本发明专利技术公开了具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌及其制备方法和应用。本发明专利技术菌株名称为B-RS-06，保藏编号为CGMCCNo.5352。本发明专利技术从植物根际土壤分离出菌株，并将菌株的代谢物作用于植物寄生线虫。本发明专利技术的杀线虫剂原材料来源于植物根际土壤，对于环境及植物、人、动物等所有生物无不良影响，而且生产成本低，生产过程简单，不污染环境。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌及其制备方法和应用。本专利技术菌株名称为B-RS-06，保藏编号为CGMCCNo.5352。本专利技术从植物根际土壤分离出菌株，并将菌株的代谢物作用于植物寄生线虫。本专利技术的杀线虫剂原材料来源于植物根际土壤，对于环境及植物、人、动物等所有生物无不良影响，而且生产成本低，生产过程简单，不污染环境。【专利说明】具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌及其制备方法和应用，属于微生物农药
。
技术介绍
植物寄生线虫是植物的主要病原物之一，是我国乃至世界农业生产上一类重要的土传病害。据FAQ的保守估计，全世界每年因线虫的危害所造成的经济损失约1000亿美元。我国每年仅大豆因线虫造成的损失就达I亿美元，各种蔬菜线虫的危害损失达30亿美元以上。目前，生产上急需防治线虫的作物面积至少在5000万亩。严重威胁我国农林业生产的线虫病害有各种作物的根结线虫spp.)病、马铃薯腐烂莖线虫(Λ? tylenchus des true tor )病、胞囊线虫(/? terodera spp.)病、水稻干尖线虫(.Aphelenchoides Ae1S1Seja')病和松材线虫(及xylophiIusV病等。植物寄生性线虫病的防治目前多采用化学防治、轮作及抗病品种，但效果均不太理想，且存在弊端多。如目前使用的化学杀线虫剂多为剧毒或高毒、高残留农药，对土壤微生物、植物、水源和大气层带来严重污染或破坏，而且药物在植物体内残留会直接对人类造成危害。因此，急需开发对环境友好，对人、畜无毒的防治植物寄生线虫的药剂。植物寄生线虫生防细菌的研究是最近几年兴起的新的研究热点，越来越多的细菌被分离，不同的作用方式被报道。目前主要研究的有植物根围促生细菌(Plantgrowth-promoting rhizobacteria, PGPR)、穿刺巴氏杆菌ira/75.)、假单胞杆菌spp.)、苏云金芽孢杆菌等,它们在线虫生物防治中有着巨大的开发潜力，其价值也为人们逐渐认识。如PGPR主要通过诱导作物的系统抗性来防治作物病虫害；穿刺巴氏杆菌为线虫专性寄生菌，对线虫防效显著，但是该菌必须依靠线虫才能大量繁殖，而线虫的生长又必须通过寄主植物来实现，故大量生产受到限制。此外，铜绿假单胞菌0°.aerwgifliosa)和突光假单孢菌0°./Ywore1Scefl1S)也具有防治根结线虫病的能力，而且荧光假单孢菌产生的一种胞外蛋白酶在防治南方根结线虫(#.的过程中发挥了重要作用。苏云金芽孢杆菌在微生物防治病虫害方面占有极其重要的地位，其伴孢晶体蛋白具有杀线虫能力。植物根际微生物定殖于植物根际系统，通过产生抵抗多种病原菌的抗生素类物质或毒素，帮助植物抵抗生物类侵害，包括病原细菌、真菌、病毒及线虫等，是重要的植物病害防治菌种资源。由于植物根际微生物和植物寄生线虫同时生存在植物根际微生态系统内，因此，将具有杀线虫作用的植物根际微生物的代谢物作用于植物寄生线虫病得感病部位，使代谢物直接到达感染寄生线虫的植物组织中发挥作用，不仅可以防治寄生线虫还能发挥根际微生物促进植物生长的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌及其制备方法和应用。本专利技术从植物根际土壤分离出菌株，并将菌株的代谢物作用于植物寄生线虫。一种具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌，菌株为芽孢杆菌UaciBm sp.)B-RS-06 ;该菌株B-RS-06已于2011年10月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心地址是:北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编是 100101，保藏编号为 CGMCC N0.5352。本专利技术所提供的菌株B-RS-06属于芽孢杆菌属Ofeci77M)，其菌落白色，光滑湿润，具有光泽。革兰氏阳性菌，细胞长杆状，单生，芽孢卵圆形，端生，膨大。一种具有杀线虫活性的芽孢杆菌属细菌的制备方法，其特征在于该方法用无菌磷酸缓冲液(phosphate buffered Saline,PBS)浸泡并振荡瑞香狼毒(Stellera chamaejasmL.)根系，获得瑞香狼毒根际土壤悬浮母液，对悬浮液进行系列梯度稀释，得到不同浓度的稀释液，分别取一定体积的不同浓度稀释液，均匀涂抹在细分离培养基(nutrient agar,NA)平板上，将平板在特定的培养条件下培养，待长出肉眼可见的细菌菌落后，挑取适合计数的浓度平板，进行计数，并将所有的菌落在新鲜的NA培养基上纯化，得到纯的细菌菌株后，在低温短期或长期保存。本专利技术所述的制备方法中，无菌磷酸缓冲液(phosphate buffered Saline, PBS)由 NaCl 8 g、KCl 0.2 g,Na2HPO4 1.15 g、KH2PO4 0.2 g 以及无菌水 1000 ml 组成，pH 7.3。本专利技术所述的制备方法中，将瑞香狼毒(Stellera chamae jasm L.)根系浸入无菌磷酸缓冲液中，充分振荡瑞香狼毒新鲜根系，将附着在根系表面的土壤洗进缓冲液，得到1/10的瑞香狼毒根际土壤悬浮母液。本专利技术所述的制备方法中，瑞香狼毒根际土壤悬浮液的梯度稀释方法，以10倍体积为单位，用无菌水进行系列稀释，得到浓度梯度为10_\10_2直至10_8的系列稀释液。本专利技术所述的制备方法中，取一定体积的系列稀释液的方法，就是从浓度梯度为10_4-10_8的系列稀释倍数中，分别取0.1 ml均匀涂布在NA平板培养基上。本专利技术所述的制备方法中，NA细菌分离培养基由牛肉膏3 g,蛋白胨5 g, NaCl8 g,琼脂粉12 g，蒸馏水1000 ml组成，pH 7.2-7.4。本专利技术所述的制备方法中，特定培养条件为在NA平板培养基上，28±2°C避光培养。本专利技术所述的制备方法中，肉眼可见的细菌菌落(colony-forming units,CFU)为平均直径在I mm (含I mm)以上的菌落。本专利技术所述的制备方法中，选择适合计数的浓度平板方法，在直径为90 mm的培养皿中，肉眼可见的单个分散的菌落数在100-150 CFU。所述的细菌菌株保存方法，短期保存可采用NA斜面培养基划线在4°C下保存，如果做长期保存，可在NA液体培养基和甘油的混合液中在_70°C下保存，NA液体培养基和甘油的体积比为1:1。一种用菌株为芽孢杆菌(Mcillus sp.) B-RS-06作为杀虫剂，其特征在于B-RS-06的代谢物对植物寄生线虫的具有触杀活性。本专利技术菌株适合于以其代谢物触杀植物寄生线虫，是开发微生物源杀线虫剂的优良活性先导物质。本专利技术的生物杀线虫剂为纯生物制剂，可用于对松材线虫、马铃薯腐烂茎线虫等植物寄生线虫的生物防治。不同稀释浓度代谢物的处理和对照NA培养液处理有显著差异，代谢物原液的杀线虫效果可达到100%以上。本专利技术的杀线虫剂原材料来源于植物根际土壤，对于环境及植物、人、动物等所有生物无不良影响，而且生产成本低，生产过程简单，不污染环境。本专利技术对于植物线虫的生物防治、微生物杀线虫剂的开发应用和农产品的无公害生产，具有极其重要的意义，适合于推广应用。【专利附图】【附图说明】图1为菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦波，金辉，刘权，张等宏，燕志强，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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