分化无核细胞及其制备方法技术

本发明专利技术提供制备分化细胞的方法和通过所述方法制备的细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案交叉参考本申请案主张2008年7月21日申请的标题为分化细胞及其制备方法 (Differentiated Cells and Processes for Preparing the Same)白勺美ISll备时串i青案第 61/082，410号的优先权，其全部内容以引用方式并入本文中。
技术介绍
无核细胞包括(但不限于)红细胞及凝血细胞。红细胞及凝血细胞来源于造血干 细胞分化。
技术实现思路
在某些实施例中，本专利技术揭示制备多种无核细胞的方法，其包含在至少一种引导 朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；其中通过以下来产生所述条 件永生化干细胞(a)使用第一载体转染多种干细胞，所述第一载体包含编码MYC分子的 核酸序列；(b)使用第二逆转录病毒载体转染所述干细胞，所述第二载体包含编码Bcl-2、 Bcl-X或其组合的核酸序列；及(c)将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成 素、Flt3配体或其组合一起培养；且其中在分化之前已抑制所述Myc分子的活性。在一些 实施例中，引导朝向无核细胞分化的细胞因子是IL_3、EP0或其组合。在一些实施例中，MYC 分子是c-Myc、I-Myc、n-Myc、s-Myc或其组合。在一些实施例中，第一载体进一步包含人类 雌激素受体的激素结合结构域。在一些实施例中，所述方法进一步包含诱导Myc分子移位 至细胞核。在一些实施例中，所述方法进一步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟 基他莫昔芬G-OHT)或二者接触。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载体与第 二载体二者是鼠科动物干细胞病毒(MSCV)或其衍生物。在一些实施例中，第一载体、第二 载体、或第一载体与第二载体二者是MSCV- (IRES) -GFP或其衍生物。在一些实施例中，第一 载体、第二载体、或第一载体与第二载体二者是MSCV-(IREQ-GFP，且进一步包含土拨鼠乙 型肝炎病毒RNA调控元件(WRE)。在某些实施例中，本专利技术揭示产生多种无核细胞的方法，其包含在至少一种引导 朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；其中通过以下来产生所述 条件永生化干细胞(a)使多种干细胞与外源合成的第一肽接触，所述第一肽包含移位至 细胞核的MYC分子；(b)使所述干细胞与外源合成的第二肽接触，所述第二肽包含Bcl-2、 BCL-X或其组合；及(c)将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体 或其组合一起培养；且其中在分化之前使所述第一肽与所述条件永生化干细胞不接触。在 一些实施例中，第一肽进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。在一些实施例中，第 一肽、第二肽、或第一肽与第二肽二者包含转运蛋白序列。在一些实施例中，第一蛋白质、第 二蛋白质、或第一蛋白质与第二蛋白质二者包含TAT序列。在一些实施例中，所述方法进一 步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬G-0HT)或二者接触。在某些实施例中，本专利技术揭示制备多种无核细胞的方法，其包含(a)使用第一载体转染多种干细胞(例如，造血干细胞)，所述第一载体包含编码MYC分子的核酸序列；(b) 使用第二 Y逆转录病毒载体转染所述多种干细胞(例如，造血干细胞)，所述第二载体包 含编码Bcl-2、Bcl-X或其组合的核酸序列；(c)将所述多种干细胞(例如，造血干细胞) 与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；(d)抑制所述Myc 分子的活性；及(c)在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养所述条件永 生化干细胞(例如，造血干细胞)。在一些实施例中，引导朝向无核细胞分化的细胞因子是 IL-3、EPO或其组合。在一些实施例中，MYC分子是c-Myc、I-Myc、n_Myc、s-Myc或其组合。 在一些实施例中，第一载体进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。在一些实施例 中，所述方法进一步包含诱导Myc分子移位至细胞核。在一些实施例中，所述方法进一步包 含使所述多种干细胞(例如，造血干细胞)与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬G-0HT)或二 者接触。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载体与第二载体二者是鼠科动物干 细胞病毒(MSCV)或其衍生物。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载体与第二载 体二者是MSCV-(IRM)-GFP或其衍生物。在一些实施例中，第一载体、第二载体、或第一载 体与第二载体二者是MSCV-(IREQ-GFP，且进一步包含土拨鼠乙型肝炎病毒RNA调控元件 (WRE)。在某些实施例中，本专利技术揭示产生多种无核细胞(例如，造血干细胞)的方法，其 包含(a)使多种干细胞(例如，造血干细胞)与以下物质接触(i)外源合成的第一肽，其 包含移位至细胞核的MYC分子；及(ii)外源合成的第二肽，其包含Bcl-2、BCL-X或其组 合；(b)将所述多种干细胞(例如，造血干细胞)与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、 Flt3配体或其组合一起培养；(c)移除第一肽；及(d)在至少一种引导朝向无核细胞分化 的细胞因子存在下培养所述条件永生化干细胞(例如，造血干细胞)。在一些实施例中，第 一肽进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。在一些实施例中，第一肽、第二肽、或 第一肽与第二肽二者包含转运蛋白序列。在一些实施例中，第一蛋白质、第二蛋白质、或第 一蛋白质与第二蛋白质二者包含TAT序列。在一些实施例中，所述方法进一步包含使所述 多种干细胞(例如，造血干细胞)与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬G-0HT)或二者接触。在某些实施例中，本专利技术揭示根据本文所揭示方法制备的凝血细胞。在某些实施例中，本专利技术揭示根据本文所揭示方法制备的红细胞。在某些实施例中，本专利技术揭示治疗特征在于缺乏无核细胞的病症的方法，其包含 投予根据本文所揭示方法制备的无核细胞。在一些实施例中，所述病症是贫血(例如，再生 障碍性贫血、恶性贫血、缺铁性贫血、镰状细胞性贫血、球形细胞增多症、溶血性贫血)、高歇 氏病(Gaucher' s disease)、溶血、嗜中性白血球减少症、血小板减少症、粒细胞减少、血友 病、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin' s lymphoma)、非何杰金氏淋巴瘤、B细胞慢性淋巴瘤、伯基 特氏淋巴瘤(Burkitt' s lymphoma)、滤泡样淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、多发性骨髓 瘤、急性髓样白血病、前B急性淋巴细胞白血病、前T急性淋巴细胞白血病、急性早幼粒细胞 白血病、难治性白血病或其组合。在某些情形下，特征在于缺乏无核细胞的病症是由化学疗 法引起(部分或完全)。在一些实施例中，通过本专利技术所揭示方法产生的无核细胞与化学疗 法共投予。附图说明本专利技术的新颖特征详细阐述于随附权利要求书中。参考阐述利用本专利技术原理的例 示性实施例的下文详细说明和附图将会更好地了解本专利技术的特征及优点，在附图中图1显示产生ctlt-造血干细胞系的途径。图IA显示用于使用Myc-ER及Bcl_2 转导原代鼠科动物HSC细胞的逆转录病毒构建体的图示。图IB显示自5-氟尿嘧啶治疗供 体获得的HSC在转导后的FACS分析。图IC显示移植经转导HSC的小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备多种无核细胞的方法，其包含：在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞因子存在下培养条件永生化干细胞；　　其中通过以下来产生所述条件永生化干细胞：　　ａ．使用第一载体转染多种干细胞，所述第一载体包含编码ＭＹＣ分子的核酸序列；　　ｂ．使用第二逆转录病毒载体转染所述干细胞，所述第二载体包含编码Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－Ｘ或其组合的核酸序列；及　　ｃ．将所述干细胞与ＩＬ－３、ＩＬ－６、干细胞因子、血小板生成素、Ｆｌｔ３配体或其组合一起培养；　　且其中在分化之前已抑制所述Ｍｙｃ分子的活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/082,4102008年7月21日1.一种制备多种无核细胞的方法，其包含在至少一种引导朝向无核细胞分化的细胞 因子存在下培养条件永生化干细胞；其中通过以下来产生所述条件永生化干细胞a.使用第一载体转染多种干细胞，所述第一载体包含编码MYC分子的核酸序列；b.使用第二逆转录病毒载体转染所述干细胞，所述第二载体包含编码Bcl-2、Bcl-X或 其组合的核酸序列；及c.将所述干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；且其中在分化之前已抑制所述Myc分子的活性。2.根据权利要求1所述的方法，其中引导朝向无核细胞分化的所述细胞因子是IL-3、 EPO或其组合。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述MYC分子是c-Myc、I-Myc、n-Myc、s-Myc或其 组合。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体进一步包含人类雌激素受体的激素 结合结构域。5.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含诱导所述Myc分子移位至细胞核。6.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使所述多种干细胞与雌二醇(E2)、4-羟 基他莫昔芬 G-hydroxytamoxifen) (4-0HT)或二者接触。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体、所述第二载体、或所述第一载体与 所述第二载体二者是鼠科动物干细胞病毒(MSCV)或其衍生物。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体、所述第二载体、或所述第一载体与 所述第二载体二者是MSCV- (IRES) -GFP或其衍生物。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一载体、所述第二载体、或...

【专利技术属性】
技术研发人员：优素福·里菲利，
申请(专利权)人：泰加生物工艺学公司，
类型：发明
国别省市：US