本发明专利技术涉及一种高效的解磷菌黑曲霉(Aspergillusniger)。本发明专利技术所述枯草芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC?No.8240。本发明专利技术涉及的黑曲霉(Aspergillusniger)具有较高的解磷作用，不污染环境，生态安全。该高效黑曲霉(Aspergillusniger)单独使用或与其它植物生长所需要的有机、无机营养成分一起使用，制备成生物复合肥料具有提高产量和改良品质的作用。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种高效的解磷菌黑曲霉(Aspergillusniger)。本专利技术所述枯草芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC?No.8240。本专利技术涉及的黑曲霉(Aspergillusniger)具有较高的解磷作用，不污染环境，生态安全。该高效黑曲霉(Aspergillusniger)单独使用或与其它植物生长所需要的有机、无机营养成分一起使用，制备成生物复合肥料具有提高产量和改良品质的作用。【专利说明】一种具有高效解磷作用的黑曲霉菌株及其应用
本专利技术涉及微生物和生物肥料领域，特别是涉及黑曲霉，具体而言，本专利技术涉及一种高效解磷作用的黑曲霉及其应用。
技术介绍
磷肥能够促进植物花芽分化，提早开花结果，促进幼苗根系生长和改善果实品质。施磷能够促进各种代谢正常进行，植物生长发育良好，同时提高植物的抗寒性和抗旱性。由于磷与糖类、蛋白质和脂肪的代谢和三者相互转变都有关系，多以不论栽培粮食作物、豆类作物和油类作物都需要磷肥。缺磷时，蛋白质合成受阻，新的细胞质和细胞核形成较少，影响细胞分裂，生长缓慢，也少，分枝或分蘖减少，植株矮小，叶片暗绿，可能是细胞生长慢，叶绿素含量相对提高。某些植物叶子有时呈红色或紫色。因为缺磷阻碍了糖分运输，也自己累了大量的糖分，有利于黄色素苷的形成。缺磷时，开花期和成熟期都延迟，产量降低，抗性减弱。但我国有74%的耕地土壤缺磷，土壤中95%以上的磷为无效形式，植物很难直接吸收利用，此外，大量使用化肥明显造成土壤板结、土壤保水力下降、草地退化、荒漠化严重等不良后果。因此，提高磷的利用率一直是农学、土壤学、生态环境和微生物学研究者关注的执占。人们在20世纪初开始注意到微生物与土壤磷之间的关系。Sackett (1908年)发现一些难溶性的复合物施入土壤中，可以被作为磷源而应用，他们从土壤中筛选出50株细菌，其中36株在平板上形成了肉眼可见的溶磷圈。1948年Gerretsen发现植物施入不溶性的磷肥，经接种土壤微生物后，促进了植株的生长，增加磷的吸收。他分离出了这些微生物，发现这些微生物可帮助磷矿粉的溶解。从此，许多科学家致力于解磷菌的研究，相继报道了许多微生物具有解磷作用。`本申请专利技术人经过多年悉心研究，从植物根际土壤中分离到一株新的黑曲霉菌株，该菌株具有较强的解磷作用，能把无效的磷有效的转变成可用磷。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的黑曲霉菌株，所述菌株具有较好的解磷作用。本专利技术所述的黑曲霉(Aspergillus niger)已经于2013年9月24日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏编号为CGMCC N0.8240.进一步地，本专利技术提供上述黑曲霉在解磷方面的用途。进一步地，本专利技术的黑曲霉可以制成微生物菌剂，即将所述菌株在H)培养液中(马铃薯200克，葡萄糖20克，水1000 mL)培养，培养温度为27 °C，培养天数为5天，转速为200 rpm，培养液过滤后，将菌液细胞数调节为IO8个/mL，即制得本专利技术的黑曲霉微生物菌剂。本专利技术所提供的黑曲霉是从植物根际土壤中分离得到的，其实验室命名为菌株Fdpal0菌株Fdpal在PDA固体培养基在PDA培养基上培养，肉眼观察菌落生长特征、测量菌落生长速度，光学显微镜下观察菌丝形状及孢子大小、形状、类型等。通过观察发现，自中伸出，直径15~20pm，长约I~3mm，壁厚而光滑。顶部形成球形顶囊，其上全面覆盖一层梗基和一层小梗，小梗上长有成串褐黑色的球状，直径2.5~4.0 μ m。分生孢子头球状，直径700~800 μ m，褐黑色。蔓延迅速，初为白色，后变成鲜黄色直至黑色厚绒状，背面无色或中央略带黄褐色。根据《真菌鉴定手册》等方法初步鉴定菌株Fdpal为黑曲霉属，利用分子生物学技术对其ITS序列鉴定后该菌为黑曲霉Aspergillus niger。本专利技术的效果 在平板法中，即将解磷菌在含有难溶性磷酸盐或有机磷的固体培养基上培养，菌落周围产生较大的溶磷圈，本专利技术的黑曲霉经磷钥蓝分光光度法测得其解磷效果为537.142mg/L,说明本专利技术菌株具有较强的解磷作用。【具体实施方式】本专利技术公开了一种高效解磷菌黑曲霉，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数来实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，这些都被视为包括在被专利技术内。本专利技术所述的黑曲霉已经通过较规范的实施例进行了描述，相关人员明显能在不摆脱本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动和适当的变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术。实施例1微生物从土样中的分离 从河北衡水湖附近采回的黄顶菊根际土壤，称取IOg 土壤用90mL无菌水进行混匀，然后在从中取ImL样用9mL无菌水进行稀释`，以此进行6次，稀释成10_6、10_7、10_8 3个梯度，移取最后三个梯度的菌悬液100微升，涂布于蒙金娜无机磷培养基(葡萄糖10 g，(NH4)2SCM0.5 g, NaCl 0.3 g，KCl 0.3 g，FeS047H20 0.03 g，MnS044H20 0.03 g，MgS047H20 0.3 g,磷矿粉10 g，酵母膏0.4 g，琼脂15 g，蒸馏水1000 ml, pH 7.0~7.5)平板上，以最后一次的稀释液作为对照，于28°C下培养，并每24h观察一次。选择对照中无菌落，而此前的稀释液中长出菌落的菌株，根据菌落形态、颜色等特征跳取单菌落于液体蒙金娜无机磷培养基中培养，并纯化编号。实施例2解磷菌株的筛选 在无菌环境下，将所有菌株接种到蒙金娜培养基上，30°C培养7天。观察平板中菌落生长情况，根据产生解磷圈大小筛选出高效解磷菌。实施例3菌株的ITS序列测定和分析及生理生化试验鉴定 ITS鉴定:将筛选菌株的孢子液接入ro液体培养基中，28°C摇床培养48 h，过滤获得菌丝，提取真菌基因组DNA。以提取的真菌DNA作为模板，以ITS5和ITS8引物对进行PCR扩增。PCR反应体系为25 μ 1，反应体系为:基因组DNA IyL, 10XPCR buffer 2.5 μ L，NSl 弓丨物 I μ L, NS8 弓丨物 I μ L, dNTPs 2 μ L, Taq 酶 0.25 μ L, ddH20 17.25 μ L。反应条件为:94°C 5 min，94°C 30 s，57°C 50 s，72°C 50 s ;循环 30 次；72°C 10 min。PCR 扩增产物送上海生工生物技术有限公司测序后，将获得的DNA序列，输入NCBI，用Blast程序与数据库中的所有序列进行比较分析。同源比较结果如下: 将该PCR扩增产物在GenBank中进行blast比对结果表明，本专利技术的菌株Fdpal与其高度同源的50个菌种均是黑曲霉属，其同源性均在99%以上。经过序列分析显示，本专利技术所分离的菌株属于黑曲霉。实施例4本专利技术所述黑曲霉微生物菌剂的制备 将保藏编号为CGMCC N0.8240的黑曲霉在H)培养液中培养，培养液温度为27 V,天数为5天,转速为200rpm, pH值为8。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黑曲霉(Aspergillus?niger)，其特征在于，保藏编号为CGMCC?No.?8240，其于2013年9月24日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：时翠平，赵斌，霍静倩，董金皋，张金林，齐萌，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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