后，转移至-80℃保存备用，
HE染色：切片脱蜡至水，梯度酒精脱水，苏木精液染胞核3min，1%盐酸酒精分化30s，1%
氨水反蓝30s，1%伊红复染胞浆1.5min，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微
镜下观察血肿周围脑组织新生血管形成情况，进行免疫组织化学分析和免疫荧光定量
RT-PCR。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述免疫组织化学分析步骤包括：切片脱蜡至
水，放于3%H2O2/甲醇溶液中室温处理15min，0.01mol/L的枸椽酸盐缓冲液微波抗原修复
30min，PBS洗5min，滴加正常山羊血清封闭液37℃孵育30min，甩去多余液体，滴加一抗
工作液，4℃冰箱孵育过夜，然后滴加生物素化二抗工作液--山羊抗兔IgG，37℃孵育45min，
再滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液37℃孵育30min，DAB显色5min，蒸馏水充分冲洗后
苏木...
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