胰泌素类似物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种新的胰泌素的类似物及其制备方法，与天然胰泌素相比，本发明专利技术的化合物的化学稳定性得以提高，同时保留了天然胰泌素的药理活性。

【技术实现步骤摘要】
胰泌素类似物及其制备方法和用途
本专利技术涉及胰泌素类似物及其制备方法和治疗用途。
技术介绍
胰泌素(Secretin)是一种肠道激素，由小肠上端粘膜中形成，刺激胰腺分泌水及碳酸氢盐。胰泌素是一种27个氨基酸链接的多肽。人胰泌素是具有如下序列的多肽化合物：H2N-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-CONH2胰泌素能够刺激，促进胰腺分泌弱碱性含酶的胰液，是常用的诊断胰腺功能的试剂，研究表明，胰泌素还具有治疗消化道溃疡的作用。US2004241154公开了胰泌素治疗哮喘的用途。WO2004081195公开了胰泌素治疗感染性疾病的用途。US2007154534公开了胰泌素治疗精神系统疾病，如精神分裂的用途。然而，胰泌素在体外表现出极不稳定性，大量研究显示，胰泌素在体外，尤其是在水溶液中，会快速失活。即便是在低温状态，例如-20℃时，胰泌素也会逐渐降解，而丧失活性。天然胰泌素在制剂制备过程中、贮存运输中，都会因其不稳定性而导致生物活性的降低，不能满足诊断治疗中的安全有效性。而且，由于天然胰泌素的不稳定性，必然使运输和贮存成本增加，间接导致了药品成本的增加。目前都是通过制剂方式改善天然胰泌素的稳定性问题，例如US3940480提供了一种含有丙氨酸的胰泌素的颗粒，提高胰泌素的稳定性。因此，急需开发一种具有天然胰泌素活性，稳定性得以改善的多肽化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种胰泌素的类似物，其化学结构式如下：其中每个R1、R2独立的选自H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或杂环基烷基；R1、R2优选烷基，更优选C1-C4的烷基，最优选甲基；R3选自烷基、烯基、炔基、[R1’-K-R1’]n；所述的R1’选自烷基、炔基(烯基)或炔基；所述的K是O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR2’、所述的R2’是H或烷基；n是2-7的整数。R3优选烯基。本专利技术胰泌素的类似物优选具有下列结构的化合物：其中每个R1、R2独立的选自H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或杂环基烷基；优选烷基，更优选C1-C4的烷基，最优选甲基；n选自2-7的整数，优选n是3。本专利技术胰泌素类似物更优选具有下列结构的化合物：本专利技术的胰泌素类似物具有天然的多肽二级结构，α螺旋程度增加，使其更接近于胰泌素的四级结构特点，降低了胰泌素的降解。与天然胰泌素序列相比，本专利技术的多肽化合物的化学稳定性得以提高。而且本专利技术的多肽化合物保留了天然胰泌素的药理活性。本专利技术胰泌素类似物尤其优选以具有光学活性的(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚烯酸(即图1中的S5)取代序列中的天然氨基酸，所述的取代基通过化学催化的方式彼此环合后获得的多肽化合物。所述的取代基以Fmoc进行保护，参与多肽的合成，所述的Fmoc-(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚烯酸具有如下结构：本专利技术的另一方面提供了制备上述胰泌素类似物的方法。可以采用本领域技术人员熟知的方法，选择顺序的或次序不同的合成步骤产生具有如下化学结构的物质：所述的合成方法包括：例如液相合成或固相合成(SPPS)进行制备，优选SPPS。所述的固相合成可以选择常规聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇类树脂等，例如：王氏树脂(WangResin)，RinkamidelinkerMBHA树脂等，优选RinkamidelinkerMBHA树脂。本专利技术化合物的环状结构是通过催化环合的方式制备的，所述的催化剂可以是：钌催化剂，优选的催化剂是苯基亚甲基双(三环己基磷)二氯化钌(Grubbs1st)，或Grubbs2st。本专利技术另一方面提供了包括上述胰泌素类似物的药物组合物。所述的药物组合物包含有效量的具有上述结构的多肽化合物和药学可接受的载体，所述的组合物可以根据本领域的公知技术进行制备，例如与常规的药用辅料进行混合，制备成注射剂、注射液，或局部给药的制剂类型例如乳剂、膏剂、霜剂或经鼻给药的剂型等，或具有缓释效果的制剂，例如微球、脂质体等。本专利技术所述的“药学可接受的载体”包括任何一种药用辅料，例如填充剂、稀释剂、赋形剂等。例如包括但不限于：乳糖、蔗糖、葡萄糖、淀粉、纤维素类(如羧甲基纤维素、羟丙甲基纤维素等)、乙二醇、豆油、芝麻油、乙醇、无菌生理盐水、无菌水、乙醇等。通常，药学上可接受的载体是水溶性的pH缓冲液，例如柠檬酸盐、磷酸盐等；还可以含有抗氧化剂，稳定剂(如氨基酸)、抑菌剂等。专利技术人发现，本专利技术的胰泌素类似物具有与天然胰泌素相似的生物活性，能够促进受试者分泌胰液，预防和治疗与胰泌素相关的疾病和病症，例如诊断胰腺功能和/或治疗消化道溃疡。且专利技术的胰泌素类似物具有比天然胰泌素更好的稳定性。附图说明图1是本专利技术优选的胰泌素类似物的制备流程，图1分子式中的S5是(S)-2-氨基-2-甲基-6-庚烯基图2是本专利技术优选胰泌素类似物稳定性实验结果图3是本专利技术优选的胰泌素类似物对离体大鼠胰腺外分泌的影响具体实施例以下的实施例用于进一步的阐明本专利技术的技术方案。本专利技术说明书及实施例中所带保护基的氨基酸单体以及其他化学试剂等，均可从相关公司购买获得，未注明具体条件的试验方法，可按常规条件进行，或按商品供货商所建议的条件进行。实施例1胰泌素类似物的制备按照图1所示的步骤，将氨基酸逐一接在树脂上，然后用催化剂催化环合，接着脱去保护基并将多肽从树脂上切下。1、固相合成选择0.402gRinkamidelinkerMBHA树脂(取代度：0.373mmol/g)制备，在室温条件下用DMF浸泡树脂60min，将带有Fmoc保护的氨基酸按照序列的顺序排列在合成仪中进行活化连接，获得如图所示的化合物。2、催化环合将上述步骤所得的化合物2依次用DCM(20ml)和DCE(20ml)各冲洗两次，然后用DCE(8ml)浸泡30min，接着将Grubbs1st(25mgx2，20mg/0.1mmol)加入反应混合物中，室温振摇3小时。用MS检测环化情况，如果环化不完全，重复该步骤，通常重复2次，获得如图所示的化合物(0.817g)。3、切除树脂将含有上述化合物3的反应混合物放在裂解液中，氮气保护下室温搅拌2.5小时。过滤，去除滤液，滤饼用TFA(2ml)冲洗，接着放置在冷的乙醚(50ml)中沉淀，离心；得到的滤饼用冷的乙醚(50ml)冲洗两次，真空干燥，获得本专利技术SECRETIN多肽类似物389mg，产率83％，MW＝3104.7，理论值MW＝3104.74、纯化将上述部分粗品191mg用HPLC进行纯化，获得纯度95％以上的纯品26mg。实施例2胰泌素类似物的体外稳定性试验分别将天然胰泌素本专利技术胰泌素类似物(实施例1制备)置于0.1M的磷酸缓冲液中(PH7.0)，于60℃下放置36小时，每三小时用RP-HPLC检测其中胰泌素或类似物的残留量。取胰泌素和类似物的样品，用CH3CN和1％的HClO4(2∶3，v/v)稀释，C18柱为固定相，乙腈/0.005M磷酸缓冲液/0.2MNaClO4为流动相，210nm处检测。结果如图2所示，在实验本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰泌素类似物，其化学结构式如下：其中每个R1、R2独立的选自H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或杂环基烷基；R3选自烷基、烯基、炔基、[R1’?K?R1’]n；所述的R1’选自烷基、炔基(烯基)或炔基；所述的K是O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR2’、所述的R2’是H或烷基；n是2?7的整数。FSA00000645617400011.tif,FSA00000645617400012.tif

【技术特征摘要】
1.一种胰泌素类似物，其化学结构式如下：2.一种制备权利要求1所述胰泌素类似物的方法，其特征在于：(1)制备具有下述结构的物质(2)通过催化剂处理步骤(1)的物质，使其环合。3.如权利要求2的方法，其特征在于，步骤(1)通过固相合成技术制备。4.如权利要求3的方法，其特征在于，步骤(1)采用Fmoc保护的固相合成技术。5.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：李湘，
申请(专利权)人：杭州淳泰科技有限公司，
类型：发明
国别省市：