本发明专利技术涉及“人工合成的美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)抗原、抗体及其制备方法、应用”，属于生物技术领域。人工合成的美洲商陆抗病毒蛋白抗原，包括具有免疫原性的载体蛋白和与其偶联的人工合成的多肽，所述多肽的氨基酸序列为SEQ?ID?NO1或/和SEQ?ID?NO2。本发明专利技术应用该人工合成多肽与匙孔嘁血蓝蛋白的偶联物作为抗原，制备得到了三种PAP抗血清，可应用于PAP制剂、PAP基因原核表达和真核表达产物、转基因再生植株等检测，能够采用免疫学手段检测PAP及其基因的表达情况，为PAP的检测提供物质基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术专利属于生物学和生物
，特别是涉及利用人工合成的多肽作为抗原，制备得到美洲商陆抗病毒蛋白多克隆抗体的技术。
技术介绍
美洲商陆抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein, PAP)是从美洲商陆 (Phytolaccaamericana L.)植株春天叶片中分离出的单链(I型)核糖体失活蛋白 (Ribosome InactivatingProteins, RIPs)，分子量约为 30kD。RIPs 具有独特的 rRNA-N 糖苷酶活性，能够水解真核生物核糖体28S大亚基RNA GAGA茎环(stemloop)结构上特定位点的腺嘌呤残基，从而使核糖体失活，干扰核糖体与延伸因子的结合，继而抑制蛋白质的生物合成(Irvin, J. D. &Uckun, F. Μ. Pokeweed antiviral protein :ribosome inactivation and therapeutic applications. Pharmacol. Ther. 1992，55 :279-302)。自Duggar等1925年发现商陆中存在着一种潜在的能阻碍植物病毒传播的因子，Kassanis等从美洲商陆叶片中分离、纯化了该阻碍因子，并初步描述了其特性后，人们开始了一系列研究。研究发现PAP是目前所有Rib中最为有效的抗病毒蛋白，低浓度就具有很强的抗性。其不仅对7个病毒组的7种植物病毒有抑制作用，还对包括艾滋病毒(human immunodeficiencyvirus 1，HIV 1)在内的多种动物病毒、真菌、细菌的侵染有一定的抑制作用，在体外，该蛋白可以阻碍脊髓灰质炎病毒和流感病毒的复制，在体外无细胞蛋白质合成系统(兔网织红细胞)中，可以阻碍真核生物蛋白质的合成(Kassanis， B.，&A.Kleczkowski. The isolationand some properties of a virus-inhibiting protein from Phytolacca esculents. J.Gen. Microbiol. Academic Press，N. Y. 1948 ； Tomlinson. J. A. et al. , The inhibition ofinfection by cucumber mosaic virus and influenza virus by extract of Phytolaccaamericana,J. Gen. Virol 1974，22，225-232 ; Aron G M， Irvin J D， Antimicrob. AgentsChemother. 1980,17 :1032-1033 ；Zarling J M， Moran P A， Haffar 0 et al.Inhibitionof HIV replication by pokeweed antiviral protein targeted to CD4 cells by monoclonalantibodies· Nature，1990，347 :92-95 ； Chen Z C, White R F,Antoniw J F，et al. Effectof pokeweed antiviral protein (PAP) on the infection of plant viruses. Plant Pathology,1991,40 :610-612 ；Oalson， M.S. Ramakrishnan, T. Anand, Ribosomal inhibitory proteins from plants inhibits HIV—lrepIication in acutely infected peripheral bloodmononucIear cells， AIDS Res. Hum. Retrovir. 1991，7，1025-1030)。正是由于PAP有着这种广谱性的抑制危害动、植物及人体的病原真菌、细菌和病毒的作用，因此其越来越引起人们的好奇和重视，不断的促使人们对其进行深入研究，并希望在不久的将来在农业和医学领域发挥其特殊的作用和实用价值。成熟的PAP全长262个氨基酸，其中N端22个氨基酸组成信号肽，负责将PAP从核糖体向细胞膜运输，C端25个氨基酸为毒性区(Nonzingo, A. F. E. J. Collons, The 2.5Astructure of plokeweed antiviral protein, J. Mol. Biol. 1993,233,705-715)。 缺失C端毒性区的PAP突变体对细胞的毒性很低，仍具有较强的抗病毒活性(Jennifer K. Lodge, Nilgun Ε. Turner. Broad-spectrum virus resistance in transgenic plants expressingpokeweed antiviral protein. 1993,90 :7089-7093.)。Lodge 等 Mf PAP 基因导入烟草和马铃薯，获得的转基因植株及其后代具有广谱的抗病毒特性，包括对机械和蚜虫传播的病毒如马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y， PVY)、马铃薯卷叶病(Potato leaf roll virus, PLRV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)、苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)等均有抗性(Jennifer K. Lodge, Nilgun E. Turner. Broad-spectrum virus resistance in transgenicplants expressing pokeweed antiviral protein. 1993,90 7089-709；3)。国内学者在油菜、番茄等作物上也获得了对芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus, TuMV)、TMV、CMV、PVX有抗性的转基因植株(张海燕，党本元，周奕华等用微束激光穿刺技术将PAP导入油菜获得抗病毒转基因植株中国激光，1999，沈(1) :1053-1056.；傅道林，王兰岚，张海燕等用微束激光穿刺技术将商陆抗病病毒蛋白(PAP) cDNA导入马铃薯的研究光子学报，2000，四(11) :970-974.)。本实验室也克隆到了缺失C、N端的PAP基因，并构建原核生物、真核生物表达载体，通过室内摇瓶发酵制备了 PAP，并分别将缺失型PAP基因导入小麦、玉米、棉花和矮牵牛，获得了抗病植株(陈定虎，王锡锋，李莉等，美洲商陆抗病毒蛋白在毕赤酵母中的表达及其抗病毒活性的测定。农业生物技术，2003，11 O) 183-186 ；周倩，王锡锋，李莉，周广和，高必达.2003毕赤酵母Mut+和Muts重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较，植物病理学报，33( 本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．人工合成的美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）抗原，包括具有免疫原性的载体蛋白和与其偶联的人工合成的多肽，所述多肽的氨基酸序列为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１或／和ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李莉，王锡锋，李羽，周广和，刘艳，吴蓓蕾，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：11
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