鉴定鸡性连锁矮小基因的一种方法及其专用引物技术

技术编号:7914444 阅读:322 留言:0更新日期:2012-10-24 23:43
本发明专利技术公开了鉴定鸡的性连锁矮小基因的一种方法及其专用引物。本发明专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因的成套引物对,由检测鸡dw基因的引物对1和检测鸡Dw基因的引物对2组成;所述引物对1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成。本发明专利技术通过在GHR基因缺失片段内部设计引物,利用多重PCR反应体系,将缺失区段内部的引物和缺失区段两端的引物进行同时扩增。这一方法检测手段操作简单,检测结果准确可信,适合在性连锁矮小型鸡育种工作中进行应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鉴定鸡性连锁矮小基因的一种方法及其专用引物。
技术介绍
自然界中,哺乳动物的性别属于XY型,而鸟类属于ZW型。造成鸡矮小性状的原因较多,而鸡性连锁矮小基因(sex-linked dwarf gene,简称dw基因)是目前已知的鸡8种矮小基因中唯一对鸡本身健康无害的突变。dw基因是鸡性染色体上的生长激素受体(GHR)基因(Dw基因)3’ -非翻译区(3’ -UTR)存在I. 7kb的缺失突变形成的等位基因。自1935年苏联学者BCHTAMKF发现该基因后,很多学者都对该基因的作用机理和遗传特性进行了探讨,并逐步应用于鸡的育种实践。dw基因位于Z染色体上,定位于肝坏死基因In和无翅基因wl之间,表现为隐性伴性遗传,对正常基因Dw为隐性,只有矮小型基因纯合子的公鸡、和携带矮小基因的母鸡才表现为矮小,明显的外部特征是胫骨缩短20%左右,而ZllwZdw杂合子的公鸡表型正常,不能与纯合非矮小公鸡(ZdwZdw)从表型上区分。人们希望从分子水平准确区分ZllwZdw与ZdwZdw基因型,但是,目前检测dw基因的方法是在缺失片段两端设计引物,通过检测矮小和非矮小鸡基因组片段的大小来进行判断,在扩增过程中,由于该基因缺失片段较长,会导致模板对引物的竞争,从而导致在杂合子中只能检测到缺失后的片段,而非缺失的完整片段难以检测到,因而对于杂合子与纯合非矮小公鸡无法进行准确判断,限制了这一技术在育种工作中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因的成套引物对或引物对及其应用。本专利技术所提供的成套引物对或引物对,具体为下述I) -3)中的任一种I)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因的成套引物对,由检测鸡dw基因的引物对I和检测鸡Dw基因的引物对2组成;所述引物对I由序列表中序列I所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成;2)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因的引物对,为检测鸡dw基因的引物对1;所述引物对I由序列表中序列I所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;3)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有Dw基因的引物对,为检测鸡Dw基因的引物对2;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成。上述成套引物对或引物对在制备产品中的应用也属于本专利技术的保护范围,具体可为如下I、II和III中的任一种I、由检测鸡dw基因的引物对I和检测鸡Dw基因的引物对2组成的成套引物对在制备鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因产品中的应用;所述引物对I由序列表中序列I所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成;II、检测鸡dw基因的引物对I在制备鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因产品中的应用;所述引物对I由序列表中序列I所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;III、检测鸡Dw基因的引物对2在制备鉴定或辅助鉴定鸡是否含有Dw基因的产品中的应用;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成。上述成套引物对或引物对的制备方法也属于本专利技术的保护范围,该方法具体可包括如下I) -3)中的任一步骤 I)以dATP,dTTP,dCTP和dGTP为原料制备序列表中序列I、序列2、序列3和序列4所示的4种单链DNA,得到所述引物对I和所述引物对2 ;2)以dATP,dTTP, dCTP和dGTP为原料制备序列表中序列I和序列2所示的2种单链DNA,得到所述引物对I;3)以dATP,dTTP, dCTP和dGTP为原料制备序列表中序列3和序列4所示的2种单链DNA,得到所述引物对2。含有上述成套引物对或引物对的试剂盒也属于本专利技术的保护范围,该试剂盒具体可为下述I)-3)中的任一种I)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因的试剂盒,所述试剂盒含有由检测鸡dw基因的引物对I和检测鸡Dw基因的引物对2组成的成套引物对;所述引物对I由序列表中序列I所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成;2)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因的试剂盒,所述试剂盒含有检测鸡dw基因的引物对I ;所述引物对I由序列表中序列I所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;3)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有Dw基因的试剂盒,所述试剂盒含有检测鸡Dw基因的引物对2 ;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成。上述试剂盒的制备方法也属于本专利技术的保护范围,该方法具体可包括如下I) -3)中的任一步骤I)以dATP,dTTP, dCTP和dGTP为原料制备序列表中序列I、序列2、序列3和序列4所示的4种单链DNA,得到所述引物对I和所述引物对2 ;2)以dATP,dTTP, dCTP和dGTP为原料制备序列表中序列I和序列2所示的2种单链DNA,得到所述引物对I;3)以dATP,dTTP, dCTP和dGTP为原料制备序列表中序列3和序列4所示的2种单链DNA,得到所述引物对2。本专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因的方法,该方法包括如下步骤M)、N)或P):M)以待鉴定鸡的基因组DNA或总RNA反转录得到的cDNA为模板,用检测鸡dw基因的引物对I和检测鸡Dw基因的引物对2进行多重PCR扩增,检测得到的PCR扩增产物,根据PCR扩增产物确定待鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因,或是否候选含有dw基因和/或Dw基因若所述PCR扩增产物满足如下ml)或m2)的条件,则确定所述待鉴定鸡含有dw基因或候选含有dw基因,若所述PCR扩增产物不满足如下ml)或m2)的条件,则确定所述待鉴定鸡不含有dw基因或候选不含有dw基因;若所述PCR扩增产物满足如下m3)或m4)的条件,则确定所述待鉴定鸡含有Dw基因或候选含有Dw基因,若所述PCR扩增产物不满足如下m3)或m4)的条件,则确定所述待鉴定鸡不含有Dw基因或候选不含有Dw基因;若所述PCR扩增产物满足如下m5)或m6)的条件,则确定所述待鉴定鸡含有dw基因和Dw基因或候选含有dw基因和Dw基因,若所述PCR扩增产物不满足如下m5)或m6)的条件,则确定所述待鉴定鸡不含有dw基因和Dw基因或候选不含有dw基因和Dw基因ml)所述PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳显示含有200bp_300bp的一个条带;m2)所述PCR扩增产物含有247bp的片段;、m3)所述PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳显示含有500bp_600bp的一个条带;m4)所述PCR扩增产物含有522bp的片段;m5 )所述PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳显示为200bp_300bp的一个条带和500bp-600bp 的一个条带;m6)所述PCR扩增产物为247bp的片段和522bp的片段;N)以待鉴定鸡的基因组DNA或总RNA反转录得到的cDNA为模板,用检测鸡dw基因的引物对I进行PCR扩增,检测得到的PCR扩增产物,根据PCR扩增产物确定待鉴定鸡是否含有dw基因,若所述PCR扩增产物满足如下nl)或n2)的条本文档来自技高网...

【技术保护点】
成套引物对或引物对,为下述1)?3)中的任一种:1)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因和/或Dw基因的成套引物对,由检测鸡dw基因的引物对1和检测鸡Dw基因的引物对2组成;所述引物对1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成;2)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有dw基因的引物对,为检测鸡dw基因的引物对1;所述引物对1由序列表中序列1所示的引物和序列表中序列2所示的引物组成;3)用于鉴定或辅助鉴定鸡是否含有Dw基因的引物对,为检测鸡Dw基因的引物对2;所述引物对2由序列表中序列3所示的引物和序列表中序列4所示的引物组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:邓学梅魏霞葛雅琼肖凡吴常信
申请(专利权)人:中国农业大学
类型:发明
国别省市:

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