高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法技术

技术编号:8659517 阅读:196 留言:0更新日期:2013-05-02 06:24
公开了不需要复杂的操作即可定量被检测试样中的高密度脂蛋白3(HDL3)中的胆固醇的方法。HDL3中的胆固醇的定量方法包含使与高密度脂蛋白3以外的脂蛋白进行反应的表面活性剂与被检测试样反应,使胆固醇移动至反应体系外的第1工序;和定量残留在反应体系内的胆固醇的第2工序。可以不需要超离心、前处理等复杂的操作,而通过自动分析装置特异性地定量被检测试样中的HDL3胆固醇。此外,也可以根据通过作为现有技术的被测物中HDL总胆固醇定量法而得到的总HDL胆固醇量,计算出与HDL3胆固醇量的差,从而定量HDL2胆固醇量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及高密度脂蛋白3 (以下有时称为“HDL3”)中的胆固醇(HDL3中的胆固醇以下有时称为“HDL3胆固醇”)的定量方法。
技术介绍
高密度脂蛋白(HDL)胆固醇与由于从包括动脉硬化壁在内的各组织接收胆固醇而蓄积在细胞内的胆固醇的去除作用有关,因此也被称为胆固醇逆向转运体系。已知其与冠状动脉硬化等动脉硬化疾病成负相关,已知HDL为低值时作为血脂异常病的一种而设定有低值界限,作为动脉硬化的指标有用。HDL由载脂蛋白和磷脂、胆固醇、中性脂肪构成。HDL分类为比重为d=1. 063 1. 210g/mL、进一步 d =1. 063 1. 125g/mL 的 HDL2 和 d =1. 125 1. 210g/mL 的 HDL3 的2种组分。根据脂蛋白的分布曲线,在d=1. 125部分确认到凹口,从这里开始比重重的部分为HDL3。此外,还存在根据HDL中的载脂蛋白中的载脂蛋白E含量差,将载脂蛋白E的含量多的HDL作为载脂蛋白E-rich HDL的亚组分的分类法。已知不仅现有的所有HDL蛋白,而且HDL2和HDL3各亚组分也显示出不同的作用。已知在临床中,由于CETP缺损,HDL无法代谢成LDL、IDL,HDL胆固醇量增加。由于CETP缺损而增加的HDL为HDL2。HDL2被认为具有抗动脉硬化作用。此外,也被认为由于CETP缺损,载脂蛋白E-rich HDL上升,对于Apo-E — richi HDL,其胆固醇去除能强,具有抗血小板作用,被认为是HDL中的有益蛋白。此外,由于肝脂酶活性的降低,HDL3不变化为HDL2,HDL3增加。启示了 HDL3的增加导致冠动脉疾病的发病率增加。推测根据这些倾向,分别测定HDL亚组分有助于判断动脉硬化疾病的有无、原因。此外,现在各制造商都在进行基于这些HDL亚组分的作用,阻碍CETP的作用,使LDL胆固醇量减少,使HDL胆固醇量增加的治疗药的研发。确立HDL亚组分的简便的测定方法可能关系着详细的作用的解明、它们的治疗效果O作为到目前为止已知的HDL亚组分的测定方法,已知有超离心法、高效液相色谱法(HPLC)法、HDL3沉淀法(专利文献I )、NMR法等。超离心是利用脂蛋白的比重差通过离心进行分级的方法,具有操作需要熟练、花费数日、以及费用也高的缺点。对于冈崎等人的使用HPLC分离HDL2和HDL3的方法,操作需要时间,需要特殊的设备。HDL3沉淀法是通过含有2价金属离子和硫酸葡聚糖的试剂使HDL3以外的物质凝集,通过离心回收上清部分的HDL3,通过自动分析装置进行测定的方法。其也具有操作需要熟练、此外是动手方法需要被测物的前处理操作、到测定为止需要花费一定的时间等缺点,不通用。此外,NMR法是通过核磁共振测量脂蛋白的粒子数的方法,需要特殊的设备,不常用。需要说明的是,存在HDL亚组分的分析方法(专利文献2)。可以通过通用自动分析装置测定,使用通过使用表面活性剂阻碍HDL3以外的脂蛋白不受酶的作用的方法,HDL3反应中,存在目标以外的脂蛋白,在对测定产生影响、或者在未阻碍完全的情况下,有测量到HDL3以外的脂蛋白的可能。需要专利技术代替这样的方法可以简便且更选择性地定量胆固醇量的试剂。现有技术文献 专利文献 专利文献1:日本特开2009-207463号公报 专利文献2:日本特开2001-346598号公报。
技术实现思路
专利技术要解决的问题 本专利技术的目的在于提供一种不需要复杂的操作即可定量被检测试样中的HDL3的方法。解决问题的技术手段 本申请专利技术人经过深入研究,结果发现了与高密度脂蛋白3以外的脂蛋白进行反应,但几乎不与高密度脂蛋白3进行反应的表面活性剂。并且想到,使这样的表面活性剂与被检测试样反应,然后定量残留的HDL3中的胆固醇,从而可以定量被检测试样中的HDL3胆固醇,并实验性地确认了上述想法可以实现,完成了本专利技术。S卩,本专利技术提供一种,其包含使与高密度脂蛋白3以外的脂蛋白进行反应的表面活性剂与被检测试样反应,使胆固醇移动至反应体系外的第I工序;和定量残留在反应体系内的胆固醇的第2工序。专利技术效果 根据本专利技术,可以不需要超离心、前处理等复杂的操作,而通过自动分析装置特异性地定量被检测试样中的HDL3胆固醇。此外,也可以根据通过作为现有技术的被测物中HDL总胆固醇定量法而得到的总HDL胆固醇量,计算出与HDL3胆固醇量的差,从而定量HDL2胆固醇量。附图说明[图1]是使用公知的HDL沉淀法(测定方法A)与市售的HDL测定试剂的测定结果的相关图。[图2]是公知的HDL沉淀法(测定方法A)与通过本专利技术的定量方法得到的测定结果的相关图。[图3]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂D后的各组分的吸光度变化的结果的图。[图4]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂D后的各组分的吸光度变化的结果的图。[图5]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂G后的各组分的吸光度变化的结果的图。[图6]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂H后的各组分的吸光度变化的结果的图。[图7]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂I后的各组分的吸光度变化的结果的图。[图8]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂K后的各组分的吸光度变化的结果的图。[图9]是表示本专利技术的实施例中进行的、添加第2工序的试剂L后的各组分的吸光度变化的结果的图。具体实施例方式作为供于本专利技术的方法的被检测试样,只要是要定量其试样中的HDL3胆固醇的被检测试样就没有特别限定,优选为血清或血浆或它们的稀释物,特别优选血清或其稀释物。本专利技术的第I工序中,使与HDL3以外的脂蛋白进行反应的表面活性剂与被检测试样反应。作为与HDL3以外的脂蛋白反应的表面活性剂,可以列举出聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚等非离子表面活性剂 ,聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、酰胺醚硫酸盐和聚氧乙烯-硬脂胺等阴离子表面活性剂;椰子油脂肪酸-酰胺丙基二甲基-氨基醋酸内铵盐、烷基二甲基-氨基醋酸内铵盐和月桂基甜菜碱等两性表面活性剂;以及月桂基三甲基氯化铵这样的阳离子表面活性剂,但不限定于这些。更具体而言,作为非离子表面活性剂,可以列举出作为聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚的二 ^ ^ Y > A500(商品名、花王公司制,以下,公司名为制造公司,与公司名一起记载的全部为商品名);作为阴离子可以列举出作为聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物的7。卟口二 7夕F127 (旭电化)、7。卟口二 7夕F68 (旭电化)7。卟口二 7夕P103 (旭电化)、作为酰胺醚硫酸盐的寸^卜''CF-1O(日本油脂)、作为聚氧乙烯-硬脂胺的f ^ S —> S210 (日本油脂);作为两性表面活性剂,可以列举出作为椰子油脂肪酸-酰胺丙基二甲基-氨基醋酸内铵盐的二 〃寸> 7 7 > BDF-SF (日本油脂)、作为烷基二甲基-氨基醋酸内铵盐的二 ^寸> 7 7 > BF (日本油脂)、作为月桂基甜菜碱的7 卜一> 24B (花王);作为阳离子表面活性剂,可以列举出作为月桂基三甲基氯化铵的-一夕^ > 24P (花王)。这些可以单独使用,也可以组合2种以上使用。与HDL3以外的脂蛋白进行反应的表本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.23 JP 2010-1663761.高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法,其包含使与高密度脂蛋白3以外的脂蛋白进行反应的表面活性剂与被检测试样反应,使胆固醇移动至反应体系外的第I工序;和定量残留在反应体系内的胆固醇的第2工序。2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述表面活性剂为作为聚氧乙烯二苯乙烯化苯基醚的至少I种非离子表面活性剂。3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述表面活性剂为选自聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、酰胺醚硫酸盐和聚氧乙烯-硬脂胺中的至少I种阴离子表面活性剂。4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述表面活性剂为选自椰子油脂肪酸-酰胺丙基二甲基-氨基醋酸内铵盐、烷基二甲基-氨基醋酸内铵盐和月桂基甜菜碱中的至少I种两性表面活性剂。5.根据权利要求1所述的方法,其中,所述表面活性剂为作为月桂基三甲基氯化铵的阳离子表面活性剂。6.根据权利要求1 5中任一项所述的方法,其中,至少与高密度脂蛋白3进行反应的表面活性剂存在下进行所述第2工序。7.根据权利要求6所述的方法,其中,第2工序中使用的表面活性...

【专利技术属性】
技术研发人员:樋口麻衣子伊藤康树
申请(专利权)人:电化生研株式会社
类型:
国别省市:

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