一种扁座壳孢菌几丁质酶的分离纯化方法技术

技术编号:9109899 阅读:336 留言:0更新日期:2013-09-04 23:44
本发明专利技术公开了一种扁座壳孢菌几丁质酶的分离纯化方法。将扁座壳孢菌在优化后的产酶培养基中发酵,经60%硫酸铵沉淀、DEAESepharosefastflow阴离子交换层析、SephadexG-75凝胶过滤等步骤,从发酵液获得了SDS-PAGE电泳均一的扁座壳孢外切几丁质酶,本发明专利技术特异性高,工艺简单,蛋白质不易失活,纯化效果好,回收率高,成本低,具有很好的推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种扁座壳孢菌几丁质酶的分离纯化方法,其特征在于:包括以下步骤:(a)?粗酶液的制备:用优化试验筛选出的培养基培养扁座壳孢菌株,在几丁质酶活性达最高时取发酵液离心,上清液用真空抽滤,除去杂质收集滤液,向滤液中加入固体硫酸铵至饱和度为60%,4℃静置过夜,再次离心收集沉淀,用缓冲液溶解沉淀,离心溶解液除去不溶物体,上清液装于透析袋,经pH6.5的磷酸盐缓冲液透析后,再用聚乙二醇浓缩得到粗酶液(b)?DEAE?Sepharose?fast?flow阴离子交换层析:粗酶液经过PEG20000浓缩后,用起始缓冲液平衡过夜,上样于充分平衡后的DEAE?Sepharose?fast?flow阴离子交换层析柱,再用pH6.5的NaCl缓冲液进行连续洗脱,收集具有酶活性部份(c)?Sephadex?G?75凝胶过滤:用pH6.5的磷酸盐缓冲液充分平衡的Sephadex?G?75凝胶过滤层析柱,上样后,再用相同的缓冲液进行洗脱,收集有酶活性的部份。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:邱君志孟丽雪曹丽萍涂洁李小霞张以盼董冬何肖云郭庆丰姚灵丹
申请(专利权)人:福建农林大学
类型:发明
国别省市:

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