一种PsPR10P956启动子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种PsPR10P956启动子、DNA构建体、载体、重组细胞、植物愈伤组织或植物及所述的PsPR10P956启动子在植物抗逆基因工程中的应用，所述启动子含有下列任意一组核苷酸序列：a、SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列；b、与SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列互补的序列；本发明专利技术PsPR10P956启动子具有较高的根特异诱导表达活性，能够提高下游抗逆基因根特异转录水平，从而能够增强转基因植物抗逆能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种启动子及其应用，特别涉及一种PsPR10P956启动子及其应用。
技术介绍
启动子是DNA上结合RNA聚合酶并形成转录起始复合物的区域。外源基因在转基因作物体内的表达依靠启动子对其的调控作用，表达量不足往往得不到理想转基因植物。 因此，选择合适的植物启动子是增强外源基因表达首要问题。根据启动子所控制的基因表达范围和方式不同，启动子可以分成组成型启动子和特异性启动子。在组成型表达启动子的控制下，外源基因在转基因植物的所有部位和所有的发育阶段都会表达。外源基因在植物内持续、高效的表达不但造成浪费，往往还会引起植物的形态发生改变，影响植物的生长和发育。为了使外源基因在植物体内有效发挥作用，同时又可减少对植物的不利影响，近年来人们对特异性启动子的研究越来越重视。随着植物根特异性表达启动子研究的不断改进，现已分离了一些植物根特异性表达基因和增强序列，这些序列能在根部特异性或优先激活从而启动基因的表达，启动子中存在负责根特异性表达的顺式作用元件，受外来因素诱导或特定蛋白调控，包括组织特异性启动子和诱导表达型启动子。例如来自烟草的富含羟脯氨酸的糖蛋白(HRGP)基因，尽管其表达水平很低但是根特异性的，在烟草侧根分化诱导过程中，在中柱鞘和内皮层中其启动子表现短时间活跃，特别是后期根发生组织细胞中活性强，属于组织特异性启动子。诱导表达是指植物细胞由于环境的变化而导致相关基因的表达。植物体内存在着一套防御机制来对付不良环境，在这个过程中，环境诱导基因启动子起着关键的作用。根对于植物从土壤中吸收水分和养分，维持正常生长具有重要作用。在环境胁迫下，最先受到影响的器官是根部组织，如果将根部诱导型特异性启动子应用于植物抗胁迫基因工程中，使抗性基因在根部细胞中特异表达，这样就能降低能量消耗，使转基因植物在获得抗性的同时，又不影响正常的生长发育，对抗逆、抗病虫的基因工程具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种能够调控目的基因高效特异表达于植物的根部组织的 PsPR10P956启动子，并应用于植物抗逆基因工程。本专利技术采用的技术方案是一种I^raiOP956启动子，所述启动子含有下列任意一组核苷酸序列a、SEQ. ID. NO. 1所示的核苷酸序列；b、与SEQ. ID. NO. 1所示的核苷酸序列互补的序列；本专利技术也不排除对上述a或b所述序列进行一个或多个碱基的取代、缺失或修饰的核苷酸序列；或与上述a或b所述序列具有至少90%同源性的核苷酸序列。进一步，所述的I^raiOP956启动子优选为含有SEQ. ID. NO. 1所示的核苷酸序列的启动子。一种DNA构建体，所述DNA构建体包含所述的PsPR10P956启动子以及与之进行可操作连接的基因序列。一种载体，所述载体含有所述的启动子或所述的DNA构建体。一种重组细胞，所述的重组细胞包含所述的启动子或所述的DNA构建体或所述的载体。进一步，所述的重组细胞优选为重组大肠杆菌细胞或重组农杆菌细胞。一种含有所述的启动子或所述的DNA构建体或所述的载体或所述重组细胞的植物愈伤组织或植物。进一步，所述的植物愈伤组织或植物优选为烟草。所述的PsPR10P956启动子在植物抗逆基因工程中的应用。进一步，所述的I^raiOP956启动子在植物抗逆基因工程中的应用为Ι^Ι^10Ρ956 启动子在抗逆转基因烟草中的应用将抗逆基因置于PsPR10P956启动子下游，构建植物表达载体，将载体导入烟草，得到抗逆转基因烟草。本专利技术提供的启动子核苷酸序列来自美洲东部白松(Pinus strobus) 0本专利技术利用同源克隆和RACE技术获得美洲东部白松I3sI3RIO基因上游956bp序列启动子，其核苷酸如SEQ. ID. NO. 1所示，具体方法如下本专利技术从美洲东部白松根中提取 DNA，根据国际基因库(GenBank)中已经发布的其它植物I3RlO基因上游DNA序列，设计引物，序列如下Fl =AAA AGCTTCTCGAGATGACTCTTRl :CATTTTCAACTCTCT CGCAACTA利用上述引物进行常规聚合酶链式反应(PCR)。将PCR产物与克隆载体(pEASY-T) 连接转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞，然后筛选阳性重组子，进行序列测序，根据获得的序列设计引物，引物序列如下F956 :AAAAGCTTGAATCAATACACCCCTCAAATR2 :AAGGATCCCATTTTCAACTCTCTCGCAAC以美洲东部白松根DNA为模板进行PCR扩增，将PCR产物与克隆载体(pEASY_T)连接转化大肠杆菌DH5ci感受态细胞，然后筛选阳性重组子，进行序列测序，得到一个956bp 启动子序列，将该序列命名为PsPR10P956。该启动子序列SEQ. ID. NO. 1信.息如下长度:956bp类型核酸链型双链来源美洲东部白松-956GMTCMTACACCCCTCAAATGCACTTGGAGGGAATCGAACCTGGGTCTATGCTC-901TMTACCATGTAGAGGTTTGTCGTTACACCAAAACTTGCAAGTGTTGATAAACTTCTAM-841CGGTAAGATCCCCATGATGAMATTATGAATTGCATAGAAGTATGGTGATTACTCCAACA-781AMTCTMTCCATCAATAAAMTGTACACAAACTMTTTTCATTTAATCTTTTTCTGCCC-721ATTTAATAAAMGATCMAATTCTGGCAGCCGAATATTTGGTCTTTTGAACTTMCGAAT-661ATATATATATCCACTGMAAGTCATTTTGAAATATATGCATTCCACGGTAGCGATGGCAC-601GGCGTTGGTGMTGTAGAAGCCTTTGTAAGCAATTTACGGCGTCTTTGACATTTGTGTAT-541CTCTTCTAGATGGGTTMCAACACGGACTGACAAMCCGCGGTGGTTAGGGAAGTTAGM-481ACGATATTCATTGAAGGATCAGCCTGTAAATAAATAAATAAAAACAAATTATCCATTTCA-421TGTCTTATCTTGTTATCTGGTCGTATCTACTCTTTGTCATTAATCGTCTCTGAMGTGGG-361AACCGGMCCGGAATCGTCTCTTGTCATTAGATGAGAAGAGAAATAACAAATCACCATGG-301GATCTAGAAACATCCATCCATTCCGTTTATTCAAAGTCAGCACACACAGTGGGGTCCGGG-241GGATCGTTGTCCTTTAGGACTTATCGAAACCAGGCATGGAGCTCGGTATTGTCGGCCACA-181AAGGCCMGGGTTCAATAAGMAACCCAAGTAGTTGGCATTATGTGCGTCCATCGGTCAG-121TCCAAATAACMATAGTCACTTTCGAGTCTCATGTCATTACCTACGCGCTCTCTTTAATG-61TACAGATTTTMAGGTTTGTMACGACTACTATAMTACGGGCTCGTCTAGTGCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧中，徐祥彬，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：