本发明专利技术涉及结合PCSK9的基于纤连蛋白的支架域蛋白质。本发明专利技术还涉及新蛋白质在治疗应用中用于治疗动脉粥样硬化、高胆固醇血症及其他胆固醇相关疾病的用途。本发明专利技术进一步涉及包含这些蛋白质、编码这些蛋白质或其片段的多核苷酸的细胞，且涉及包含编码该新蛋白质的多核苷酸的载体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶克新(kexin)9型(PCSK9)的基于纤连蛋白的支架域蛋白质。本专利技术还涉及该新蛋白质在治疗应用中用于治疗动脉粥样硬化、高胆固醇血症及其他胆固醇相关疾病的用途。本专利技术进一步涉及包含这些蛋白质、编码这些蛋白质或其片段的多核苷酸的细胞，且涉及包含编码这些新蛋白质的多核苷酸的载体。现有技术动脉粥样硬化是导致造成工业化国家大多数死亡的冠心病(CHD)的动脉疾病(Lusis (2000))。现已充分确定CHD的若干风险因素血脂异常、高血压、糖尿病、吸烟、不良饮食、不活动及紧张。在临床上最相关且常见的血脂异常以高甘油三酯血症存在或不存在下伴随高胆固醇血症的·低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白(LDL及VLDL)的增加为特征(Fredrickson等人(1967))。LDL胆固醇的单独升高是CHD的最常见风险因素之一。PCSK9 (亦称作HCH0LA3、NARC-1或 3)系属于分泌性枯草杆菌酶家族的蛋白酶K亚家族的蛋白酶(Naureckiene 等人,Arch. Biochem. Biophy.，420:55-57 (2003))。已显不，PCSK9是胆固醇稳态及循环低密度脂蛋白浓度的关键调节者。循环PCSK9蛋白通过直接结合LDL受体并促进其在肝细胞中的降解来控制LDL代谢。PCSK9介导的LDL受体蛋白质及活性的下调可减少LDL从循环中的清除并提高LDL浓度。已知PCSK9的若干突变形式，包括 S127R、N157K、F216L、R218S 及 D374Y，其中 S127R、F216L 及 D374Y 与常染色体显性高胆固醇血症(ADH)关联。人们相信野生型PCSK9可增加LDL受体的更换速率，从而导致LDL 清除降低(Maxwell 等人，Proc. Natl. Acad. Sc1. , 102(6) : 2069-2074 (2005) ；Benjannet等人及Lalanne等人)，而PCSK9的功能丧失突变会导致低密度脂蛋白受体(LDLR)浓度增加、循环LDL清除增加及血衆胆固醇水平的相应降低(Rashid等人，Proc. Natl. Acad.Sc1.，102(15) : 5374-5379 (2005))。因此，PCSK9是治疗动脉粥样硬化、高胆固醇血症及其他胆固醇相关疾病的潜在靶标。基于纤连蛋白的支架(fibronectin based scaffolds)是一个蛋白质家族，这些蛋白质能够进化而结合任何感兴趣的化合物。这些蛋白质通常利用源自纤连蛋白III型(Fn3)或Fn3-样结构域的支架，以具有天然或工程化抗体(亦即，多克隆、单克隆或单链抗体)的特征的方式作用，且另外具有结构优势。具体而言，这些抗体模拟物的结构已经设计而具有最优的折叠、稳定性及溶解性，甚至在通常导致抗体结构及功能损失的条件下亦如此。基于纤连蛋白的支架蛋白质的一个实例是阿德奈汀(Adnectin)(Adnexus, Bristol-Myers Squibb R&D 公司)。纤连蛋白III型(Fn3)结构域自N末端至C末端按顺序包含β或β样链A ;环AB ；β或β样链B ;环BC ; β或β样链C ;环CD ; β或β样链D ;环DE ; β或β样链E ；环EF^或β样链F ;环FG;及β或β样链G。环AB、BC、CD、DE、EF及FG中的任一者或全部皆可参与靶物结合。BC、DE及FG环在结构与功能两方面皆与免疫球蛋白的互补决定区(OTR)类似。美国专利第7，115，396号描述了 Fn3结构域蛋白质，其中改变BC、DE及FG环可获得高亲和力TNFa结合物。美国专利申请公开第2007/0148126号描述了 Fn3结构域蛋白质，其中改变BC、DE及FG环可获得高亲和力VEGFR2结合物。获得结合PCSK9的经改良的纤连蛋白域支架蛋白质对于治疗性处理动脉粥样硬化、高胆固醇血症及其他胆固醇相关疾病将是有利的。
技术实现思路
本申请提供针对人类PCSK9的阿德奈汀。本专利技术的一个方面提供包含Fn3结构域的多肽，其中一或多个溶剂可及(solvent accessible)环已经过随机化或突变。在一些实施方案中，Fn3结构域是源自人类纤连蛋白III型结构域的野生型第10模块C°Fn3)的Fn3结构域。在一些实施方案中，本专利技术的kiFM多肽与人类uiFr^结构域至少40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85% 或 90% 同一。在一些实施方案 中，一或多个选自BC、DE及FG的环的长度可相对于相应的人类纤连蛋白环延长或缩短。在一些实施方案中，本专利技术多肽包含纤连蛋白III型第10C°Fn3)结构域，其中该10Fn3结构域包含环AB ;环此；环CD ^DE ^EF ;及环FG ;且选自环BC、DE及FG中的至少一个环具有相对于人类wFM结构域中相应环的序列经改变的氨基酸序列。在一些实施方案中，本专利技术多肽包含含有与非环区至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%同一的氨基酸序列的Fn3结构域。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质的BC环包含选自由SEQ ID NO:2_17、106-135及301-303组成的组的氨基酸序列。在某些实施方案中，本专利技术蛋白质的BC环包含如表3中所展示的SEQ ID N0:2-17、106-135及301-303中任一者的阴影部分。举例而言，在一个实施方案中，BC 环包含序列 PPPSHGYG(SEQ ID NO: 2 的残基 3_10)、DAPAHAYG (SEQ ID NO: 5的残基 3-10)、EPFSRLPGGGE (SEQ ID NO: 106 的残基 3-13)或 DAPADGGYG(SEQ ID NO: 107 的残基3_11)。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质的DE环包含选自SEQ ID NO: 18-27及136-141的氨基酸序列。在某些实施方案中，本专利技术蛋白质的DE环包含如表3中所示的SEQ IDNO: 18-27及136-141中任一者的阴影部分。举例而言，在一个实施方案中，DE环包含序列PGKG(SEQ ID NO: 18 的残基 2-5)、VGVG(SEQ ID NO: 27 的残基 2-5)或 VSKS (SEQ ID NO: 137的残基2-5)。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质的FG环包含选自SEQ ID NO:28-38及142-172的氨基酸序列。在某些实施方案中，本专利技术蛋白质的DE环包含如表3中所示的SEQ IDNO:28-38及142-172中任一者的阴影部分。举例而言，在一个实施方案中，FG环包含序列 EYPYKHSGYYHR(SEQ ID N0:28 中的残基 1-12)、EYPYDYSGYYHR(SEQ ID NO: 142 中的残基1-12)或 EFDFVGAGYYHR(SEQ ID NO: 167 中的残基 1-12)。在一些实施方案中，kiFM结构域可以以氨基酸取代、插入或缺失开始及/或结束。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质包含SEQ ID NO:2-17、106-135及301-303中所示的BC环序列中的一个环序列；SEQ ID N0:18-27及136-141中所示的一个DE本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.13 US 61/323,562;2010.05.03 US 61/330,7311.一种多肽，其包含纤连蛋白III型第10结构域C°Fn3)，其中该uiFr^的选自环BC、DE及FG的至少一个环具有相对于人wFnS结构域中相应环的序列经改变的氨基酸序列，且其中该多肽结合(前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin9型)PCSK9。2.权利要求1所述的多肽，其中该多肽以小于500nM的Kd结合PCSK9。3.权利要求1或2所述的多肽，其中该BC环包含根据式(X1)zX2GGEQID NO:449)的序列，其中X1为任意氨基酸，Z为6-9的数值，且X2为Y或H。4.权利要求1-3中任一项所述的多肽，其中所述BC环包含如表3中所示的SEQIDNO:2-17、107-135及301-303中任一者的阴影部分。5.权利要求3或4所述的多肽，其中所述BC环选自SEQID NO: 2_17、107-135及301-303。6.权利要求1-5中任一项所述的多肽，其中所述DE环包含根据式X1X1X1XJSEQIDNO:450)的序列，其中X1为任意氨基酸；且&为6或S。7.权利要求1、2或6中任一项所述的多肽，其中所述DE环包含如表3中所示的SEQIDNO: 18-27及136-141中任一者的阴影部分。8.权利要求6或7所述的多肽，其中所述DE环选自SEQID NO: 18-27及136-141。9....
【专利技术属性】
技术研发人员：R坎普豪森，ST克洛德，JH戴维斯，FM丹赫兹，A赛埃德科西，D利波夫塞克，罗志鸣，TS米切尔，GC雷克斯特劳，KA拉索，罗景雄，B米奥，RA帕克，DF西特科夫，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：
国别省市：
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