一种分离高盐环境放线菌的培养基及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分离高盐环境放线菌的培养基及其应用。培养基由甘露醇1%、丙氨酸0.1%、K2HPO4?0.1%、MgSO4?7H2O?0.1%、CaCO3?0.02%、FeSO4?7H2O?0.001%、Agar?1.8%、微量盐0.0003%、复合维生素0.0004%、生物素0.000025%、重铬酸钾0.005%组成；微量盐由FeSO4?7H2O、MnCl2?4H2O和ZnSO4?7H2O各0.0001%组成；复合维生素由B1、B2、B6、烟酸、肌醇、泛酸、对氨基苯甲酸、叶酸各0.00005%组成；该培养基适合高盐、寡营养的高盐环境放线菌的分离，具有广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及工业微生物
，具体的说，本专利技术具体涉及一种分离高盐环境放线菌的培养基及其应用的

技术介绍
现有技术认为，用一般的分离方法从环境样品中获得的微生物纯培养物重复性非常高，也很难再分离到新物种。尤其是放线菌，由于其产生多种具有生物活性的次级代谢产物而受到微生物学家的广泛关注，但是目前用普通的分离方法筛选到的菌株大部分都是已知菌和常见菌，这给当前活性物质的筛选带来了极大的困难。因此，探索有效的微生物分离方法，从不同角度、不同层次建立分离微生物的新方法就成了微生物领域长期的研究任务和难点。目前国内外对放线菌分离方法的研究主要集中在样品的预处理，抑制剂的选择和培养基成分的改变等方面。对土壤样品进行预处理和加入抑制剂的主要目的是增加目的菌的数量，减少或抑制非目的菌的生长。司美茹等研究发现，将土样在120℃处理1h有利于放线菌孢子萌发，增加放线菌的种类和数量；75μg/ml的重铬酸钾和2μg/ml的青霉素配合使用可以使细菌的数量明显减少而不影响放线菌的种类和数量。薛清等研究发现将土样在120 W功率模式下微波辐照3min对提高放线菌的出菌率有促进作用。姜怡等研究发现使用100 mg/L的放线菌酮和100 mg/L制霉菌素能有效抑制真菌而不影响放线菌的生长。Li等使用极高频辐射(extremely high frequency radiation，EHF)与连续照射联合使用的方法分离出了较多种类的稀有放线菌；Nonomura等使用6%的酵母提取物溶液处理样品能分离到新的放线菌物种。Esther使用噬菌体作为指示物定向分离稀有放线菌；Hayakawa等以腐殖酸维生素培养基为基础，加入不同种类的抗生素，再结合不同的样品前处理方法，分离出了小双孢菌(Micromonospora)、野野村氏菌(Nonomuraea)、链孢囊菌(Streptosporangium)、螺旋游动菌(Spirilliplanes)、草孢菌属(Herbidospora) 、马杜拉放线菌(Actinomadura)、指孢囊菌(Dactylosporangium)、小四孢菌(Microtetraspora)、地嗜皮菌(Geodermatophilus)、游鱼孢菌(Sporichthya)等大量稀有放线菌。迄今为止，没有那一种培养基能同时分离所有的微生物。由于放线菌是一类具有巨大应用价值的微生物，所以开发放线菌资源就显得尤为重要。一直以来，分离方法一直是限制人们开发利用这类微生物资源的“瓶颈”，尤其是高盐环境下放线菌的纯培养技术一直没有突破，特别是针对高盐环境下放线菌，没有报道一种适合多种放线菌的培养基。
技术实现思路
针对现有技术中未见报道一种适合多种放线菌的培养基的技术现状，本专利技术目的在于提供一种分离高盐环境放线菌的培养基及其应用，填补了国内外针对高盐、寡营养的特殊环境和高盐环境没有一种培养基适合多种高盐环境放线菌的培养分离问题，为放线菌资源的开发提供菌种支撑具有广泛的应用价值。本专利技术采用的主要技术方案：本专利技术结合嗜盐放线菌对不同盐离子类型的选择和适应性生理学特点，设计分离培养基，全面挖掘盐湖沉积物放线菌资源，客观认识盐湖沉积环境中放线菌的物种多样性，结合沉积物样品离子类型如阳离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+等、阴离子Cl-、CO32-、SO42-、HCO3的多样性，设计分离培养基，从而获得更多的放线菌资源。本专利技术提供的一种分离高盐环境放线菌的培养基，按照重量百分比计，培养基由甘露醇1%、丙氨酸0.1%、K2HPO4 0.1%、MgSO4·7H2O 0.1%、CaCO3 0.02%、FeSO4·7H2O 0.001%、Agar 1.8%、微量盐0.0003 %、复合维生素0.0004%、生物素0.000025%、重铬酸钾0.005%组成；其中，微量盐由FeSO4·7H2O、 MnCl2·4H2O 和 ZnSO4·7H2O各 0.0001 %组成；复合维生素由B1、 B2、 B6、烟酸、肌醇、泛酸、对氨基苯甲酸、叶酸各0.00005%组成； pH 7.2-7.4。该分离高盐环境放线菌的培养基以下简称Z5分离培养基。本专利技术中提供的重铬酸钾为培养基的非目的菌抑制剂。通过实施本专利技术具体的
技术实现思路
，可以达到以下效果：本专利技术提供的分离高盐环境放线菌的培养基与现有技术相比，现有技术中报道的经典培养基，分离放线菌种类都比较单一，最多也只能分离到3个属5个不同种的放线菌；而本专利技术提供的培养基分离放线菌结果为11个属22个种，适合高盐、寡营养的特殊环境和高盐环境放线菌的分离。本专利技术站在营养生理学的角度，考虑到盐湖是一个高盐、寡营养的特殊环境和高盐环境放线菌生长缓慢等因素，以微生物对渗透压的反应为指导，设计了以不同碳源和氮源为基础的培养基，适合高盐、寡营养的特殊环境中分离多种放线菌，是目前报道能够分离高盐环境放线菌最多的一种培养基。具体实施方式下面，举实施例说明本专利技术，但是，本专利技术并不限于下述的实施例。另外，在下述的说明中，如无特别说明，％皆指质量百分比。主要仪器：PCR仪为德国SensoQuest Labcycler；高速冷冻离心机为BeckMan公司Allegra 64R Centrifuge；凝胶成像分析系统为Bio-Rad公司Gel Doc 2000；电泳仪为北京六一DYY-6C。试剂：用于PCR扩增的全套试剂均购自广州东盛生物科技有限公司；限制性内切酶HaeIII及连接试剂盒PMD18-T购自TaKaRa公司；其他生化试剂均为国产分析纯。本实验所有培养基中均添加1.5%、5%、10%、15%、20%、25% 6个浓度梯度的NaCl，分离高盐环境放线菌的培养基以下简称Z5分离培养基。本专利技术中选用的所有试剂和仪器都为本领域熟知选用的，但不限制本专利技术的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本专利技术以下实施方式的实施。实施例一：分离高盐环境放线菌的培养基的制备按照重量百分比计，培养基由甘露醇1%、丙氨酸0.1%、K2HPO4 0.1%、MgSO4·7H2O 0.1%、CaCO3 0.02%、FeSO4·7H2O 0.001%、Agar 1.8%、微量盐0.0003 %、复合维生素0.0004% 、生物素0.000025%、重铬酸钾0.005%组成；其中，微量盐由FeSO4·7H2O、 MnCl2·4H2O 和 ZnSO4·7H2O各 0.0001 %组成；复合维生素由B1、 B2、 B6、烟酸、肌醇、泛酸、对氨基苯甲酸、叶酸各0.00005%组成； pH 7.2-7.4。实施例二：分离高盐环境放线菌的培养基的供试土样  盐湖样品采自位于新疆阿图什市境内的硝尔库勒湖。该湖呈东北-西南向分布, 湖长18-20 km, 宽2-4 km, 面积 45 km2, 海拔为1585 m ( 76°53' E，40°10' N )。样品采集后立即装入无菌的封口袋并置于车载冰箱。运抵实验室后于-20℃保存备用。实验选取其中一份沉积物样品进行分离模型的研究。1.样品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离高盐环境放线菌的培养基，其特征在于，按照重量百分比计，所述的培养基由甘露醇1%、丙氨酸0.1%、K2HPO4？0.1%、MgSO4？7H2O？0.1%、CaCO3？0.02%、FeSO4？7H2O？0.001%、Agar？1.8%、微量盐0.0003？%、复合维生素0.0004%、生物素0.000025%、重铬酸钾0.005%组成；其中，微量盐由FeSO4？7H2O、？MnCl2？4H2O？和？ZnSO4？7H2O各？0.0001？%组成；复合维生素由B1、？B2、？B6、烟酸、肌醇、泛酸、对氨基苯甲酸、叶酸各0.00005%组成；？pH？7.2？7.4。

【技术特征摘要】
1.一种分离高盐环境放线菌的培养基，其特征在于，按照重量百分比计，所述的培养基由甘露醇1%、丙氨酸0.1%、K2HPO4 0.1%、MgSO4·7H2O 0.1%、CaCO3 0.02%、FeSO4·7H2O 0.001%、Agar 1.8%、微量盐0.0003 %、复合维生素0.0004%、生物素0.000025%、重铬酸钾...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利莉，陈正军，李艳宾，关统伟，夏占峰，张瑶，张娇，吕玲玲，贾晓宇，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：