壳聚糖在制备禽用疫苗组合物中的应用制造技术

技术编号:8444935 阅读:174 留言:0更新日期:2013-03-20 19:33
壳聚糖在制备禽用疫苗组合物中的应用。一种禽用疫苗组合物,包括新城疫灭活病毒或禽流感灭活病毒等禽用疫苗抗原,及壳聚糖溶液。所述禽用疫苗包括水相和油相组成,其中,壳聚糖溶液在水相中。其中,所述壳聚糖溶液的浓度为0.1%~0.5%W/V;最优选地,所述壳聚糖溶液的浓度为0.2%~0.5%W/V。本发明专利技术的禽类疫苗组合物中抗原量更少,可以减少禽类疫苗的副反应,并降低禽类疫苗的成本,使得禽类疫苗组合物如新城疫疫苗或禽流感疫苗等更适合于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种壳聚糖在制备禽用疫苗组合物中的应用,更具体地涉及一种壳聚糖在制备新城疫疫苗或禽流感疫苗等禽用疫苗组合物中的应用。
技术介绍
疫苗佐剂被用于达成二个目的其减缓抗原从注射部位释出,且其刺激免疫系统。传统疫苗通常由灭活或被杀死或经修饰的活致病微生物的粗制备物组成。与这些致病微生物的培养物相关的杂质可作为增强免疫应答的佐剂。然而加入佐剂可容许使用较小剂量的抗原来刺激类似的免疫应答,从而减少疫苗的制造成本。因此,当将药剂与佐剂组合时可显 著增加某些可注射药剂的效力。在选择佐剂时必须考虑许多因素。佐剂应该以有效方式使抗原的释出和吸收速率缓慢,且对宿主的毒性、变应原性、刺激及其它副作用最小。为了使人满意,佐剂应为非杀病毒性、可生物降解、可持续产生高水平的免疫力、能刺激交叉保护作用、可与多种抗原兼容、在多种物种中有效、对宿主无毒且安全(如无注射部位反应)。其它期望的佐剂特征为可微量给药、剂量节省、具有优良的货架稳定性、可承受干燥、可制成不含油、可作为固体或液体存在、为等张性、容易制造且其制造并不昂贵。最后,高度期望能够根据疫苗接种方案的需要而将佐剂配置成诱导体液或细胞免疫应答或二者兼有。然而,可符合上述条件的佐剂的数量有限。壳聚糖(Chitosan),也称几丁聚糖、脱乙酰几丁质、聚氨基葡萄糖、可溶性甲壳素,化学名为聚合β -(1,4)-2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖,由虾、蟹等富含甲壳素的物质经脱钙、脱蛋白、脱色、脱乙酰等工艺加工而成,是甲壳质脱乙酰反应后的物质,为分子量90 120kDa的生物大分子。新城疫、禽流感、传染性性支气管炎、传染性法氏囊等禽用疫苗采用油佐剂,需要加入较多的抗原才能达到免疫效果,这样做有两个缺陷一是增加了疫苗成本,二是需要注射较多的疫苗才能实现免疫保护,增加了动物应激和药物残留。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术的主要目的在于提供一种壳聚糖在制备新城疫疫苗或禽流感疫苗等禽用疫苗组合物中的应用,以实现减少禽用疫苗组合物中抗原量、减少疫苗的副反应并降低成本。技术方案一种禽用疫苗组合物,包括禽用疫苗抗原,及壳聚糖溶液。本专利技术的禽用疫苗中的抗原包括新城疫病毒、禽流感病毒、传染性性支气管炎病毒或传染性法氏囊病毒的灭活抗原;但是本专利技术对抗原种类没有特别的限定,可以为灭活抗原或活病毒等形式;优选地,本专利技术的禽用疫苗为新城疫疫苗,其中,含有效量的新城疫病毒灭活抗原;优选地,本专利技术的禽用疫苗为禽流感疫苗,其中,含有效量的禽流感病毒的灭活抗原。本专利技术的禽用疫苗对抗原量也没有特别的限定,只要达到常规的抗原量即可;优选地,本专利技术通过使用壳聚糖溶液,还可以减少抗原量为原抗原量的1/2 ;更优选地,减少至原抗原量的1/3。例如常规的新城疫疫苗(不含壳聚糖溶液)的抗原量(如约2. 3X 109 0EID50/ml抗原量,或达到足够治疗或预防新城疫疾病的效果即可)或更低;优选地,本专利技术通过使用壳聚糖溶液,可以减少新城疫抗原量为原抗原量的1/2 ;更优选地,减少至原抗原量的1/3。例如常规的禽流感疫苗(不含壳聚糖溶液)的抗原量(如约3. 5X 109 0EID50/ml抗原量,或达到足够治疗或预防禽流感疾病的效果即可)或更低;优选地,本专利技术通过使用壳聚糖溶液,可以减少禽流感抗原量为原抗原量的1/2 ;更优选地,减少至原抗原量的1/3。 优选地,本专利技术所述的壳聚糖溶液的浓度为O. 01 % O. 8% W/V ;更优选地,所述壳聚糖溶液的浓度为O. 1% O. 5% W/V ;最优选地,所述壳聚糖溶液的浓度为O. 2% O.5% ff/Vo优选地,本专利技术所述的禽用疫苗为灭活疫苗;更优选地,为油乳剂型,即本专利技术的所述禽用疫苗组合物包括水相和油相组成,其中,壳聚糖溶液在水相中。因此,本专利技术提供了一种壳聚糖溶液作为上述禽用疫苗组合物的佐剂中的用途。本专利技术还提供了一种壳聚糖溶液作为新城疫疫苗组合物或禽流感疫苗组合物的佐剂中的用途。本专利技术还提供了一种壳聚糖溶液作为禽流感疫苗组合物的佐剂中的用途。优选地,作为上述疫苗组合物的佐剂的壳聚糖溶液的浓度为O. 01% O. 8% W/V ;更优选地,壳聚糖溶液的浓度为O. 1% O. 5% W/V ;最优选地,所述壳聚糖溶液的浓度为O.2% O. 5% ff/Vo由本专利技术后续实验证明,本专利技术通过使用壳聚糖溶液作为疫苗的佐剂,可以提高禽类对疾病的抵抗力,因此,本专利技术的禽类疫苗组合物中抗原量更少,可以减少禽类疫苗的副反应,并降低禽类疫苗的成本,使得禽类疫苗组合物如新城疫疫苗或禽流感疫苗等更适合于工业化生产。具体实施例方式实施例I :含2% W/V的壳聚糖溶液的制备O. 5M 乙酸钠溶液用 4. Ig 乙酸钠(购自 Sigma Chemical Co. , St. Louis, MO)溶于50ml去离子水,用约7ml冰乙酸将pH调至4. 5,再加入I. 5ml冰乙酸补偿聚氨基葡萄糖的加入对溶液PH的影响。溶液总体积用去离子水调至100ml.2g壳聚糖(上海其胜生物制品有限公司产品,聚合度88. 5% )缓慢加入上述乙酸钠溶液并不断搅拌2-3小时直到壳聚糖溶解。O. 22 μ m滤膜过滤除去杂质,112°C 30min高压灭菌,4 °C保存。实施例2 :壳聚糖在制备新城疫疫苗组合物的佐剂中的应用I.新城疫病毒(下简称NDV) Lasota株毒种繁殖及鉴定I. I毒种繁殖鸡新城疫病毒Lasota株,购自中国兽医药品监察所。将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(10_3 10_4),按O. Iml/枚尿囊腔接种10日龄SPF胚,培养120h,每隔4 6小时照胚I次,及时取出死亡的胚,选接种后72 120小时死亡且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液,装于灭菌容器中。将检验无菌且HAS I 512的鸡胚液混合,定量分装,每瓶2ml,冷冻保存。I. 2病毒含量测定将上述毒种用灭菌生理盐水作10倍系列稀释,按照10_7、10_8、10_9比例稀释毒种。上述三个稀释度经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚各5枚,每胚O. lml,37 °C继续孵育,48h前死去的胚弃去不计,在48 120h死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度的鸡胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120h,取出所有活胚,逐个收获鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,凝集价> I 128者判为感染,计算EID5tl,结果为EID50 彡 IO8 70. Imlo2.鸡新城疫病毒(下简称NDV) LaSota株制苗用病毒液制备·2. I病毒液制备取生产用NDV La Sota株毒种,用灭菌生理盐水作200倍稀释,经尿囊腔接种10日龄非免疫鸡胚,每胚O. 2ml。置36 37°C孵育,每4小时照蛋I次,随时取出死亡鸡胚,直至96小时全部取出,置2 8°C冷却12 24小时后收取尿囊液,死胚和活胚分别收获,置_20°C保存。抽样测定HA效价及EID5tl的测定,HA效价低于I : 128者弃去,同时每O. Iml病毒液的病毒含量为8. IXIO8 0EID50o2. 2灭活上述收获的病毒液分别加入10%甲醛溶液,随加随摇,使其充分混合,甲醛溶液的终浓度为O. 1%。加甲醛溶液后最好倾倒另一瓶中,以避免瓶颈附近粘附的病毒未能接触灭活剂本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种禽用疫苗组合物,其特征在于,包括疫苗抗原,及壳聚糖溶液。

【技术特征摘要】
1.一种禽用疫苗组合物,其特征在于,包括疫苗抗原,及壳聚糖溶液。2.根据权利要求I所述的禽用疫苗组合物,其特征在于,所述壳聚糖溶液的浓度为O. 01% O. 8% ff/Vo3.根据权利要求I所述的禽用疫苗组合物,其特征在于,所述壳聚糖溶液的浓度为O. 1% O. 5% ff/Vo4.根据权利要求I所述的禽用疫苗组合物,其特征在于,所述壳聚糖溶液的浓度为O. 2% O. 5% ff/Vo5.根据权利要求I所述的禽用疫苗组合物,其特征在于,所述疫苗抗原为新城疫病毒、禽流感病毒、传染性性支气管炎病毒或传染性法氏囊病毒的灭活抗原。6.根据权利要求I所...

【专利技术属性】
技术研发人员:张许科孙进忠
申请(专利权)人:普莱柯生物工程股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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