本发明专利技术提供了组织分析，疾病模拟或药物开发的方法，包括步骤：提供包括至少两种不同类型细胞的组织样本；将组织样本中的细胞与试剂体外接触；使细胞与三个或以上的用于区别三种或以上不同细胞类型和/或不同细胞状态的检测手段接触；检验检测手段从而确定样本中的不同细胞类型和/或不同细胞状态。本发明专利技术进一步提供了用于实施本发明专利技术方法的试剂盒以及本发明专利技术方法的应用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及组织分析领域，特别涉及体外组织分析的方法，组织分析方法的应用和用于组织分析的试剂盒。
技术介绍
在进入昂贵并且潜在高危险的人体临床试验前，药物开发项目目前依赖于疾病的动物模型以评估新治疗药物的药效和毒性。这些动物系统的使用常常导致用于临床研发的候选组合物的不当选择，并导致花费多和相反的临床效果。哮喘病和慢性阻塞性肺病(COPD)是常见病。它们是危害健康的一个重大原因， 并对卫生经济造成沉重负担。这两种疾病的流行正在扩大，并且特别使人困扰是，与别的重大疾病(例如，心血管病)不同，COPD死亡率连续上升，预计到2020年将成为全球死亡的第三大原因。高达70%的具有这种情况的易患病病人的呼吸感染是由病毒引起，并存在引起严重的发病率和死亡率的潜在危险(Mallia，P. and S. L. Johnston. 2006.胸科 130:1203-1210)。哮喘和COPD感染的恶化使得呼吸道发炎增加，导致临床上会出现急性症状，如肺功能减退，呼吸困难，以及生命质量测评的下降。此外，对COPD病人而言，病毒感染容易引起二次细菌感染(Wilkinson, Τ. Μ. et al. 2006..胸科1 : 317-324)，这种现象可能由与被病毒损坏的上皮细胞结合的细菌数量增加引起(Hakansson，A. et al. 199.. 感染免疫学.62:2707-2714)。重大的研究尝试投入在模拟人体内炎症发生过程的COPD动物模型的建立中。这需要采用慢性刺激物如烟草香烟(Maeno T, et al. J免疫学2007; 178(12) 8090-8096)或者细菌副产物如LPS (Meng QR, et al. 呼吸毒理学2006; 18(8) 555-568)对呼吸道进行处理。几乎所有这些模型都专注于诱导肺气肿，但都只诱导出轻度的疾病(Churg A, Wright JL.微生物学文稿集2007; 14: 113-125)，这些模型均未表现出在更为严重人体疾病中见到的与吸烟有关的发病过程。吸烟诱导的慢性支气管炎或急性恶化的动物模型也还未建立。利用动物模型进行感染研究由于引起病理改变(Xatzipsalti M, Papadopoulos NG.微生物学文稿集2007; 14:33-41)和感染机制(例如鼻病毒的细胞结合所需要的 ICAM-I (Staunton DE, et al.细胞 1989; 56(5) 849-853)不存在于多数动物细胞中)中存在物种-特异性差异的事实而变得复杂化。尽管病毒诱导的哮喘恶化的人体模型已经被广泛利用(Papi A, et al.药理学及制药2007; 7(3) 259-265)， 除了在一项研究中利用感冒病毒以外(Mallia P, Johnston SL.胸科2006; 130(4) 1203-1210)，这种方法没有在COPD中广泛应用。研究者们对通常是年纪较大的并且具有心血管并发症风险的病人身上引发急性恶化担心其安全性和伦理学问题。因此，在体内模型中的应用很可能仍然是困难的，特别是用于利用新的抗病毒治疗方法的概念研究的证明。类似地，现有的哮喘恶化的动物模型几乎唯一地依赖于抗原攻击后的卵清蛋白的致敏作用，这种模型虽然在一定程度上模拟人体内过敏症的生理效应，但几乎肯定不遵循目前广泛认识的例如哮喘的疾病的复杂病理。已通过利用支气管上皮细胞作简单的细胞培养进行了采用人体材料的研究。原代上皮细胞和气液界面(ALI)系统在哮喘病(Wark PA, J et al.实验医学学报2005; 201(6): 937-947)和COPD病中对病毒的反应提供了有价值的见解。然而，这些培养系统不能模拟上皮组织、免疫系统、病毒和呼吸道中环境刺激物之间相互作用的复杂性 (Wilkinson TM, et al.胸科 2006; 129(2) 317-324)。
技术实现思路
本专利技术的一个目标是提供一种改进的模拟疾病的方法和/或开发用于特定疾病的药物或者治疗方法的方法。按照本专利技术第一方面，提供一种组织分析的方法，包括步骤 -提供包括至少两种不同类型细胞的组织样本；-将组织样本中的细胞与试剂体外接触；-使细胞与三个或以上的用于区别三种或以上不同细胞类型和/或不同细胞状态的检测手段接触；-检验检测手段从而确定样本中的不同细胞类型和/或不同细胞状态。按照本专利技术另一方面，提供一种模拟疾病状态的方法，包括步骤 -提供包括至少两种不同类型细胞的组织样本；-将组织样本中的细胞与至少一种能引起疾病的试剂体外接触； -使细胞与三个或以上的用于区别三种或以上不同细胞类型和/或不同细胞状态的检测手段接触；-检验检测手段从而确定样本中的不同细胞类型和/或不同细胞状态。按照本专利技术更进一步的一个方面，提供一种开发药物的方法，包括步骤(a)-提供包括至少两种不同类型细胞的组织样本； -将组织样本中的细胞与潜在的治疗试剂体外接触；-使细胞与三个或以上的用于区别三种或以上不同细胞类型和/或不同细胞状态的检测手段接触；-检验检测手段从而确定样本中的不同细胞类型和/或不同细胞状态；或者(b)_提供取自于个体的包括至少两种不同类型细胞的组织样本，所述个体已经接受潜在治疗试剂的给药治疗；-将组织样本中的细胞与试剂体外接触；-使细胞与三个或以上的用于区别三种或以上不同细胞类型和/或不同细胞状态的检测手段接触；-检验检测手段从而确定样本中的不同细胞类型和/或不同细胞状态。在步骤(b)中，该方法用于确定潜在治疗试剂的疗效。另一种方案是，(b)中部分步骤是采用已知的治疗试剂而不是潜在的治疗试剂进行实施，同样这可以用于研究治疗试剂的疗效。优选地，检测手段(detection means)是用流式细胞术检测。优选地，该检测手段不通过免疫组织化学法检测。免疫组织化学技术只能用来区分在特定样本中两种不同细胞类型和/或状态。而且，采用流式细胞术比免疫组织化学法更迅速并可定量。本专利技术方法具有可以帮助研究者检查并定量复杂的组织外植体内细胞变化的优点，并模拟药理学干预对疾病的影响，这种组织外植体是模拟体内条件。本方法同样有助于在疾病相关系统中使用来源于人的组织不会对个体产生风险的情况下，进行新治疗试剂的临床前测试。由该系统获得的实验结果也可能揭示新的疾病的机理，在临床试验前新化合物的潜在药效和毒性，或者加速并改善在药物开发进程中靶和化合物的选择。特别地，这种方法有助于在人体试验之前对治疗的“响应者”的鉴别，以及对具有风险或易患病的患者的鉴别，例如患有并存疾病的患者。该方法还可以实现对患有通常会将他们排除在临床试验外的相关既有疾病的个体进行试剂测试。该方法还可以作为从统计学上推动进一步临床研究的标志。组织样本包括结构组织，例如结缔组织、上皮组织、肌肉组织、或神经组织。已明确，术语结构组织是指包括非循环的体细胞的组织，即结构组织不包括红血球细胞。然而， 术语结构组织并不是用于排除存在于非循环组织中的白细胞。这种组织可包括非循环组织。优选的，该组织不是血液。该组织可包括下列组织类型中的一种或以上粘膜上皮组织、肿瘤组织、纤维组织、腺体组织、内皮组织、神经组织、肾脏组织、肝脏组织、肌肉组织、心脏组织、结缔组织、肺脏组织以及真皮组织。优选地，该组织本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：本杰明·里奥·尼古拉斯，卡尔·詹姆斯·史铁波，托马斯·迈克尔·艾伦·威尔金森，拉德科·迪尤卡诺维科，
申请(专利权)人：南安普敦大学，
类型：发明
国别省市：
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