本发明提供了一种生产胰岛素Ｃ肽的方法，它包括在宿主细胞内表达含胰岛素Ｃ肽多份拷贝的多聚多肽，剪切所述的多肽释放出胰岛素Ｃ肽单拷贝。本发明还提供用于上述方法的核酸分子，表达载体，和宿主细胞，以及上述方法中表达和被剪切的胰岛素Ｃ肽多聚多肽。