一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法技术

技术编号:9897069 阅读:184 留言:0更新日期:2014-04-09 23:10
本发明专利技术属于药物化学领域,公开了一种胰岛素及其类似物结晶的纯化方法。本发明专利技术所述纯化方法采用易挥发、低毒性的有机溶剂在短时间内冲洗加淋洗胰岛素结晶或其类似物结晶,以彻底除去结晶中残留的微量的挥发性差且毒性高的有机溶剂,淋洗结束后通过干燥彻底地去除冲洗加淋洗引入的挥发性好的有机溶剂,从而解决结晶中不易挥发的有机溶剂残留的问题。本发明专利技术所述纯化方法操作简便快捷,纯化制得的胰岛素结晶或其类似物结晶终产品比未处理过的结晶纯度高,溶剂残留更低,而且颗粒更加均一,分散性更好,便于保存和分装。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于药物化学领域,公开了一种胰岛素及其类似物结晶的纯化方法。本专利技术所述纯化方法采用易挥发、低毒性的有机溶剂在短时间内冲洗加淋洗胰岛素结晶或其类似物结晶,以彻底除去结晶中残留的微量的挥发性差且毒性高的有机溶剂,淋洗结束后通过干燥彻底地去除冲洗加淋洗引入的挥发性好的有机溶剂,从而解决结晶中不易挥发的有机溶剂残留的问题。本专利技术所述纯化方法操作简便快捷,纯化制得的胰岛素结晶或其类似物结晶终产品比未处理过的结晶纯度高,溶剂残留更低,而且颗粒更加均一,分散性更好,便于保存和分装。【专利说明】本申请要求于2012年9月29日提交中国专利局、申请号为201210380407.2、专利技术名称为“一种胰岛素结晶及或胰岛素其类似物结晶的纯化方法”的中国专利申请的优先权,其全部内容通过引用结合在本申请中。
本专利技术属于药物化学领域,涉及。
技术介绍
胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素,胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素,同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。胰岛素于1921年由加拿大人F.G.班廷和C.H.贝斯特首先发现。1922年开始用于临床,使过去不治的糖尿病患者得到挽救。目前临床应用的胰岛素主要都是从猪、牛胰脏中提取的。但由于胰岛素治疗尚有局限性,一种新型胰岛素-胰岛素类似物应运而生。胰岛素类似物指既可模拟正常胰岛素的分泌,同时在结构上与胰岛素也相似的物质,较传统人胰岛素更适合人体生理需要。目前胰岛素类似物主要包括甘精胰岛素、地特胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素和德谷胰岛素。在胰岛素及其类似物的制备过程中一般都要进行结晶步骤,由于结晶后的胰岛素及其类似物方便保存,因此结晶是现有胰岛素及其类似物的制备工艺中必不可少的一个环节。然而目前胰岛素及其类似物的结晶过程中大多均需添加酚类衍生物等有机溶剂,这些挥发性差且毒性高的有机溶剂的残留会严重影响胰岛素产品的质量。例如苯酚是一种有毒溶剂,挥发性较差,有强腐蚀性,对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用,同时还会抑制中枢神经系统或损害肝、肾功能。在对目前的胰岛素类似物-甘精胰岛素在中国的两种上市产品进行苯酚分析,均发现有一定含量的苯酚。胰岛素及胰岛素类似物市场巨大,目前未有胰岛素晶体或胰岛素类似物结晶体杂质去除方面的文献报导,因此如何除去胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶中残留的挥发性差且毒性高的有机溶剂,提高胰岛素及胰岛素类似物药品的品质是当今技术面临的一大难题。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术的目的是针对现有技术中的问题,提供,纯化后的胰岛素结晶或胰岛素类似物晶体纯度高,溶剂残留低。为实现本专利技术的目的,本专利技术采用如下技术方案:,包括:步骤1、取待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶,加入有机溶剂冲洗晶体,搅拌至完全分散后抽滤,收集所得晶体。步骤2、 收集步骤1所得晶体,用有机溶剂淋洗,淋洗结束后完全抽干,进一步干燥即得;其中,所述待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶含有酚类衍生物;所述有机溶剂为乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种,或乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种与水的混合物,且混合物中水的含量小于50v/v% ;所述冲洗晶体与淋洗晶体的时间之和(120min。胰岛素及其类似物属于蛋白质激素,而蛋白类的样品不同于一般化学样品,由于蛋白质具有一定的空间结构,强酸、强碱、重金属盐、尿素、胍、去污剂、三氯乙酸、有机溶剂、高温、射线、超声波、剧烈振荡或搅拌等因素都易使蛋白质发生变性,因此采用常用的去杂方式无法在去除胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶中挥发性差且毒性高的有机溶剂的同时保证胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的蛋白活性。本专利技术采用易挥发低毒性的有机溶剂冲洗待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶以除去结晶中残留的大量的挥发性差且毒性相对较高的酚类衍生物等有机溶剂杂质,进一步用易挥发低毒性的有机溶剂淋洗胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶,以彻底除去结晶中残留的微量的挥发性差且毒性高的有机溶剂,淋洗结束后完全抽干胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶然后通过干燥彻底地去除冲洗加淋洗引入的挥发性好的有机溶剂,从而解决结晶中不易挥发的有机溶剂残留的问题。本专利技术所述纯化方法整个过程均在常温或低温下操作,并且用有机溶剂冲洗加淋洗胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的时间较短,最后通过干燥将易挥发有机溶剂去除,整过程可以有效防止蛋白变性。通过本专利技术得到的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶终产品相比于未处理过的结晶纯度高,溶剂残留更低,而且颗粒更加均一,分散性更好,便于保存和分装。作为优选,步骤2所述淋洗晶体为用有机溶剂分次冲洗步骤I所得晶体。所述分次具体为至少两次以上, 可以为三次、四次。在每次冲洗晶体的有机溶剂足量的前提下,冲洗的次数越多,结晶中残留的挥发性差且毒性高的有机溶剂去除的越彻底。进一步的,在一些实施例中,所述淋洗晶体的具体操作为取有机溶剂分次滴加在晶体上冲洗然后在每次冲洗后抽滤,或者为取有机溶剂滴加在晶体上并在每次冲洗的同时抽滤。作为优选,所述冲洗晶体的有机溶剂用量为晶体体积的5-15倍,更优选为8-10倍。作为优选,所述淋洗晶体的有机溶剂用量为晶体体积的5-10倍,更优选为6-8倍。本专利技术所述纯化方法中所述挥发性好的有机溶剂为所述有机溶剂为乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种,或乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种与水的混合物,且混合物中水的含量小于50v/v%。如异丙醇、丙酮、80%乙醇、85%乙醇,90%乙醇等均可以有效去除结晶中有机溶剂的残留。作为优选,所述有机溶剂为80~100%乙腈,80~100%乙醇或80~100%正丙醇的一种或几种。为了避免长时间的有机溶剂处理使胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶变性,本专利技术所述纯化方法所述冲洗晶体与淋洗晶体的时间之和< 120min,优选为< 45min。在一些实施例中所述冲洗晶体时间为20min,所述淋洗时间为8min。在另一些实施例中所述冲洗晶体时间为15min,淋洗时间为20min。更优选的,所述冲洗晶体与淋洗晶体的时间之和< 15min。在一些实施例中所述冲洗晶体时间为IOmin,所述淋洗时间为5min。在另一些实施例中所述冲洗晶体时间为5min,淋洗时间为IOmin。进一步的,本专利技术所述纯化方法所述胰岛素类似物结晶为甘精胰岛素结晶、地特胰岛素结晶、赖脯胰岛素结晶、门冬胰岛素结晶或德谷胰岛素结晶。本专利技术所述纯化方法在完全抽干胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶后进一步通过干燥彻底地去除冲洗加淋洗引入的挥发性好的有机溶剂。作为优选,所述干燥为真空干燥或冷冻干燥。作为优选,所述酚类衍生物为苯酚、间甲酚或间苯二酚。本专利技术所述胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶可以为精制的商品化的产品,也可以是本领域技术人员已知的方法制备的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶。在具体实施例中本专利技术通过高效液相色谱(HPLC)和药效学证明本专利技术所述胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶活性和纯化以前并未发生改变。本专利技术提供了,采用易挥发、低毒性的有机溶剂在短时间内冲洗加淋洗胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶,以彻底除去结晶中残留的微量的挥发性差且毒性高的有机本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法,其特征在于,包括:步骤1、取待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶,加入有机溶剂冲洗晶体,搅拌至完全分散后抽滤,收集所得晶体;步骤2、收集步骤1所得晶体,用有机溶剂淋洗,淋洗结束后完全抽干,进一步干燥即得;其中,所述待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶含有酚类衍生物;所述有机溶剂为乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种,或乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种与水的混合物,且混合物中水的含量小于50v/v%;所述冲洗晶体与淋洗晶体的时间之和≤120min。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:林小鹊章琛陈小锋
申请(专利权)人:宜昌长江药业有限公司
类型:发明
国别省市:湖北;42

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