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血小板裂解物的组合物、用途和制备制造技术

技术编号:9880298 阅读:284 留言:0更新日期:2014-04-04 19:28
在某些实施例中,本披露描述了包括耗尽了纤维蛋白原的血小板裂解物的组合物。在一个进一步的实施例中,该组合物进一步包括一种细胞培养基组分。本披露还提供了一种用于制备该组合物的方法,该方法包括以下步骤:(a)对血小板进行裂解,提供一种裂解物;(b)去除细胞碎片;以及(c)通过添加一种金属盐诸如氯化钙而形成一种可去除的团块来耗尽纤维蛋白原。另外,本披露还描述了使用所述方法生产的产物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】在某些实施例中,本披露描述了包括耗尽了纤维蛋白原的血小板裂解物的组合物。在一个进一步的实施例中,该组合物进一步包括一种细胞培养基组分。本披露还提供了一种用于制备该组合物的方法,该方法包括以下步骤:(a)对血小板进行裂解,提供一种裂解物;(b)去除细胞碎片;以及(c)通过添加一种金属盐诸如氯化钙而形成一种可去除的团块来耗尽纤维蛋白原。另外,本披露还描述了使用所述方法生产的产物。【专利说明】血小板裂解物的组合物、用途和制备相关申请的交叉引用本申请要求2011年6月27日提交的美国临时申请号61/501,411和2011年10月17日提交的美国临时申请号61/547,897的优先权,两者都通过引用以其全文特此结合。领域在某些实施例中,本披露描述了包括耗尽了纤维蛋白原的血小板裂解物和冷冻沉淀物的组合物。在一个进一步的实施例中,该组合物进一步包括一种细胞培养基组分。本披露还提供了一种用于制备该组合物的方法,该方法包括以下步骤:(a)对血小板进行裂解,提供一种裂解物;(b)去除细胞碎片;以及(c)通过添加一种金属盐诸如氯化钙而形成一种可去除的团块来耗尽纤维蛋白原。另外,本披露还描述了使用所述方法生产的产物。背景再生医学是一个广阔的领域,在该领域中运用了众多技术以增强机体的自愈能力。一种这样的技术是细胞疗法。若干细胞类型已经被用于细胞疗法,这些细胞类型包括但不限于胚胎细胞、新生儿细胞、体细胞、异种细胞和诱导性多功能细胞(inducedpluripotent cell)。间 充质干细胞(MSC)通过使骨骼组织诸如骨、软骨和腱再生同时也治疗神经元变性和支持造血细胞植入而尤其具有经证实的治疗效果。见例如Doucet (杜塞)等人,J Cell Phys (《细胞生理学杂志》),(2005),205:228-236和Lange (兰格)等人,JCell Physiol (《细胞生理学杂志》),(2007),213:18-26。以前的努力已经使用一种包含胎牛血清(FBS)的生长培养基来离体使供体细胞增殖。尽管在转移到该受体之前对这些供体细胞进行了清洗,FBS在该培养基中的存在已经引起针对FBS的抗体的产生并且已经导致阿瑟氏样反应(arthus-like reaction)。Selvaggi(塞尔瓦吉)等人,Blood (《血液》),(1997),89 (3): 776-9。关于动物朊病毒、病毒的和人畜共患病污染的转移的顾虑也围绕着对FBS的使用。与在生长培养基中使用FBS相关联的这些潜在的并发症已经造成了对于能够保持细胞功能性的非异种生长补充剂的一种特别关注。在使MSC离体增殖的努力中,自体的和同种异体的人血清都作为FBS的一种替代物进行了测试。同种异体血清导致了 MSC的细胞生长停滞和死亡。Shahdadfar(斯哈德发)等人,Stem Cells (《干细胞》),(2005) 23 (9): 1357-66。即使自体血清使MSC有效地增殖,务实的顾虑诸如血清的成本和可获得性致使这种方法有些不切实际。见例如Kobayashi(小林)等人,J Bone Joint Surg Br (《骨与关节外科杂志》),(2005),87 (10): 1426-33。以前的研究表明,从人血小板中释放的生长因子有效地增强若干细胞类型包括MSC的生长。于是,最近的努力已经集中在使用血小板裂解物代替FBS作为一种细胞培养补充剂。血小板能够释放多种生长因子,诸如多种血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子I (IGF-1)以及转化生长因子β (TGF-β)。Sanchez (桑切斯)等人,Int J OralMaxillofac Implants (《口腔与上颌面植入国际杂志》),(2003),18 (I):93-103。为了对细胞培养基补充这些生长因子的目的,血小板裂解物显示出是优于血小板粘附和血小板凝集两种方法的。Doucet(杜塞)等人,J Cell Phys(《细胞生理学杂志》),(2005),205:228-236。尽管增强细胞生长,对未经处理的血小板裂解物的使用造成了它自身的一组并发症。直到最近,对离体细胞疗法的临床使用已经使用FBS作为一种细胞培养生长补充剂,而关于在临床应用中使用血小板裂解物的考虑因素仍然有待解决。这些考虑因素包括细胞碎片、凝血因子和冷冻沉淀物的存在,连同在血小板裂解物的存在下所培养的细胞的这些免疫抑制特性。另外,在细胞培养物中对未经处理的血小板裂解物的使用导致了纤维蛋白原向纤维蛋白的转化。一般而言,直接将肝素添加至该细胞培养物以防止这种转化。见例如Schallmoser (斯卡尔莫斯)等人,Tissue Eng Part C Methods (《组织工程学部分C方法》),(2008),14(3): 185-96。尽管有对肝素的这种使用,大纤维束可以在这些培养基之内形成并且附着于MSC单层。 这带有将这些纤维束输注入患者的风险,潜在地导致微型闭塞或大型闭塞。因此,有需要去找到将纤维束的产生降低的改进的方法。酶原凝血素在肝中产生。它在两个位点被因子Xa酶促切割,产生凝血酶。凝血酶转而通过纤维蛋白原向纤维蛋白的转化介导凝血。纤维蛋白可以与转谷氨酰胺酶因子XIII交联,形成一种凝块。该纤维蛋白可以聚结为纤维束,这些纤维束如果被转移到患者体内是危险的,正如以上所说明的。肝素可以用于增加抗凝血酶对凝血酶和因子Xa两者的亲和性,潜在地扰乱凝血级联。概述在某些实施例中,本披露描述了包括耗尽了纤维蛋白原的血小板裂解物和冷冻沉淀物的组合物。在一个进一步的实施例中,该组合物进一步包括一种细胞培养基组分。本披露还提供了一种用于制备该组合物的方法,该方法包括以下步骤:(a)对血小板进行裂解,提供一种裂解物;(b)去除细胞碎片;以及(c)通过添加一种金属盐诸如氯化钙而形成一种可去除的团块来耗尽纤维蛋白原。另外,本披露还描述了使用所述方法生产的产物。在某些实施例中,该血小板裂解物组合物实质上耗尽了纤维蛋白原。在一些实施例中,该组合物所具有的纤维蛋白原的浓度为小于或大约2或4 μ g/mL。在一些实施例中,该组合物所具有的I3DGF-BB的浓度为多于或大约15、30或40ng/mL。在一些实施例中,该组合物不包含酸性柠檬酸盐右旋糖(ACD)或不包含大量的钙螯合性抗凝剂诸如酸性柠檬酸盐。在一些实施例中,该组合物实质上不含有细胞碎片。在一些实施例中,该组合物实质上不含有冷冻沉淀物。在一些实施例中,该组合物实质上耗尽了凝血酶。在一些实施例中,本披露涉及一种使用包括所述组合物的一种细胞培养基培养细胞的方法。典型的细胞培养基包含氨基酸和可任选的胰岛素、激素、抗生素和糖类。在一些实施例中,这些经培养的细胞为体细胞、新生儿细胞、胚胎细胞、异种细胞或多功能细胞。在一些实施例中,这些经培养的细胞为MSC。在一些实施例中,本披露涉及从选自以下的物种中扩增细胞:啮齿类动物、猪、灵长类动物、人类灵长类动物和非人类灵长类动物。在一些实施例中,本披露涉及一种制备该组合物的方法,该方法包括以下步骤:(a)对血小板进行裂解,提供一种裂解物;(b)去除细胞碎片;以及(C)实质上耗尽纤维蛋白原。在某些实施例中,该方法进一步包括以下步骤:(d)去本文档来自技高网...
血小板裂解物的组合物、用途和制备

【技术保护点】
一种组合物,包括与通过一种冻融工艺生产的血小板裂解物相比较纤维蛋白原的量降低的血小板裂解物组分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:伊恩·B·科普兰雅克·加利波
申请(专利权)人:爱默蕾大学亚特兰大儿童医疗保健公司
类型:
国别省市:

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