本发明专利技术属于海洋生物技术领域，具体的说是一种区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的微卫星标记及其特异性引物和应用。长心卡帕藻微卫星标记为SEQ.ID.NO1-5碱基序列所示；细齿麒麟菜的微卫星标记为SEQ.ID.NO6-10碱基序列所示。利用SEQ.ID.NO1-10碱基序列所示微卫星标记的特异性引物扩增，样品中扩增出约150bp的特异性DNA片段，进而区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜以及检测这两种海藻半精品是否互相掺杂。采用本发明专利技术微卫星标记进行区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的方法高效、稳定性高、操作简单，能在约4小时内完成鉴别、检测工作。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋生物
，具体的说是ー种区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的微卫星标记及其特异性引物和应用。
技术介绍
长心卡帕藻(Kappaphycusalvarezii)和细齿麟麟菜(Eucheuma denticulatum)分别是国际上生产K _和t -卡拉胶的重要原料。其主产区主要有印度尼西亚、菲律宾、马来西亚、越南等东南亚国家，坦桑尼亚、肯尼亚等部分非洲国家，巴西、墨西哥等中南美洲国家以及我国海南省。上述国家地区人工规模化栽培长心卡帕藻和细齿麒麟菜是维持国际卡拉胶相关产业发展的基础。 卡拉胶由D-半乳糖和3，6-内醚半乳糖残基组成的海藻细胞粘性多糖。依据其残基中酯式硫酸基盐的含量和分子链接位置的差异，卡拉胶可以被分为K型、X型、t型、il型和V型等多种类型的卡拉胶。目前生产应用最为广泛的是K型卡拉胶，其次为t型卡拉胶。其主要原料分别是长心卡帕藻与细齿麒麟菜。目前在市场流通过程中，存在着某些长心卡帕藻中掺杂有细齿麒麟菜的现象，尤其在长心卡帕藻半精品颗粒中掺杂细齿麒麟菜颗粒比较严重。这是由于长心卡帕藻与细齿麒麟菜在形态上比较接近，其干品在外观上难以区分，特别是经过初加工处理的半精品如何检测尚没有具体办法。由于两种藻含有的卡拉胶的类型不同，提取エ艺也不尽相同，两种海藻的掺杂不仅大大降低原材料的利用率，而且直接影响产品质量，导致产品不稳定。而凭借长心卡帕藻和细齿麒麟菜的藻株外形等形态学物种鉴定方法存在着易受生理状态和人为因素影响等弊端，以及长心卡帕藻半精品颗粒中掺杂细齿麒麟菜颗粒难以检测等问题，不仅会扰乱了正常市场交易，而且不利于后续产品的进ー步开发和应用，易造成不必要的商品经济损失，并且也会影响栽培、加工和供应商之间的商业信誉。为此，有必要开发ー种客观、高效、稳定的方法鉴别两种海藻以及其半精品的技术方法。微卫星标记是以DNA为基础的分子标记，由于具有易扩增、重复性高、检测位点多、中性标记等特点，不受生理、生活环境变化以及人为因素影响的优点，被广泛应用到动植物的物种鉴别和种质鉴定。
技术实现思路
本专利技术目的提供ー种区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的微卫星标记的特异性引物及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为ー种区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的微卫星标记，长心卡帕藻微卫星标记为SEQ.ID. NO I-5碱基序列所示；细齿麒麟菜的微卫星标记为SEQ. ID. N06-10碱基序列所示。ー种区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的微卫星标记的特异性引物所述SEQ. ID. NOl碱基序列所示的长心卡帕藻微卫星标记的特异性引物为F:TTCCTCAAGACGCTCCACCAAAC, R:GCGAGGTGTGAGATGCCGAGT ；SEQ. ID. N02碱基序列所示的长心卡帕藻微卫星标记的特异性引物为F: GCCAACTCTGGTTACACATATT, R: GAGGTTTGGTTGATGAATTGA ；SEQ. ID. N03碱基序列所示的长心卡帕藻微卫星标记的特异性引物为 F:ACAATCATATACGTCGCAAACG,R:ACAGGTAGTTGAGTGGTTGGAAAC ；SEQ. ID. N04碱基序列所示的长心卡帕藻微卫星标记的特异性引物为F: TGTGACGACGGCGGAGAATG, R: TCTCACCAGGCGACTGCTCATC ；SEQ. ID. N05碱基序列所示的长心卡帕藻微卫星标记的特异性引物为F: GATGGCGTGAAGATAAAAGAGA, R: ATCACTTCCACTGTCCCTATGT ；SEQ. ID. N06碱基序列所示的细齿麒麟菜微卫星标记的特异性引物为F:CCCGCGACTAATGCAAAAGGT，R:CGTGGCTCACTATGATGAATCTAAC ；SEQ. ID. N07碱基序列所示的细齿麒麟菜微卫星标记的特异性引物为F:TGAATGTTAGCTCGCATACCG, R:TCACAGGGCAACTTCAACAA ；SEQ. ID. N08碱基序列所示的细齿麒麟菜微卫星标记的特异性引物为F:GATGTTGAGCAGCCTTGGGG，R: GGGTGTTTACCGCTTCTTCTTTT ；SEQ. ID. N09碱基序列所示的细齿麒麟菜微卫星标记的特异性引物为F:CCCGTCTATTCTCGACCAGGCA，R:TTTGTGAATGTTAGCTCGCATACCG ；SEQ. ID. NOlO碱基序列所示的细齿麒麟菜微卫星标记的特异性引物为F:ACGCCCTTGTATTGCTTGTACGG，R:GACATCAAGAAGGCTCCGAGCTAC。利用SEQ. ID. N01-10碱基序列所示微卫星标记的特异性引物扩增，样品中扩增出约150bp的特异性DNA片段，进而区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜以及检测这两种海藻半精品是否互相掺杂。本专利技术所具有的优点本专利技术利用特定微卫星标记客观、稳定、高效的鉴别长心卡帕藻和细齿麒麟菜，根据琼脂糖凝胶电泳相应带型的有无可以直观判断待测藻株属于哪种藻株，以及分析一种藻的半精品颗粒是否掺杂着另ー种藻的颗粒。附图说明图I为本专利技术实施例提供的利用细齿麒麟菜微卫星标记Ed002、Ed003和Ed005对8个藻株样品的基因组DNA进行扩增效果图(其中，8个藻株样品为细齿麒麟菜的新鲜样品5F、干燥样品以及半精品5S，长心卡帕藻的新鲜样品7F、8F、12F、半精品12S以及干燥样品 13D ;M 为 DL500 (Takara)，从下往上 7 条带分别代表 50bp、lOObp、150bp、200bp、300bp、400bp 和 500bp。)。图2为本专利技术实施例提供的利用细齿麒麟菜微卫星标记Ed006和Ed007对8个藻株样品的基因组DNA进行扩增效果图(其中，8个藻株样品为细齿麒麟菜的新鲜样品5F、干燥样品以及半精品5S，长心卡帕藻的新鲜样品7F、8F、12F、半精品12S以及干燥样品 13D ；M 为 DL500 (Takara)，从下往上 7 条带分别代表 50bp、lOObp、150bp、200bp、300bp、400bp 和 500bp。)。图3为本专利技术实施例提供的利用长心卡帕藻微卫星标记Kall39、Kal272和Kal340对8个藻株样品的基因组DNA进行扩增效果图(其中，细齿麒麟菜的新鲜样品5F、干燥样品以及半精品5S，长心卡帕藻的新鲜样品7F、8F、12F、半精品12S以及干燥样品13D ；M 为 DL500 (Takara)，从下往上 I 条带分别代表 50bp、lOObp、150bp、200bp、300bp、400bp 和500bp。)。图4为本专利技术实施例提供的利用长心卡帕藻微卫星标记Ka1450和Ka1476对8个藻株样品的基因组DNA进行扩增效果图(其中，细齿麒麟菜的新鲜样品5F、干燥样品5D以及半精品5S，长心卡帕藻的新鲜样品7F、8F、12F、半精品12S以及干燥样品13D ；M 为 DL500 (Takara)，从下往上 7 条带分别代表 50bp、lOObp、150bp、200bp、300bp、400bp 和500bp。)。图5-9为本专利技术实施例3提供的是利用10个微卫星标记对长心卡帕藻半精品和细齿麒麟菜半精品的相本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种区分长心卡帕藻与细齿麒麟菜的微卫星标记，其特征在于：长心卡帕藻微卫星标记为SEQ.ID.NO1？5碱基序列所示；细齿麒麟菜的微卫星标记为SEQ.ID.NO6？10碱基序列所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张振，刘建国，庞通，李凌，林伟，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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