丙型肝炎病毒疫苗组合物制造技术

技术编号:7606866 阅读:207 留言:0更新日期:2012-07-22 13:25
找出诱导具有HCV感染抑制活性的抗体的HCV抗原和最适合的佐剂的组合,提供有效的HCV疫苗组合物。丙型肝炎病毒疫苗组合物,其包含:将由含编码来自丙型肝炎病毒的JFH1株的NS3蛋白、NS4A蛋白、NS4B蛋白、NS5A蛋白及NS5B蛋白的序列的丙型肝炎病毒基因组制作的感染性丙型肝炎病毒颗粒灭活获得的灭活病毒颗粒;序列表的SEQ?ID?NO:5记载的含非甲基化CpG的寡核苷酸;以及氢氧化铝。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及丙型肝炎病毒疫苗组合物
技术介绍
丙型肝炎病毒Ofepatitis C virus ;下文有时简称“HCV”)是作为非甲非乙型肝炎的主要致病病毒被发现的(非专利文献1)。HCV是具有约9. 6kb的单股正链RNA作为基因组的RNA病毒,该基因组编码翻译后由来自宿主的信号肽酶或来自HCV的蛋白酶切割为 10 种病毒蛋白 G^l>、El、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A&NS5B)的前体蛋白。其中, 核心、E1、E2及p7蛋白被分类为结构蛋白,NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B蛋白被分类为非结构蛋白。HCV还根据基因组核苷酸序列的不同,被分类为10种以上的基因型(例如 la、Ib、加、2b、3a及3b)(非专利文献2 4),可通过HCV抗体检测、HCV核心抗原检测或者核酸扩增检测来判定基因型。已知HCV通过血液由人传染给人,感染者约60 80%引起慢性肝炎,在不实施适当治疗置之不理的情况下,感染后约20 30年左右引起肝硬化或肝癌。因此,希望早期检测出HCV的感染,以预防慢性肝炎的发病,同时希望发病后进行早期治疗。作为丙型肝炎的主要治疗方法,干扰素的单独给予或者干扰素与利巴韦林的联合疗法是很普遍的,但最近明确,干扰素的治疗效果因HCV基因型的不同而有着较大的差异, 对基因型为Ia或Ib的HCV难以发挥作用(非专利文献5和6)。而且,即使在干扰素的效果被认为较好的基因型为加的HCV与2b的HCV之间,也逐渐明确干扰素的抗病毒作用的强度存在差异,并且暗示与2b的HCV相比,对加的HCV的作用更强(非专利文献7)。因此,希望开发出一种HCV疫苗,其能预防感染HCV后尚未发生慢性肝炎的病毒携带者发生慢性肝炎,或者在慢性肝炎发病后增强自身免疫而排除HCV。然而,获得具有感染性的HCV颗粒(下文有时简称“感染性HCV颗粒”)和测试HCV 的感染抑制效果较为困难,同时,找出增强发挥感染抑制效果所必需的体液免疫和细胞免疫的佐剂与抗原的组合也较为困难,因此尚未开发出具有足够感染抑制活性的HCV疫苗组合物。—般来说,佐剂根据物理性质,可以分为粒状佐剂和非粒状佐剂。粒状佐剂可举例如铝盐、油包水型乳剂、水包油型乳剂、免疫刺激复合物、脂质体以及纳米和微粒子,单独与抗原混合使用的情况居多。其中,氢氧化铝(下文有时简称 “Alum”)作为炎性低的佐剂用于医药用途。然而,已知Alum在与抗原效价为中位至低位的抗原组合时,不能增强发挥感染抑制效果所必需的体液免疫和细胞免疫,不适合用作佐剂。另一方面,非粒状佐剂可举例如胞壁酰二肽(由分枝杆菌提取的肽聚糖的佐剂活性成分)、非离子性嵌段共聚物、皂角苷(从Quillaja saponaria树的树皮提取的三萜系化合物的复合混合物)、脂质A (带有长度一般为C12 C16的5个或6个脂肪酸链和2个磷酸根(phosphate radicals)的葡糖胺的二糖类)、细胞因子、核酸、碳水化合物聚合体、 衍生化多糖类以及细菌毒素(例如霍乱毒素和大肠杆菌热不稳定毒素),和粒状佐剂并用的情况居多。作为被用作佐剂的核酸,含有未经甲基化修饰的CpG 二核苷酸基序(motif)的寡脱氧核苷酸(下文有时简称“CpG-ODN”)(非专利文献8)和双股RNA(下文有时简称 “dsRNA,,)是已知的。据报导,在CpG-ODN中,含有由6碱基回文结构基序构成的CpG基序的CpG-ODN诱导强的细胞毒活性,其中5,-AACGTT-3,、5,-AGCGCT-3,以及5,-GACGTC-3,这三个序列特别强地诱导细胞毒活性(非专利文献9)。现在,明确了 CpG-ODN是TLR9的配体,并且判明了 CpG-ODN通过活化TLR9来诱导免疫应答。代表性的dsRNA可举例如多核糖肌苷酸(polyl)和多核糖胞苷酸(polyC)杂交而获得的多核糖肌苷酸-多核糖胞苷酸(下称“polyl :C”),还已知polyl :C与聚L赖氨酸、羧甲基纤维素的复合体polyICLC (非专利文献10);以及polyl C的C部分被U取代的 polyI:PolyC12U(其中,每12个C被1个U取代)为毒性少的dsRNA(非专利文献11)。已经明确polyl :C为I型干扰素的诱导剂,并且为TLR3的配体。作为HCV疫苗开发中使用的抗原蛋白的候选,报道了重组蛋白(专利文献1和2)、 合成肽(专利文献幻、病毒样颗粒(专利文献4)、裸DNA (专利文献幻、病毒颗粒(专利文献6和7)。专利文献1中公开了通过将HCV的结构蛋白即El和E2蛋白作为抗原,将MF59(亚微粒的水包油型乳剂)和CpG-ODN作为佐剂混合,抗El和E2蛋白的抗体效价上升,但没有明确由此所产生的抗体的HCV感染抑制活性。专利文献2中公开了通过将HCV的El和E2蛋白作为抗原,将polyl:C作为佐剂混合,抗El和E2蛋白的抗体产生量增加,然而,与专利文献1同样,没有公开抗体的HCV的感染抑制活性。专利文献6和7中记载了以HCV颗粒本身作为抗原的疫苗,但没有关于佐剂的记载,或者只是例示了一般的佐剂,另外完全没有公开由该疫苗引起的抗体产生能和抗体的 HCV的感染抑制活性。非专利文献12中公开了通过将HCV的核心蛋白、NS3蛋白、NS4蛋白和NS5蛋白作为抗原,将Alum和CpG-ODN作为佐剂混合,抗核心蛋白、NS3蛋白、NS4蛋白和NS5蛋白的抗体产生量增加,但与专利文献1和2同样,未公开抗体的HCV的感染抑制活性。现有技术文献专利文献专利文献1专利文献2专利文献3专利文献4专利文献5专利文献6专利文献7非专利文献非专利文献1 =Choo 等,Science, 1989 年,244 卷,359 362 页日本特表2005-502611号公报 日本特许第4286138号说明书 日本特表2009-513542号公报 日本特表2001-504337号公报 日本特开2009-183^5号公报 国际公开第05/080575号 国际公开第06/022422号非专利文献2 =Simmonds 等,H印atology,1994 年,10 卷,1321 1324 页非专利文献3 =Okamoto 等,J. Gen. Virol.,1992 年,73 卷,73 679 页非专利文献4 =Mori 等,Biochem. Biophys. Res. Commun.,1992 年,183 卷,334 342页非专利文献5 =Fried 等,N. Engl. J. Med.,2002 年,347 卷,975 982 页非专利文献6 =Lusida 等,J. Clin. Microbiol.,2001 年,39 卷,3858 3864 页非专利文献7 =Murakami 等,Hepatology, 1999 年,30 卷,1045 1053 页非专利文献8 Yamamoto 等,Jpn, J. Cancer Res. 1988 年,79 卷,866-873 页非专利文献9 =Yamamoto 等,J. Immunol. 1992 年,148 卷,4072-4076 页非专利文献10 =Nakamura 等,J. I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:胁田隆字森山正树赤泽大辅中村纪子
申请(专利权)人:东丽株式会社日本国立感染症研究所财团法人东京都医学综合研究所
类型:发明
国别省市:

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