黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法技术

本发明专利技术涉及一种黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法。本发明专利技术的方法包括：以果实长度未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT28为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行3％琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7.5％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的短果实长度的黄瓜东农803带型一致，则该果实长度未知的黄瓜品种或品系为短果实长度的品种或品系，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，47℃退火1min，35个循环，72℃延伸1min，72℃延伸10min，最后4℃保存。本发明专利技术用于鉴定黄瓜果实长度相关基因。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种，属于植物生物

技术介绍
黄瓜品质性状的改善是育种研究的重要目标，而果长是黄瓜的重要品质性状之一，直接影响经济效益。随着商品经济的快速发展和人们生活条件的改善，黄瓜的消费形式日趋多样化，如鲜食、凉拌、炒食、汤食、泡菜、盐渍、糖渍、制干、制罐等。人们对不同用途的黄瓜长短要求不同，如酸渍加工需要短果型品种，而盐渍切片加工则需要长果型品种；具有整齐长度的黄瓜果实可以满足机械化采摘和エ业流水线产品加工的要求。因此，黄瓜果长相关研究在满足人们消费需求方面具有重要的意义。黄瓜果实属于瓠果，由子房和花托ー并发育而成，果皮其实是花托的外表，可食部分为果皮和胎座。黄瓜具有単性结实能力，能力強弱因品种而异，而授粉能提高坐果率并促进果实发育。黄瓜果实生长曲线呈S型，谢花后生长缓慢，以后逐渐加速，生长到一定程度后又逐渐减慢，一般开花后10 15天达到商品成熟。日生长量夜间较大，白天较小。夜间生长以傍晚较快，黎明较慢。黄瓜果实的生长曲线符合Y = a+bX+cX2+dX3数学模型，第一拐点处为果实生长速率较快时期，是黄瓜产量与品质形成的关键时期，但相对生长速率最快时期因品种而异(见參考文献，潘丹丹.黄瓜果实发育的細胞学研究.东北农业大学硕士学位论文，2009)。以往对黄瓜果实长度的研究，多集中在細胞学、内源激素与果实长度的关系、环境因素(温度、光照、水分、CO2、矿质营养)对黄瓜果实发育的影响等方面，而对黄瓜果实长度进行遗传分析和分子标记相关研究的报道较少。因此寻找与黄瓜果实长度相关基因紧密连锁的分子标记，对于加快黄瓜育种进程具有重要的实际应用价值。专利
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述存在的问题提供ー种，能够更好地利用上述黄瓜果实长度相关基因分子标记，并将黄瓜果实长度相关基因分子标记应用于黄瓜育种的辅助选择。上述的目的通过以下的技术方案实现，该方法包括如下步骤以果实长度未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT28为引物进行PCR 扩增，对扩增产物进行3%琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7. 5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的短果实长度的黄瓜东农803带型一致， 则该果实长度未知的黄瓜品种或品系为短果实长度的品种或品系，所述PCR扩增的程序为94°C预变性5min，94°C变性30s，47°C退火lmin，;35个循环，72°C延伸lmin，72°C延伸 lOmin，最后4°C保存，所述的CSWCI^8为引物 1 5，-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3，，引物 2 5，-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3，。所述的，所述PCR扩增中，每20μ 1的 PCR 反应体系如下10Xbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1，lOpmol/μ 1 的 Primer 1 :0. 8 μ 1， lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶0. 2 μ 1， 60ng/ μ 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 10. 7 μ 1。在辅助选择黄瓜育种材料中的应用。有益效果1.本专利技术直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题，因此，本专利技术在苗期就能够通过分子标记对黄瓜品种和品系的果实长度进行鉴定和筛选，减少人力和物力的浪费，提高育种效率。同吋，DNA分子标记技术操作简单，成本低廉，用时短，在一天内即可完成全部的检测过程。2.所需样本数量少，操作比较简便，效率高，成本低廉。3.本专利技术易于掌握，不受环境条件影响，重复性高。附图说明图1黄瓜果实长度相关基因分子标记检测结果(东农804)。M :DL2000DNAMarker ； 1 对照东农803 ；2 8 东农804单株。具体实施例方式下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。所有引物合成均由生エ生物工程(上海)有限公司完成。以下实施例中所有用到的黄瓜材料均为公知公用。实施例1 ，该方法包括如下步骤以果实长度未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCI^S为引物进行PCR 扩增，对扩增产物进行3%琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7. 5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的短果实长度的黄瓜东农803带型一致， 则该果实长度未知的黄瓜品种或品系为短果实长度的品种或品系，所述PCR扩增的程序为94°C预变性5min，94°C变性30s，47°C退火lmin，;35个循环，72°C延伸lmin，72°C延伸 lOmin，最后4°C保存，所述的CSWCI^8为 引物 1 5，-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3，，引物 2 5，-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3，。实施例2 所述的，所述PCR扩增中，每20μ 1的 PCR 反应体系如下10Xbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1，lOpmol/μ 1 的 Primer 1 :0. 8 μ 1， lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶0. 2 μ 1， 60ng/ μ 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 10. 7 μ 1。实施例3 在辅助选择黄瓜育种材料中的应用。4 以东北农业大学园艺学院黄瓜课题组培育出的黄瓜杂交新品种东农804为材料； 提取其单个植株DNA为模板，以本专利技术提供的1个黄瓜果实长度分子标记CSWCU8为引物进行PCR扩增，结果表明，东农804单株的PCR扩增带型与短果实长度对照东农803扩增带型完全一致，且PCR检测结果与田间鉴定的吻合率为100%，证明了 CSWCI^8是ー个实用的黄瓜果实长度检测的分子标记。权利要求1.ー种，其特征是该方法包括如下步骤以果实长度未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCU8为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行3%琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7. 5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检測，如果扩增得到的带型与已知的短果实长度的黄瓜东农803带型一致，则该果实长度未知的黄瓜品种或品系为短果实长度的品种或品系，所述PCR扩增的程序为94°C预变性5min，94°C变性30s，47°C退火lmin，;35个循环，72°C延伸lmin，72°C延伸lOmin，最后 4°C保存，所述的CSWCI^S为引物 1 :5，-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3，，引物 2 :5，-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3，。2.根据权利要求1所述的，其特征是所述 PCR 扩增中，每 20 μ 1 的 PCR 反应体系如下10 X buffer :2μ l,2mM dNTP :2μ 1，IOpmol/ μ 1 的 Primer 1 :0. 8 μ 1，lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：秦智伟，周秀艳，武涛，王成，辛明，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：