一种血管紧张素II受体1型多肽-载体疫苗及其用途，属于生物技术药品和生物治疗学领域。将包含第一连接位点的血管紧张素II受体1型的免疫原性肽段及其衍生物与一种或多种载体、优选地与重组Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白耦联结合，以形成有序、重复的多肽-载体疫苗。公开了该疫苗在治疗原发性高血压方面的应用，该疫苗能够产生高效的特异性的抗人血管紧张素II受体1型的一段免疫原性肽段及其衍生物的抗体，可以有效阻断RAS的激活，能够显著降低自发性高血压大鼠的血压，且具有良好的靶器官保护作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术药品和生物治疗学领域，具体涉及一种血管紧张素II受体1 型(ATlR)的一段免疫原性肽段及其衍生物与一种载体特别是病毒样颗粒(VLP)耦联后制备成的 多肽_载体疫苗，以及该疫苗在治疗原发性高血压方面的作用。
技术介绍
高血压是严重危害人类健康的世界性问题，中国高血压患病率18. 8% (2002年)， 目前全国有近2亿高血压患者。高血压是心脑血管病的主要危险因素，中国脑卒中发病率约250/10万人，冠心病发病率约50/10万人，积极控制高血压是预防脑卒中和冠心病的重要措施。目前中国门诊高血压患者治疗控制率30.6%，而中国高血压治疗总体控制率仅 6. 1%。高血压的发病涉及复杂的病理生理机制，其中肾素-血管紧张素系统(RAS)在高血压的发病中具有极其重要的作用。RAS是机体调节血容量和血压的激素系统，具有复杂的血压反馈控制系统。作为RAS最主要的组成成分，血管紧张素II (Ang II)是机体内具有最强升压性作用的物质之一，而ATlR是Ang II的主要下游作用受体，ATlR介导Ang II的后续级联升压效应和病理性靶器官结构重构。RAS在高血压的发病中起着极其重要的作用，目前针对RAS的主流治疗体系是使用小分子化合物对靶标肾素、血管紧张素转换酶(ACE)及血管紧张素II受体进行阻断。肾素抑制剂目前主要是阿利吉仑，能够有效降低高血压患者血压，但是作用并不强于现有的其它一线降压药物，进一步的临床实验在进行之中。ACE抑制剂(ACEI)包括卡托普利、雷米普利、培哚普利等，能够有效降低血压，且具有良好的靶器官保护，但是问题是容易发生干咳、首剂低血压效应，且不能完全阻断ACE的活性。血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)能够较完全阻断Ang II与ATlR的特异性作用，不引起干咳等发生在ACE抑制剂上的不良反应。 但是，以上所述肾素抑制剂、ACEI及ARB均需要每日服用，且是长期甚至终生的，总体的经济负担重，加之药物本身存在的不良反应，导致了高血压患者的治疗依从性差，且靶器官保护作用也未能达到最大效应。治疗或者预防与激素相关的疾病可以通过免疫学的方法进行，其在于应用激素本身或者截取其中的一部分，使之产生抗体后可与激素结合而达到中和或者降低激素的作用。即是说，可以针对RAS应用免疫阻滞的手段来阻滞RAS系统的各个环节，从而实现高血压的防治。迄今为止，针对RAS系统的各个环节的高血压疫苗研究均有报道，其主要分为4 种①肾素疫苗阻断肾素作用，达到良好的降压作用，但是全肾素免疫导致了免疫动物肾脏免疫复合物的沉积，发生了严重的自身免疫损害；②Ang I及其类似物疫苗=Brown MJ等报道了 PMD3117疫苗，针对Ang I及其类似物的特异性抗体能有效阻断Ang I，但是后续的临床实验发现因为抗体滴度不够高而未有血压的明显下降，进一步的改进临床试验正在进行中；③Ang II疫苗瑞士 Cytos公司的CYT006-AngQi3疫苗已经完成了 IIa期临床实验， 有较好的降压效果，且安全性和耐受性良好，特别对于清晨血压能够达到25/13mmHg的下降；④Ang II受体疫苗本团队专利技术了一种大鼠ATl受体短肽疫苗(ATR12181)，其能够有效降低SHRs血压，并能发挥良好的靶器官保护作用，长达64周的观察ATR12181疫苗免疫大鼠安全性良好。上述实例表明，应用免疫阻滞的手段来阻断RAS系统的各个环节的实践是可行且有效的，其作用不仅能够达到长效，从而改善依从性，也能达到最大的靶器官保护作用
技术实现思路
本专利技术旨在将血管紧张素II受体1型的一段免疫原性肽段及其衍生物与一种载体特别是病毒样颗粒耦联后制备成一种多肽_载体疫苗，并将该疫苗用于治疗原发性高血压。该专利技术通过以下技术方案实现首先合成人血管紧张素II受体1型的一段免疫原性肽段及其衍生物，该免疫原性肽段及其衍生物包含第一连接位点，至少能够通过一个共价键与载体的第二连接位点结合。使用重组Qi3-2aa噬菌体颗粒蛋白、重组牛乳头瘤病毒蛋白、重组乙型肝炎病毒蛋白、 匙孔血蓝素蛋白、破伤风类毒素作为载体，这些载体至少具有一个第二连接位点，优选的第二连接位点包括氨基、羧基和巯基，选自赖氨酸残基、精氨酸残基、谷氨酸残基、天冬氨酸残基和半胱氨酸残基，优选赖氨酸残基。使用异双功能交联剂将血管紧张素II受体1型的免疫原性肽段及其衍生物与上述载体、优选地与重组Qβ _2aa噬菌体颗粒蛋白耦联结合，以形成有序、重复的多肽_载体疫苗。免疫原性肽段及其衍生物多肽被重复并以一定密度展示排列在载体上或者表面，形成高抗原性的阵列展示，这种状态下可以在不加佐剂的情况下也能高效地诱导抗体的生成，利于高效的特异性的抗人和大鼠血管紧张素II受体1型的一段免疫原性肽段及其衍生物抗体的生成，可以有效阻断ATlR介导Ang II的后续级联升压效应和病理性靶器官结构重构，显著降低自发性高血压大鼠的血压，有效逆转其靶器官病理性重构，可用于原发性高血压的治疗。本专利技术的优点是1、合成的肽段可以在自发性高血压大鼠体内引起特异性的免疫应答，产生针对肽段的特异性抗体。所产生的抗体能够与ATl受体特异性结合，阻滞血管紧张素II与ATl受体结合引起的激动性反应。2、使用的异双功能交联剂具有能够同时连接两种基团的特点，而且不同的基团可以通过两步先后连接上去，这些基团是巯基、氨基、羧基和胍基，而这些异双功能交联剂是 SMCC、Sulfo-SMCC, LC-SMCC 等。3、本专利技术制备的多肽_载体疫苗主要用于治疗原发性高血压，能够显著降低自发性高血压大鼠的血压，且具有良好的靶器官保护作用。附图说明序列表SEQ ID NO 1是本专利技术构建Qi3 _2aa病毒样颗粒所用核苷酸序列。序列表SEQ ID NO 2是本专利技术构建牛乳头瘤病毒样颗粒所用核苷酸序列。序列表SEQ ID NO 3是本专利技术构建乙肝核心抗原病毒样颗粒所用核苷酸序列。序列表SEQ ID N0:4是本专利技术构建Qi3-2aa病毒样颗粒所用核苷酸序列编码的氨基酸序列。序列表SEQ ID NO :5是本专利技术构建牛乳头瘤病毒样颗粒所用核苷酸序列编码的氨基酸序列。序列表SEQ ID NO :6是本专利技术构建乙肝核心抗原病毒样颗粒所用核苷酸序列编码的氨基酸序列。图1 :ATRQi3-001疫苗制备后鉴定。图中A 病毒样颗粒和短肽耦联后 Tricine-SDS-PAGE电泳结果，M为Marker，泳道1_2为病毒样颗粒单体，泳道3_4为耦联短肽后病毒样颗粒；图中B 病毒样颗粒和短肽耦联后免疫电镜结果。图2 ATRQ β -001疫苗抗ATR-001短肽抗体滴度。图3 免疫印迹法和细胞免疫荧光鉴定ATRQβ -001抗肽抗体CQ-8的特异性。CQ-8 为ATRQii-OOl疫苗免疫动物后的抗肽抗体，DCQ-8指CQ-8被ATR-001短肽中和后的混合物，CON为阴性对照抗体。图中A 免疫印迹法鉴定ATRQii-OOl抗肽抗体CQ-8的特异性。 图中B 细胞免疫荧光鉴定ATRQii-OOl抗肽抗体CQ-8的特异性。图4 细胞免疫荧光法观察CQ-8对血管平滑肌细胞ATl受体激活后引起PKC转位的影响。CQ-8为ATRQ^-OOl疫苗免疫动物后的抗肽抗体，DCQ-8指CQ-8被A本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种血管紧张素ＩＩ受体１型多肽－载体疫苗，其特征在于：将血管紧张素ＩＩ受体１型的一段免疫原性肽段及其衍生物与一种或多种载体耦联后制备成的多肽－载体疫苗。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：廖玉华，周子华，陈霄，邱志华，杨仕俊，陈芬，王敏，余淼，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：83
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。