核酸复合物制造技术

技术编号:7998136 阅读:171 留言:0更新日期:2012-11-22 06:48
本发明专利技术涉及转录因子诱饵的复合物、其向细菌的递送和其制剂。具体地,本发明专利技术在于一种抗细菌复合物,该抗细菌复合物包含核酸序列和选自以下的一种或多种递送部分:季胺化合物;双氨基烷烃类和其不饱和衍生物,其中所述氨基烷烃的氨基组分是形成杂环的一部分的氨基基团;和抗细菌肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸复合物本专利技术涉及核酸序列的复合物。具体地,本专利技术涉及转录因子诱饵的复合物、其向细菌的递送和其制剂。细菌生长和毒性的控制形成了日益增加的问题,尤其是在医学和兽医学应用中,并可成为公共健康的重大挑战。用于抵抗病原性细菌的抗生素是本领域熟知的。然而,此类抗生素的广泛使用已导致对至少一种、以及在一些情形下多种抗生素具有抗性的细菌(所谓的多药抗性菌株)的出现。已发现的传统抗生素和开发中的抗生素数量的下降加剧了这一形势。事实上,抗生素抗性是抗细菌研究的重大挑战,并危及市售抗生素以及那些仍处于开发中的抗生素的效力。因此,存在对可用于阻碍细菌传播和感染的新的抗细菌剂的需要。基于DNA的治疗具有克服现有抗细菌治疗的限制的潜能,因为它们可以被设计为通过以下方式治疗潜在的任何病原体阻止编码抗生素抗性机制的基因的表达,或通过改变关键或适应性基因或操纵子的表达抑制生长,或类似地阻止毒性或致病性的发作。另外, 细菌不可能发展出针对这些剂的抗性,因为这将需要影响转录因子和其关联结合位点二者的同时突变。这对于控制多个关键基因的剂尤其如此。可选地,可通过突变使得基因组成型表达而使基因逃避转录因子诱饵介导的控制。然而,在转录因子诱饵同时作用于许多基因的情形下,将需要这些基因中的许多基因获得突变以使它们转换为组成型表达,这是被视为不可能的事件。转录因子诱饵(TFD)是一种此类基于DNA的治疗剂。诱饵寡核苷酸被设计为模拟转录因子的结合位点并阻止后者与它们的关联基因组靶标结合,从而改变基因表达(Mann和 Dzau(2000) J. Clin.TFD具有超过其他基于DNA的治疗剂的显著优点。其作用机制是简单且可预测的-它们通过掩蔽转录因子来控制基因表达,通过使细胞充满足量拷贝的特异结合序列而阻止后者与启动子结合(因此,术语”诱饵”)。这与其中由于mRNA的复杂二级结构而难以限定靶标的反义策略相反。与反义方法相比,TFD具有作用迅速、阻止基因表达的另外的优点,而反义方法涉及表达的结果。因此,TFD在极低的浓度下有效,因为单一 TFD-转录因子相互作用可阻断单一基因的转录,而单一基因可以产生成千上万拷贝的mRNA,而mRNA构成反义方法的靶标。其他基于DNA的治疗剂包括含有用于基因治疗的质粒、用于反义和反基因应用的寡核苷酸(Crooke ST. (1998) Antisense Nucleic Acid Drug Dev.旦115-122)、核酶、DNA 酶、适体和小干扰 RNA(siRNA) (Stull R. A.等(1995)Pharm Res. 12 :465-483 ;PatilS. D.和 Burgess D. J. (2003) AAPS Newsmagazine豆27)。尽管大多数基于 DNA 的药物处于临床前开发或临床试验的早期阶段,但是近年来已出现了这一类化合物以产生针对包括以下的广泛范围的疾病的药物治疗的极有希望的候选物癌症、AIDS、神经疾患诸如帕金森病和阿尔茨海默病以及心血管疾患。然而,包括TFD在内的基于DNA的治疗剂的递送仍是重大的挑战。当递送大的亲水性治疗剂诸如蛋白质或核酸时,细胞膜是遇到的主要障碍之一。解决此问题的大多数努力集中于递送至真核细胞,以开发用于人类癌症等的有效治疗。在真核细胞中,不同的细胞区室(包括核)受到生物膜的保护,生物膜隔离不同的细胞区室并阻止溶质从细胞和细胞器的流入和流出。尽管这些屏障对于细胞的维持是必要的,但是当试图向细胞或细胞内的特定细胞器递送治疗剂时,这些屏障是实质的问题。由于细胞膜的疏水性内部产生的大的自由能障碍,大多数阳离子在没有特异性载体系统下不能通过细胞膜。为了被细胞选择性积累和保留,阳离子化合物需要足够的亲脂性和其正电荷的离域以降低当从水环境移至疏水环境时的自由能变化。这允许该化合物被动穿过质膜和线粒体膜并响应于膜电位而积累。蛋白质进入真核细胞的转运主要通过内吞介导。这是高度组织化的转运系统,其中大的极性分子通过被吞食到细胞膜内而被吸附。吞噬作用和胞饮作用是非受体介导的形式的内吞,而受体介导的内吞是更加特异的主动事件,其中细胞质膜向内折叠以形成有被小窝。在这种情形下,蛋白质或其他触发颗粒受困于细胞质膜中的受体/配体或受困于与细胞表面的非特异性相互作用,例如由于电荷相互作用。仅到那时颗粒才被吞食。这些向内出芽的小泡出芽形成细胞质小泡。 已开发了多种技术来体内和体外将生物活性分子易位跨过这些屏障。电穿孔和显微注射对于体内使用是苛刻且不实际的,因为这些方法在可以将物质引入细胞之前必须破坏细胞膜,并且因此它们限于有限量的细胞。虽然使用内吞途径是有吸引力的,但是一个重要的缺点是确保在溶酶体活性发生之前的内体逃脱。脂质体包囊和受体介导的内吞也受到其缺乏靶向和低递送效率的限制。迄今进行的大多数探索工作集中于向真核细胞递送SiRNA分子。通常采用的方法是与共价连接的靶向肽形成脂质体或复合物,靶向肽指导治疗剂到达细胞内的合适靶标。当选择用于此类递送机制的脂质组分时有许多考虑因素。脂质样组分通常是阳离子并具有三种功能I.压缩核酸以使递送更易实现;2.保护核酸不被核酸酶降解或不被质膜蛋白等非特异性吸附,和3.遮蔽磷酸主链的负电荷。第三点可通过使用具有减少的电荷或没有电荷的合成主链来克服。另外,脂质体或复合物需要某些理想的物理性质I.良好的稳定性,不论是在盐溶液或生物液中。这可用测量颗粒之间的吸引或排斥的ξ-电位来定量;2.窄的大小分布,对于细菌理想地在介于50和IOOnm之间;3.较低的毒性,尽管大多数转染剂(脂质、亲脂性阳离子)显示中等水平的毒性;4.能够实际生产,考虑诸如货物成本的问题。通常已知用于真核递送的肽透化膜,经由靶细胞上的特异性受体穿透细胞,或简单地是阳离子(如聚精氨酸)。使用具有细胞穿透性质的肽具有几种优点,这主要是由于可以对肽序列进行各种修饰。这允许工程化定位不同细胞亚域和/或能够转运不同类型的货物的载体。一类膜易位剂是细胞穿透肽(CPP)。除了是体外进入不同细胞器的温和且有效的工具之外,CPP已用于几种剂的体内细胞递送,具有有希望的结果。CPP通常由少于30个氨基酸组成,具有净正电荷,且能够易位穿过质膜和以看似能量依赖的方式转运几种货物进入细胞质和核。易位经由不受各种内吞抑制剂或低温影响的目前未知的机制发生(Langel,ti,编(2002)Cell-Penetrating Peptides, Processesand Applications, CRC Press)。术语CPP包括合成的细胞穿透肽、蛋白转导结构域和膜易位序列,其全部具有易位穿过细胞膜和进入细胞内部的能力。具有实现递送至尤其是细菌的潜能的其他类别的肽是具有抗细菌性质的那些肽。这些肽包括抗微生物肽(AMP)、细胞穿透肽(CPP)、非核糖体合成的那些肽和糖肽。所有这些类型的肽在本文被称为抗细菌蛋白(ABP)。AMP可来源于细菌来源,此时它们被称为细菌素,或来自高等真核来源,包括人、两栖类、昆虫等。特别感兴趣的AMP是能够增加生物膜的穿透性或者具有易位穿过膜以到达其细胞内靶标的能力的那些。AMP基于结构相似性一般分为五个不互相排斥的亚组(Brogden,2005 Nat. Rev. Microbio本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:M麦克阿瑟
申请(专利权)人:普罗卡塔生物系统有限公司
类型:发明
国别省市:

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