重建高密度脂蛋白制剂及其生产方法技术

一种重建的具有相对低毒性的高密度脂蛋白制剂包含载脂蛋白（如ApoAI）或其片段、脂质和去污剂，去污剂的水平为给予人时通常引起肝毒性的去污剂水平的约5-50%。脂质最好为约30-50g/L的磷脂酰胆碱，并且载脂蛋白:脂质的摩尔比最佳在1:40至1:75的范围内。该制剂可用于治疗疾病或病症，如心血管疾病、高胆甾醇血症或低胆甾醇血症，包括急性冠脉综合征（ACS）、动脉粥样硬化和心肌梗死。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及重建的高密度脂蛋白制剂。更特别地，本专利技术涉及毒性降低的重建高密度脂蛋白制剂。背景高密度脂蛋白(HDL)是一类含有脂质和蛋白质的异源脂蛋白，其特征在于高密度(>1.063g/mL)和小的尺寸(Stoke，s直径=5至17nm)。各种HDL亚类的脂质、载脂蛋白、酶和脂质转移蛋白的含量和质量不同，导致形状、密度、大小、电荷和抗原性的不同。载脂蛋白A-1 (Apo-AI)是主要的HDL蛋白，尽管可能存在其他载脂蛋白，如Ap0-AII和Ap0-V。流行病学和临床研究已经确定了高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与心血管疾病风险之间的逆相关(Assmann等的综述,2004, Circulationl09III_8)。更特别地,重建HDL制剂的临床给药已经显示出能给患有近期急性冠脉综合征(ACS)的患者提供益处。通常，这样的重建HDL制剂包含如Apo-AI这样的蛋白质，如磷脂酰胆碱这样的脂质以及如胆酸盐或脱氧胆酸盐这样的去污剂。此外，可以包括胆固醇。如美国专利5，652，339中公开的，不使用有机溶剂生产重建的HDL制剂是有利的，在某些情况下，生产重建HDL制剂时，有机溶剂用于溶解脂质成分(例如，磷脂酰胆碱)。在临床上试验了这种类型的称为CSL-1ll的重建HDL制剂，但早在肝功能测试异常后就没有继续较高剂量的治疗了。用CSLlll治疗的患者在斑块负荷指数中显示出有益趋势。然而，与安慰剂比较时，在动脉粥样化体积的百分比变化或斑块体积的标称变化中没有获得统计学显著性(Tardif等，2007, JAMA-Exp.297E1)。概述本专利技术的目的是提供一种重建的HDL制剂，其减轻或避免了现有技术重建HDL制剂的一个或多个缺点。本专利技术的优选目的是提供一种毒性降低或最小化的重建HDL制剂。本专利技术的另一个优选目的是提供一种重建HDL制剂，其在包括但不限于冠状动脉粥样硬化的疾病或病症的预防性和/或治疗性处理中是有效的。本专利技术宽泛地涉及一种脂蛋白制剂，其包含载脂蛋白、磷脂和去污剂，其水平是无毒的，或至少呈现出相对低的毒性。在特定的实施方案中，去污剂和脂质的水平处于低于引起、导致肝毒性或与肝毒性相关的水平。在一个方面中，本专利技术提供了一种重建高密度脂蛋白(rHDL)制剂，其包含载脂蛋白或其片段；脂质；和去污剂，其水平为给予人时呈现出肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5-50%。在另一个方 面中，本专利技术提供了一种生产包含载脂蛋白；脂质；和去污剂的rHDL制剂的方法，所述方法包括提供所述去污剂的步骤，所述去污剂的水平为给予人时呈现出肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5-50%。在再另一个方面中，本专利技术提供了一种治疗人疾病、障碍或病症的方法，包括将根据本专利技术第一个方面的rHDL或根据第二个方面的方法生产的rHDL给予人的步骤，以由此治疗人的所述疾病、障碍或病症。在再另一个方面中，本专利技术提供了根据第一个方面的rHDL制剂或根据第二个方面的方法生产的rHDL制剂，用于治疗人的疾病、障碍或病症。优选地，去污剂的水平为呈现出肝毒性的去污剂水平的约5-10%。在某些实施方案中，这等于约0.03g/g载脂蛋白。优选地，去污剂是胆汁盐或胆汁酸。更优选地，去污剂是胆酸钠。载脂蛋白可以是高密度脂蛋白(HDL)的常规和/或功能性成分的任何脂蛋白。载脂蛋白优选为约20-50g/L的浓度。优选地，载脂蛋白是Apo-Al或其片段。合适地，脂质的水平为引起肝毒性或与肝毒性相关的脂质水平的约20-70%。优选地，脂质浓度为约30-60g/L。特别有利的脂质浓度为约30-50g/L，或在某些实施方案中，约34 或 47g/L。优选地，脂质是磷脂。更优选地，磷脂是或包含磷脂酰胆碱(PC )。在一个优选的实施方案中，载脂蛋白:脂质的摩尔比在1:20至1:100的范围中。更优选地，载脂蛋白:脂质的摩尔比在1:40至1:75的范围中。载脂蛋白:脂质特别有利的比例为约1:40或1:55。合适地,rHDL制剂进一步包含稳定剂。优选地,稳定剂是糖,如蔗糖。优选的浓度为约 65-85g/L rHDL 制剂。在整个说明书中，除非文中另外需要，词语“包含(comprise)”，“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将被理解为表示包含所述的整体或整体组,但不排除任何其他整体或整体组。附图简述参照以下附图，其有助于理解下文详细描述的本专利技术的非限制性实施方案，其中:附图说明图1显示了急性大鼠研究的结果，表明胆酸盐和磷脂酰胆碱的同时减少降低了肝毒性；图2显示出急性大鼠研究的结果，表明了胆酸盐的选择性减少降低了肝毒性；图3显示出在不同浓度的胆酸盐存在下，CSLlll的浊度分析结果；图4显示出在冷冻干燥和重建后，在不同浓度的胆酸盐的存在下，CSLlll的浊度结果;图5显示出在室温下(RT)，重建HDL1:50PC的浊度分析结果；图6显示出在37°C下，重建HDL1:50PC的浊度分析结果；图7显示出在RT下，重建HDL1:75PC的浊度分析结果；图8显示出在37°C下，重建HDL1:75PC的浊度分析结果；和图9提供了 rHDL制剂制造方法的实施方案的概览。详述本专利技术至少部分地源于出乎意料的发现:在现有技术中所述的由CSLlll重建HDL(rHDL)制剂呈现的肝毒性是由于过量的去污剂引起的，特别是就制剂中的去污剂与Apo-AI的比例来考虑时。在这点上，胆酸钠的水平为约0.3g/g Apo-A10然而，本专利技术人还发现了不能全部消除去污剂并且必须保留一定水平，由此rHDL制剂呈现出充分的稳定性和治疗活性。此外，出乎意料地发现了与CSLlll中存在的相比，脂质浓度的降低减轻了肝毒性，而基本上没有损害rHDL制剂的治疗活性。在进一步的发现中，鉴定出对rHDL制剂最佳的载脂蛋白:脂质的摩尔比。因此，在一个方面中，本专利技术提供了一种rHDL制剂，其包含载脂蛋白或其片段；月旨质和一定水平的去污剂，所述去污剂的水平为给予人时呈现出肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5-50%。如在此所用的，“重建HDL (rHDL)”制剂可以是功能上与血浆中通常存在的高密度脂蛋白(HDL)相似、类似、相应或模拟的任何人工生产的脂蛋白制剂或组合物。rHDL制剂包括在“HDL模拟物”和“合成HDL颗粒”的范围内。关于这点，“将rHDL制剂给予人时呈现出肝毒性”意思是给予人后rHDL制剂中存在的去污剂水平引起、导致此后的不利事件或至少与此后的不利事件相关。通常，不利事件是肝毒性，如通过异常或受损的肝功能所证实的。异常或受损的肝功能的非限制性实例包括升高的丙氨酸转氨酶活性(ALT)、升高的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和/或升高的胆红素水平。根据本专利技术，不会引起、导致不利事件或与不利事件无关的去污剂的合适水平，如前所述。通常，这将在灌输结束时进行测量。·优选地，去污剂的水平为呈现肝毒性的去污剂水平的约5-35%。该范围包括，例如，5%，10%, 15%，20%, 25%，30%和35%。更优选地，去污剂的水平为呈现肝毒性的去污剂水平的约5-20%。有利地，去污剂的水平为呈现肝毒性的去污剂水平的约5-10%。优选地，这些水平以呈现肝毒性的去污剂的最小或极本文档来自技高网...

【技术保护点】
重建的高密度脂蛋白（rHDL）制剂，其包含载脂蛋白或其片段；脂质；和去污剂，去污剂水平为给予人时呈现肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5‑50%。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.30 US 61/359,9251.重建的高密度脂蛋白(rHDL)制剂，其包含载脂蛋白或其片段；脂质；和去污剂，去污剂水平为给予人时呈现肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5-50%。2.权利要求1的rHDL制剂，其中去污剂的水平为呈现肝毒性的去污剂水平的约5-10%ο3.权利要求1或权利要求2的rHDL制剂，其中去污剂的水平为约0.5-1.5g/L。4.权利要求1-3任一项的rHDL制剂，其中去污剂的水平为约0.015-0.030g/g载脂蛋白。5.之前任一项权利要求的rHDL制剂，其中去污剂是胆汁盐或胆汁酸。6.权利要求6的rHDL制剂，其中去污剂是胆酸钠。7.之前任一项权利要求的rHDL制剂，其中载脂蛋白是Apo-Al或其片段。8.之前任一项权利要求的rHDL制剂，其中脂质是磷脂。9.权利要求8的rHDL制剂，其中磷脂是磷脂酰胆碱。10.之前任一项权利要求的rHDL制剂，其中脂质水平为呈现肝毒性的脂质水平的20-70%ο11.之前任一项权利要求的rHDL制剂，其中制剂进一步包含稳定剂。12.生产包含载脂蛋白、脂质和去污剂的rHDL制剂的方法，所述方法包括提供所述去污剂的步骤，去污剂水平为给予人`时呈现肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5-50%ο13.权利要求12的方法，其中去污剂的水平为呈现肝毒性的去污剂水平的约5-10%。14.权利要求12或权利要求13的方法，其中去污剂的水平为约0.5-1.5g/L。15.权利要求12-14任一项的方法，其中去污剂的水平为...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·莱特，M·伊姆波登，R·波利，M·韦尔希里，
申请(专利权)人：CSL有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU