使用一组新型低丰度人类血浆蛋白生物标记对肝纤维化进行临床诊断制造技术

技术编号:7353600 阅读:241 留言:0更新日期:2012-05-19 05:41
本发明专利技术提出一组新型的用于诊断肝纤维化和肝硬化的人类血浆蛋白生物标记。目前没有可靠的评估肝纤维化的无创方式。基于2D-PAGE的蛋白组学研究用于鉴别潜在的纤维化生物标记。分析了来自患有丙肝病毒(HCV)感染诱发的肝硬化的患者的血浆。鉴别了与肝瘢痕化相关且与病毒感染潜在相关的数种蛋白。这些蛋白包括14-3-3蛋白ζ/δ、脂联素、甲清蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、α-2-HS-糖蛋白、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、C4b-结合蛋白β链、完整/裂解的补体C3dg、皮质类固醇结合球蛋白、纤维蛋白原γ链、pH?5.46至pH?5.49处的β结合珠蛋白、结合珠蛋白相关蛋白、血液结合素、免疫球蛋白J链、富亮氨酸α-2-糖蛋白、脂转移抑制剂蛋白、视黄醇结合蛋白4、血清对氧磷酶/芳香酯酶1、性激素结合球蛋白和锌-α-2-糖蛋白。这些生物标记可与国际公布WO/2008/031051中的多肽联合使用。这些新型生物标记的浓度可使用免疫分析来测定,其中,所述浓度将反映纤维化的程度。本发明专利技术提出所述新型生物标记中的每一个的纤维化评分分级。所有新型生物标记的分值相加的结果将给出更为可靠的纤维化程度指标,而非检测单个生物标记。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2009年5月14日提交的美国临时申请第61/178,334号的优先权。
本申请总体上涉及使用一组抗体诊断肝纤维化或肝硬化的方法,所述抗体靶向一组丰度非常低的新型肝瘢痕化生物标记。这些新型蛋白还可用作肝炎、肝细胞癌(HCC)的生物标记以及肝瘢痕化、肝炎和HCC的药物靶标。
技术介绍
肝纤维化:肝纤维化是创伤愈合反应,该创伤愈合反应以肝脏中瘢痕组织(即细胞外基质)的过度集聚为特征。组织的正常结构要素被过量的非功能性瘢痕组织取代。穿刺肝脏进行活检是诊断和评估纤维化的主要手段,但有充分证据显示该技术有许多限制和缺点,包括患者不适、疼痛、出血以及极少数病例中的死亡。此外,如果纤维化在整个肝脏当中不是均一的,那么,活检可能不可靠。肝纤维化可由包括酒精和病毒在内的多种因素引起。肝硬化:肝硬化是肝瘢痕化的最严重的形式,并且,与肝纤维化不同,通常认为肝硬化是不可逆的且具有结节。在英国,肝硬化每年引起超过6000例的死亡,在美国,肝硬化每年引起大约27,000例的死亡,肝硬化是第九大致死因素(MacSween等,(2002),Pathology of the Liver,第四版,Churchill Livingstone)。肝硬化是HCC的主要风险因素,在肝癌的这个阶段,唯一的治疗手段是肝脏移植。在病毒诱发的肝癌病例中,肝瘢痕化和HCC可在移植后复发。有必要在可逆的肝瘢痕化早期阶段诊断纤维化,从而可预防不可逆的肝硬化。丙型肝炎病毒:全球约1.7亿人口(即世界人口的3%(参见,例如WHO、J.Viral.Hepat.1999;6:35-47))感染丙型肝炎病毒(HCV、HepC),美国约四百万人口感染丙型肝炎病毒。HCV是肝纤维化和肝硬化的主要病因。约80%急性感染HCV的个体成为慢性感染。因此,HCV是慢性肝炎的主要病因。一旦慢性感染该病毒,若不进行治疗病毒几乎绝不清除。在极少数病例中,HCV感染引发临床急性疾病甚至肝衰竭。慢性HCV感染在个体间可显著不同,其中一些个体具有临床上不明显的肝脏疾病或具有最轻度的肝脏疾病且从不发生并发症,而其它个体具有临床上明显的慢性肝炎并继续发展为肝纤维化和肝硬化。发展成肝硬化的携带HCV的个体中的约20%将发展为末期肝脏疾病并且发展成原发性肝癌的风险增加。需要改进的方法来诊断患者中的肝纤维化和肝硬化。
技术实现思路
本专利技术提供检测纤维化和肝硬化的方法。在一种实施方式中,本专利技术提供检测纤维化和肝硬化的方法,所述方法包括:(a)测定取自患者的生物样本中的HF-相关(HF-ASSOCIATED)多肽的水平;以及(b)将所述水平(a)与所述HF-相关多肽的对照水平进行比较以确定所述纤维化的阳性诊断或阴性诊断。这些生物标记可应用于表现出纤维化的任何疾病,所述纤维化例如肝纤维化、肾纤维化、心纤维化(cardial fibrosis)、皮肤纤维化、胰纤维化等等,但在特定的实施方式中所述纤维化为肝纤维化。本专利技术选择下组中的多肽:14-3-3蛋白ζ/δ、脂联素、甲清蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、α-2-HS-糖蛋白、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、C4b-结合蛋白β链、完整/裂解的补体C3dg、皮质类固醇结合球蛋白、纤维蛋白原γ链、pH 5.46至pH 5.49处的β结合珠蛋白、结合珠蛋白相关蛋白、血液结合素、免疫球蛋白J链、富亮氨酸α-2-糖蛋白、脂转移抑制剂蛋白、视黄醇结合蛋白4、血清对氧磷酶/芳香酯酶1、性激素结合球蛋白和锌-α-2-糖蛋白。这些生物标记可与国际公布WO/2008/031051中的多肽联合使用,所述多肽包括间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H4片段、α1抗胰凝乳蛋白酶、载脂蛋白L1、前清蛋白、白蛋白、CD5抗原样蛋白同等型、β2糖蛋白I、α2巨球蛋白及免疫球蛋白成分、结合珠蛋白的α1、α2和β链、补体成分(C3、C4和H因子-相关蛋白1)、脂联素、ApoE、凝血酶原、簇蛋白和血管紧张素原。在其它实施方式中,纤维化包括HF-相关多肽的差异调控。在其它实施方式中,样本取自血清或血浆。在另一实施方式中,本专利技术提供检测HF-相关多肽的方法,所述方法包括:a)从患有纤维化或肝硬化的患者中分离生物样本,b)从未患有纤维化的患者中分离生物样本,c)用2D-PAGE分析来自a)和b)的样本,以及d)比较2D-PAGE结果以鉴别在患有和未患有纤维化或肝硬化的患者之间差异表达的多肽。使用2D-PAGE时,生物标记可使用常用的宽pH范围检测,所述宽pH范围例如pH 3至pH 10、pH 3至pH 11或pH 4至pH 7。丰度非常低的生物标记可用pH 3至pH 11的任何窄pH范围检测,所述窄pH范围例如但不限于:pH 3至pH 5.6、pH 3至pH 6、pH 3.9至pH 5.1、pH 4.7至pH 5.9、pH5至pH 8、pH 5.3至pH 6.5、pH 5.5至pH 6.7、pH 6至pH 11、pH 6.2至pH 7.5、pH 6.3至pH 8.3、pH 7至pH 10、pH 7至pH 11、pH 3.5至pH 4.5、pH 3至pH 7和pH 6至pH 9。覆盖这些窄pH范围的2D-PAGE凝胶也可用于鉴别其他疾病中的新型生物标记及药物靶标。在另一实施方式中,本专利技术提供将纤维化严重程度分级的方法,所述方法包括:a)测定取自患者的生物样本中至少一种HF-相关多肽的水平;以及b)将所述患者的生物样本中的所述HF-相关多肽水平与预先测定的无纤维化至肝硬化的患者人群中的所述HF-相关多肽的水平进行比较。在另一实施方式中,本专利技术提供在未治疗的个体中以及在治疗过程中的纤维化的预后方面有用的试剂盒,所述试剂盒包含HF-相关药剂,其中所述药剂特异性检测HF-相关多肽。在特定的实施方式中,所述药剂是结合HF-相关多肽的抗体或其功能等同物。这些抗体可用于进行免疫测定,例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射性免疫测定、蛋白斑点印迹、蛋白印迹(Western blot)、透射比浊法、散射比浊法等等。HF-相关多肽还可使用非抗体途径来定量,例如,但不限于,使用质谱进行多反应监测。所述试剂盒可进一步包含至少一种靶标,所述靶标特异性地检测用作预后指标的另一基因或基因产物。在另一实施方式中,本专利技术提供测定纤维化的预后的方法,所述方法包括:(a)测定取自患者的生物样本中的HF-相关多肽的水平;及(b)将(a)的所述水平与所述HF-相关多肽的对照水平进行比较本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.05.14 US 61/178,3341.一种检测及评估纤维化/肝硬化严重性的方法,所述方法包括:
a)测定取自患者的生物样本中的至少一种HF-相关多肽的水平;以及
b)将(a)的所述水平与所述HF-相关多肽的对照水平进行比较以确定所
述纤维化的阳性诊断或阴性诊断。
2.如权利要求1所述的方法,其中,所述纤维化是肝纤维化。
3.如权利要求1所述的方法,其中,所述多肽选自:14-3-3蛋白ζ/δ、脂联
素、甲清蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、α-2-HS-糖蛋白、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、
C4b结合蛋白β链、完整/裂解的补体C3dg、皮质类固醇结合球蛋白、纤维蛋白
原γ链、pH 5.46至pH 5.49处的β结合珠蛋白、结合珠蛋白相关蛋白、血液结合
素、免疫球蛋白J链、富亮氨酸α-2-糖蛋白、脂转移抑制剂蛋白、
视黄醇结合蛋白4、血清对氧磷酶/芳香酯酶1、性激素结合球蛋白和锌-α-2-糖
蛋白。
4.如权利要求1所述的方法,其中,所述纤维化包括HF-相关多肽的差异
调控。
5.如权利要求1所述的方法,其中,所述生物样本为血清或血浆。
6.一种将纤维化的严重性分级的方法,所述方法包括:
a)测定取自患者的生物样本中的至少一种HF-相关多肽的水平;以及
b)将所述患者的生物样本中的所述HF-相关多肽水平与预先测定的无纤
维化至肝硬化的患者群中的所述HF-相关多肽的水平进行比较。
7.如权利要求6所述的方法,其中,所述纤维化是肝纤维化。
8.如权利要求6所述的方法,其中,所述多肽选自:14-3-3蛋白ζ/δ、脂联
素、甲清蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、α-2-HS-糖蛋白、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、
C4b结合蛋白β链、完整/裂解的补体C3dg、皮质类固醇结合球蛋白、纤维蛋白
原γ链、pH 5.46至pH 5.49处的β结合珠蛋白、结合珠蛋白相关蛋白、血液结合
素、免疫球蛋白J链、富亮氨酸α-2-糖蛋白、脂转移抑制剂蛋白、
视黄醇结合蛋白4、血清对氧磷酶/芳香酯酶1、性激素结合球蛋白和锌-α-2-糖
蛋白。
9.如权利要求6所述的方法,其中,所述纤维化包括HF-相关多肽的差异
调控。
10.一种用于纤维化的预后的试剂盒,所述试剂盒包含HF-相关药剂,其
中,所述药剂特异性检测HF-相关多肽。
11.如权利要求10...

【专利技术属性】
技术研发人员:雷蒙德·A·德韦克贝文·甘加达兰妮科尔·齐兹曼
申请(专利权)人:牛津大学之校长及学者
类型:发明
国别省市:

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