抗G-CSFR抗体及其用途制造技术

本公开内容提供包含与人粒细胞集落刺激因子受体结合的抗体的抗原结合结构域的蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗G-CSFR抗体及其用途相关申请本申请要求2011年6月13日提交的名称为“抗G-CSFR抗体及其用途（AntibodiesagainstG-CSFRandusestherof）”的美国临时申请第61/496,351号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。序列表本申请与电子形式的序列表一起提交。序列表的全部内容通过引用并入本文。领域本公开内容涉及与粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）受体结合的抗体及其用途，例如在治疗中的用途。专利技术背景粒细胞集落刺激因子（G-CSF）是粒细胞产生的主要调节因子。G-CSF由骨髓基质细胞、上皮细胞、巨噬细胞和成纤维细胞产生并且生产受到炎性刺激的诱导。G-CSF通过G-CSF受体（G-CSFR）起作用，其在早期髓样前体细胞、成熟嗜中性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞、T和B淋巴细胞和上皮细胞上表达。G-CSF或G-CSFR缺陷小鼠表现出显著的嗜中性粒细胞减少症，证明G-CSF在稳态粒细胞生成中的重要性。然而，G-CSF似乎对于紧急的粒细胞生成来说是非必需的，例如在对感染的响应中。G-CSF增加嗜中性粒细胞的产生和释放，驱动造血干细胞和先祖细胞并且调节成熟嗜中性粒细胞的分化、寿命和效应子功能。G-CSF同样可以对巨噬细胞施加影响，包括单核细胞/巨噬细胞数目的扩张、吞噬作用的增强和对炎性细胞因子和趋化因子产生的调节。G-CSF同样已经显示驱动内皮先祖细胞并诱导或促进血管发生。当G-CSF被治疗性用于例如治疗嗜中性粒细胞减少症和/或驱动造血干细胞时，其在一些病状中，例如炎性病状和/或癌症，也具有消极作用。例如，G-CSF的施用加重了类风湿性关节炎（RA）、小鼠胶原诱导的关节炎（CIA）和大鼠中CIA的被动转移模型。已经在RA患者的血清和滑液中发现G-CSF。而且，白介素（IL）-1和肿瘤坏死因子α（TNFα），其以升高水平存在于患有RA的患者中，通过人类滑液成纤维细胞和软骨细胞诱导了G-CSF的产生。G-CSF缺陷小鼠对急性和慢性炎性关节炎有抗性。G-CSF已经显示在多发性硬化（MS）中起作用。例如，G-CSF与干扰素γ和TNFα同样有效地增强MS的自体反应T细胞系模型对细胞外基质的粘附，其已知加剧了MS症状。而且，G-CSF缺陷小鼠对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的发展有抗性。G-CSF和G-CSFR同样已经与癌症相关，研究显示这一信号通路有利于不同癌症的化疗抗性、生长、存活、侵染和转移。而且，G-CSF已经显示诱导血管发生，实体瘤发展中的一个重要过程。从前面所述的本领域技术人员清楚在本领域内有对通过G-CSFR减少G-CSF的信号传递的试剂的需要。示例性的剂将适于用作治疗剂，例如治疗或预防G-CSF介导的病状。概述本专利技术人已经生产了包含与人类G-CSFR（hG-CSFR）结合并且强有力地中和G-CSF信号例如防止粒细胞从CD34+骨髓细胞形成和/或预防响应于G-CSF的细胞增殖和/或减少或预防由施用G-CSF诱导的嗜中性粒细胞增多症的抗体结合位点（例如Fad和抗体）的一类蛋白。本专利技术人鉴定的一类蛋白同样与短尾猴（cynomolgusmonkey）G-CSFR（cynoG-CSFR）交叉反应，其有利于采用所述蛋白的临床前研究。本专利技术人鉴定的一类蛋白以高亲和性与hG-CSFR结合。本专利技术人鉴定的一类蛋白是人类抗体，其适于各种病状的治疗。本公开内容提供包含抗体的抗原结合位点的蛋白，其中所述抗原结合位点与hG-CSFR结合并且中和G-CSF信号并且其中所述蛋白以至少约0.2nM的IC50抑制集落形成单位-粒细胞（CFU-G）从G-CSF存在时生长的CD34+骨髓细胞生长。例如，IC50是0.1nM或更少，例如，0.09nM或更少，或者0.08nM或更少，或者0.07nM或更少，或者0.06nM或更少或者0.05nM或更少。在一个实施例中，IC50是0.04nM或更少。在另一个实施例中，IC50是0.02nM或更少。本文描述了评估这样的测定中蛋白的IC50的方法。例如，IC50是在10ng/ml的hG-CSF存在时测定的。在一个实施例中，IC50是通过在10ng/ml干细胞因子和10ng/mlhG-CSF存在时培养CD34+骨髓细胞来确定的。例如，细胞在半固体细胞培养基中生长。在一个实施例中，14天培养后将CFU-G计数。本公开内容另外地或可选择地提供包含抗体的抗原结合位点的蛋白，其中所述抗原结合位点以相似的亲和性与人类G-CSFR和短尾猴G-CSFR两者结合并且中和G-CSF信号。这些蛋白是有利的，因为它们有利于非人类哺乳动物中的临床前研究。在一个实施例中，使用生物传感器，例如通过表面等离子共振确定蛋白的亲和性。例如，配体结合区或可溶的hG-CSFR或可溶的cynoG-CSFR或hG-CSFR-Fc或cyno-G-CSFR-Fc被固定并且确定本公开内容的蛋白的亲和性。本公开内容另外地提供包含抗体的抗原结合位点的蛋白，其中抗原结合位点与hG-CSFR中与C1.2（包含包含SEQIDNO:2中所展示的序列的重链可变区（VH）和包含SEQIDNO:3中所展示的序列的轻链可变区（VL））或C1.2G（包含包含SEQIDNO:4中所展示的序列的VH和包含SEQIDNO:5中所展示的序列的VL）所结合的相同的表位特异性结合。本公开内容另外地或可选择地提供包含抗体的抗原结合位点的蛋白，其中（i）所述蛋白竞争性抑制C1.2（包含包含SEQIDNO:2中所展示的序列的VH和包含SEQIDNO:3中所展示的序列的VL）或C1.2G（包含包含SEQIDNO:4中所展示的序列的VH和包含SEQIDNO:5中所展示的序列的VL）对hG-CSFR的结合；（ii）所述蛋白中和G-CSF信号；并且（iii）所述蛋白与其中丙氨酸取代下列中任一个的SEQIDNO:1的多肽的结合水平低于所述蛋白与SEQIDNO:1的多肽的结合水平：（a）位于SEQIDNO:1的位点287的精氨酸;（b）位于SEQIDNO:1的位点237的组氨酸；（c）位于SEQIDNO:1的位点198的甲硫氨酸；（d）位于SEQIDNO:1的位点172的酪氨酸；（e）位于SEQIDNO:1的位点171的亮氨酸；或（f）位于SEQIDNO:1的位点111的亮氨酸。本公开内容另外地或可选择地提供包含抗体的抗原结合位点的蛋白，其中（i）所述蛋白竞争性抑制C1.2（包含包含SEQIDNO:2中所展示的序列的VH和包含SEQIDNO:3中所展示的序列的VL）或C1.2G（包含包含SEQIDNO:4中所展示的序列的VH和包含SEQIDNO:5中所展示的序列的VL）对hG-CSFR的结合；（ii）所述蛋白中和G-CSF信号；并且（iii）相对于其与其中丙氨酸取代下列中任一个的SEQIDNO:1的多肽结合的能力优先与SEQIDNO:1的多肽结合：（a）位于SEQIDNO:1的位点287的精氨酸;（b）位于SEQIDNO:1的位点237的组氨酸；（c）位于SEQIDNO:1的位点198的甲硫氨酸；（d）位于SEQIDNO:1的位点172的酪氨酸；（e）位于SEQIDNO:1的位点171的亮氨酸；或（f）位于SEQIDNO:1的位点111的亮氨酸。本公开本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含抗体的抗原结合位点的蛋白，其中所述抗原结合位点与人粒细胞集落刺激因子受体（hG?CSFR）结合并且中和粒细胞集落刺激因子（G?CSF）信号并且其中所述蛋白以至少约0.2nM的IC50抑制集落形成单位?粒细胞（CFU?G）从G?CSF存在时生长的CD34+骨髓细胞生长。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.06.13 US 61/496,3511.抗体，其与人粒细胞集落刺激因子受体(hG-CSFR)结合并且中和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)信号，所述抗体包含：(i)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:5中所展示的氨基酸序列组成的VL；(ii)由SEQIDNO:2中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:3中所展示的氨基酸序列组成的VL；(iii)由SEQIDNO:15中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:14中所展示的氨基酸序列组成的VL；(iv)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:16中所展示的氨基酸序列组成的VL；(v)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:17中所展示的氨基酸序列组成的VL；(vi)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:18中所展示的氨基酸序列组成的VL；(vii)由SEQIDNO:20中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:19中所展示的氨基酸序列组成的VL；(viii)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:21中所展示的氨基酸序列组成的VL；(ix)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:22中所展示的氨基酸序列组成的VL；(x)由SEQIDNO:24中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:23中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xi)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:25中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xii)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:26中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xiii)由SEQIDNO:28中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:27中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xiv)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:29中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xv)由SEQIDNO:31中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:30中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xvi)由SEQIDNO:33中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:32中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xvii)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:34中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xviii)由SEQIDNO:36中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:35中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xix)由SEQIDNO:38中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:37中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xx)由SEQIDNO:40中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:39中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxi)由SEQIDNO:42中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:41中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxii)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:43中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxiii)由SEQIDNO:45中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:44中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxiv)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:46中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxv)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:47中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxvi)由SEQIDNO:49中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:48中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxvii)由SEQIDNO:51中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:50中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxviii)由SEQIDNO:53中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:52中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxix)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:54中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxx)由SEQIDNO:55中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:5中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxxi)由SEQIDNO:57中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:56中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxxii)由SEQIDNO:59中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:58中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxxiii)由SEQIDNO:61中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:60中所展示的氨基酸序列组成的VL；(xxxiv)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:62中所展示的氨基酸序列组成的VL；或(xxxv)由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH和由SEQIDNO:63中所展示的氨基酸序列组成的VL。2.抗体，其与人粒细胞集落刺激因子受体(hG-CSFR)结合并且中和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)信号，所述抗体包含：(i)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:5中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(ii)包含由SEQIDNO:2中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:3中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(iii)包含由SEQIDNO:15中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:14中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(iv)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:16中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(v)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:17中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(vi)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:18中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(vii)包含由SEQIDNO:20中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:19中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(viii)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:21中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(ix)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:22中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(x)包含由SEQIDNO:24中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:23中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(xi)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:25中所展示的氨基酸序列组成的VL的3个CDR的VL；(xii)包含由SEQIDNO:4中所展示的氨基酸序列组成的VH的3个CDR的VH和包含由SEQIDNO:26中所展...

【专利技术属性】
技术研发人员：安德鲁·唐纳德·纳什，阿尔纳·伊利莎白·安德鲁斯，曼纽尔·贝卡，柯尔斯顿·迈克·爱德华兹，马修·菲利普·哈代，孔·帕诺塞斯，费利西蒂·梅瑞迪斯·邓洛普，
申请(专利权)人：CSL有限公司，
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