人源化抗白介素3受体α链抗体制造技术

本公开提供了结合白介素-3受体α链的抗体和其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及抗白介素3受体α链抗体和其用途。
技术介绍
功能性白介素3受体是包含特定α链(IL-3Ra ;OT123)和与粒细胞巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)和白介素5(IL-5)共享“共同” IL-3受体β链(KD131)的杂二聚体。IL-3R α是含有细胞外结构域(参与IL_3结合)、跨膜结构域和约50个氨基酸的短细胞质尾部的推导分子量为约41kDa的I型跨膜蛋白。细胞外结构域由两个区构成约100个氨基酸的N端区，其序列显示与GM-CSF和IL-5受体α链的等同区类似；以及接近跨膜结构域的区，其含有四个保守半胱氨酸残基和此细胞因子受体家族的其它成员所共有的WSXWS基元。IL-3结合结构域包含由两个Ig样折叠结构域构成的约200个氨基酸残基的细胞因子受体基元(CRM)。IL-3Ra的细胞外结构域高度糖基化，具有配体结合和受体信号传导所必需的N-糖基化。IL-3RQ在整个造血系统中广泛表达，包括造血祖细胞、肥大细胞、红细胞、巨核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞、嗜中性粒细胞和CD5+B淋巴细胞。非造血细胞(如浆细胞样树突状细胞(PDC)、莱氏细胞(Leydig cell)、内皮细胞和基质细胞)也表达IL-3Ra。IL-3Ra也由某些疾病病况中所涉及的细胞表达，所述疾病病况包括骨髓发育不良综合症、髓细胞性白血病(例如急性骨髓性白血病(AML))、恶性淋巴增殖性病症(如淋巴瘤)、过敏症和自体免疫性疾病(如狼疮、休格伦氏综合症(Sjdgrerfs syndrome)或硬皮病)。因此，需要抗IL-3Ra抗体用于治疗性应用。专利技术概述本公开是基于专利技术人制造了特异性结合IL-3RCI的人源化抗体。人源化后，专利技术人发现抗体对IL-3Ra的亲和力降低。因此，专利技术人进行了亲和力成熟以提高抗体对IL-3Ra的亲和力。未预料到的是，亲和力成熟的抗体在重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vl)的框架区(FR)以及轻链的⑶Rl中包括突变。专利技术人还制造了这种抗体的能够诱导增强水平 的效应功能的形式。专利技术人还发现，诱导效应功能增强的特定修饰产生另一合意特性，即向哺乳动物施用修饰的抗体后，哺乳动物体内NK细胞的数量最初降低，然而接着扩增至高于施用前的水平。专利技术人还证实，在NK细胞数量与靶细胞(例如白血病细胞)的溶解之间存在相关性。本公开大体涉及能够特异性结合IL-3RCI链的基于鼠类抗体的免疫球蛋白。在一个实施例中，本公开提供分离的或重组免疫球蛋白，其特异性结合IL-3Ra链且包含含有SEQ ID N0:8中所示的序列的'的互补决定区(OTR)和SEQ ID N0:9中所示的Vh的CDR。本公开另外或替代地提供分离的或重组抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合IL-3Ra链且包含含有SEQID N0:8中所示的序列的'的⑶R和SEQ ID NO:9中所示的Vh的CDR0本公开另外或替代地提供分离的或重组人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合IL-3R α链且包含含有SEQ ID NO:8中所示的序列的'的 CDR和SEQ ID NO: 9中所示的Vh的CDR。在一个实施例中，本公开提供分离的或重组免疫球蛋白，其特异性结合IL_3Ra链且分别包含SEQ ID NO:2-7的氨基酸序列。本公开另外或替代地提供分离的或重组抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合IL-3Ra链且包含SEQ IDN0:2_7的氨基酸序列。本公开另外或替代地提供分离的或重组人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合IL-3Rα链且包含SEQ ID NO:2_7的氨基酸序列。例如，免疫球蛋白或抗体包含⑴包含分别如SEQ ID N0:2、3和4中所示的CDRU2和3的轻链可变区(Vl);和(ii)包含分别如SEQ ID N0:5、6和7中所示的CDRU2和3的重链可变区(Vh)。例如，免疫球蛋白或抗体包含⑴包含以下的a)包含SEQ ID NO:2中所示的序列CDRl ；CDR2 ;和CDR3 ;和CDRl ；CDR2 ;和CDR3。本公开另外或替代地提供分离的或重组人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合IL-3Ra链且包含含有根据SEQ ID NO:8的氨基酸序列(或由SEQ ID NO: 20中所示的序列编码)的\和/或含有根据SEQ ID NO:9的氨基酸序b)包含SEQID NO:3中所示的序列c)包含SEQID NO:4中所示的序列( )包含以下的Vh:d)包含SEQID NO:5中所示的序列e)包含SEQID NO:6中所示的序列f)包含SEQID NO:7中所示的序列(或由SEQIDNO: 14中所示的序列编码)的(或由SEQIDNO: 15中所示的序列编码)的(或由SEQIDNO: 16中所示的序列编码)的(或由SEQIDNO: 17中所示的序列编码)的(或由SEQIDNO: 18中所示的序列编码)的(或由SEQIDNO: 19中所示的序列编码)的列(或由SEQID NO:21中所示的序列编码)的VH。本公开另外或替代地提供分离的或重组人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段能够特异性结合IL-3Ra链且包含含有根据SEQ ID NO:8的氨基酸序列(或由SEQ ID NO: 20中所示的序列编码)的'和含有根据SEQ ID NO: 9的氨基酸序列(或由SEQ IDNO: 21中所示的序列编码)的VH。本公开所涵盖的示例性抗原结合片段包括⑴结构域抗体(dAb)；(ii)Fv ；·(iii) scFv或其稳定形式(例如二硫键稳定的scFv)；(iv) 二聚scFv或其稳定形式；(V)双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体或更高级多聚体；(vi)Fab 片段；(vii)Fab’ 片段；(viii)F(ab’ )片段；(ix)F(ab’)2 片段；(X)与抗体的Fe区融合的(i)-(ix)中的任一个；(xi)与结合免疫效应细胞的抗体或其抗原结合片段融合的(i)-(ix)中的任一个。在一个实施例中，免疫球蛋白或抗体去除或至少部分消除其所结合的细胞，例如白血病细胞和/或嗜碱性粒细胞和/或PDC。如本领域的技术人员根据本文的公开内容将显而易见，示例性免疫球蛋白或抗体能够在不与毒性化合物缀合的情况下去除或至少部分消除其所结合的细胞。在一个实施例中，免疫球蛋白或抗体能够诱导效应功能,例如导致杀死所述免疫球蛋白或抗体所结合的细胞的效应功能。示例性效应功能包括ADCC、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(⑶C)。在一个实施例中，免疫球蛋白或抗体能够诱导ADCC。在一个实施例中，免疫球蛋白或抗体包含能够诱导效应功能的抗体Fe区。例如，效应功能是Fe介导的效应功能。在一个实施例中，Fe区是IgGlFc区或IgG3Fc区或杂交的 IgGl/IgG2Fc 区。在一个实施例中，免疫球蛋白或抗体能够诱导与野生型人IgGl和/或人IgG3Fc区类似(例如没有显著不同或在约10%以内)或相同水平的效应功能。在一个实施例中，免疫球蛋白或抗体能够诱导增强水平的效应功能。在一个实施例中，由免疫球蛋白或抗体诱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.02.17 AU PCT/2011/000155;2010.08.17 US 61/3741.分离的或重组的抗体，其能够特异性结合白介素(IL)-3Ra链，其中所述抗体包含⑴包含分别如SEQ ID N0:2、3和4所示的CDRl、2和3的轻链可变区(Vl)；(ii)包含分别如SEQID N0:5、6和7所示的CDRl、2和3的重链可变区(Vh);和(iii)包含根据Kabat的EU编号系统的氨基酸取代S239D和I332E的重链恒定区。2.分离的或重组的人源化抗体，所述抗体能够特异性结合白介素(IL)-3Ra链且包含(i)包含根据SEQID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区(\)和包含根据SEQ ID NO:9 的氨基酸序列的重链可变区(Vh);和(ii)包含根据Kabat的EU编号系统的氨基酸取代S239D和I332E的重链恒定区。3.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述重链恒定区恒定区包含SEQID N0:11的残基121-450之间(包括残基121和450)所示的序列。4.分离的或重组的人源化抗体，所述抗体能够特异性结合IL-3Ra链且包含含有SEQ ID NO: 13所示的序列的轻链和含有SEQ ID NO: 11所示的序列的重链。5.如权利要求1至4中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔·帕诺塞斯，
申请(专利权)人：CSL有限公司，
类型：
国别省市：