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器官保存液及其制法和应用制造技术

技术编号:65362 阅读:244 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供一种器官保存液及其制法和用途,该保存液含有可溶性TNF受体及可溶性IL-1受体或者表达所述受体的载体。应用该保存液可以有效降低器官移植过程中的宿主抗移植物和移植物抗宿主反应,延长移植物的存活时间,提高移植物再宿主体内的存活率,因而可有效地应用于器官移植,包括肾、肝、心脏等重要脏器的移植。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学和医学领域,更具体地涉及一种用于器官移植的器官保存液及其制备方法和用途。
技术介绍
目前,器官移植手术仍然是救治某些疾病的重要手段。然而,在将器官从供体上取下,然后移植到受体,常常需要在一定温度下保存。因此为了延长移植物的存活时间,提高移植物再宿主体内的存活率,人们常常使用器官移植保存液来保存移植器官。由于移植过程中的排斥反应与免疫系统产生的多种因子有关,因此各细胞因子与免疫排斥之间的关系一直是研究重点。TNF-α和IL-1是介导同种免疫应答的关键因子,在急、慢性同种排斥反应的各个阶段均有TNF-α的合成和释放并介导排斥反应的发生发展;可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)具有中和及拮抗TNF-α的作用,是体内自然存在的TNF-α拮抗剂。sTNFR可有效阻滞TNF-α介导的损伤,美国FDA已批准其(即p75-sTNFRIg融合蛋白,商品名Enbrel)作为治疗类风湿关节炎的一线药物而进入临床,但有关sTNFR在移植排斥反应中的作用和效能了解较少。可溶性IL-1受体(sIL-1R)是体内IL-1的天然拮抗剂。sIL-1R在自身免疫性疾病的动物模型,如EAE和自身免疫性糖尿病模型中表现出良好的治疗作用,揭示其在治疗人类自身免疫病方面也具有广阔的应用前景。目前采用的器官移植保存液如目前常用的器官保存液UW液的成分是乳糖钾盐 100mmol 胰岛素100UKH2PO425mmol青霉素40UMgSO45mmol 地塞米松 8mg棉糖 30mmol别嘌呤醇 1mmol腺苷 5mmol 羟乙基淀粉50g谷胱甘肽 3mmol UW液的特点有(a)不含葡萄糖,而用乳糖盐作为非渗透阴离子,加棉糖作为附加的渗透支持。(b)含羟乙基淀粉,作为有效胶体发挥其渗透压力,可以阻止有害的细胞间隙扩大。(c)以磷酸盐预防酸中毒。(d)用谷胱甘肽、别嘌呤醇对抗氧自由基。临床证实UW液可保存胰腺、肾达72小时,保存肝20~24小时。现在,UW液及其各种UW型改良液已在国际上日益广泛应用,有替代Collins类型溶液的明显趋势。但是目前此类保存液仅是从如何保存组织中细胞的活性,并不能降低器官移植过程中的移植物抗宿主或宿主抗移植物的反应,从而提高器官移植后的存活率。由于移植器官的保存对于移植手术的成功与否至关重要,因此,本领域迫切需要开发新的器官移植保存液,该保存液不仅可以有效降低器官移植过程中的宿主抗移植物和移植物抗宿主反应,延长移植物的存活时间,和/或可以提高移植物再宿主体内的存活率,从而可有效地应用于包括肾、肝、心脏等重要脏器的移植。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种器官移植保存液,该保存液不仅可以有效降低器官移植过程中的宿主抗移植物和移植物抗宿主反应,延长移植物的存活时间,和/或可以提高移植物再宿主体内的存活率。在本专利技术的第一方面,提供了一种器官保存液,它含有以下组分(a)30-300ug/L的可溶性TNF受体或TNF拮抗剂,或者1×109-1014PFU/升表达可溶性TNF受体或TNF拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;(b)30-600ug/L的可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂,或者1×109-1014PFU/升表达可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;以及(c)药学上可接受的稀释剂。在另一优选例中,所述保存液含有(a)30-300ug/L的可溶性TNF受体或TNF拮抗剂,按保存液的总体积计和(b)30-600ug/L的可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂,按保存液的总体积计。在另一优选例中,所述保存液含有以下组分(a)1×1010-1013PFU/升表达可溶性TNF受体或TNF拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;(b)1×1010-1013PFU/升表达可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂的载体,按保存液的总体积计。在另一优选例中,所述的载体选自下组真核表达载体和重组病毒载体。在另一优选例中,所述的重组病毒载体是选自下组的载体重组腺病毒、逆转录病毒、重组痘苗病毒、单纯疱疹病毒。在另一优选例中,所述保存液还含有选自下组的一种或多种添加剂(d1)9±0.5克 NaCl;(d2)20-200克 白蛋白;(d3)40U-4000U/L抗菌素,所述抗菌素选自青霉素、青霉素、庆大霉素、卡那霉素、先锋霉素;(d4)25mmol/L KH2PO4;(d5)5mmol/L MgSO4;(d6)30mmol/L棉糖;(d7)3mmol/L谷胱甘肽;(d8)1mmol/L别嘌呤醇;(d9)50g/L羟乙基淀粉。本专利技术还提供了上述保存液的冻干制剂,即将保存液冻干从而去除水分所形成的冻干制剂。在本专利技术的第二方面,提供了本专利技术上述的器官保存液的用途,它被用于保存待移植的器官和组织。在本专利技术的第三方面,提供了一种保存待移植用器官或组织的方法,包括步骤将本专利技术所述器官保存液通过动脉灌注于待移植器官或组织,和/或将待移植器官或组织在该保存液中浸泡1小时-10天。在本专利技术的第四方面,提供了一种本专利技术上述的器官保存液的制备方法,包括以下步骤混合以下各组分,按1升保存液计算 (a)1×109-1014PFU表达可溶性TNF受体的重组腺病毒;(b)1×109-1014PFU表达可溶性IL-1受体的重组腺病毒;(c)药学上可接受的稀释剂;从而制得保存液。在另一优选例中,所述的组分还包括选自下组的一种或多种(d1)9±0.5克 NaCl;(d2)20-200克 白蛋白;(d3)40U-4000U/L抗菌素,所述抗菌素选自青霉素、青霉素、庆大霉素、卡那霉素、先锋霉素;(d4)25mmol/L KH2PO4;(d5)5mmol/L MgSO4;(d6)30mmol/L棉糖;(d7)3mmol/L谷胱甘肽;(d8)1mmol/L别嘌呤醇;(d9)50g/L羟乙基淀粉。附图说明图1显示了本专利技术一个实例中器官移植保存液对小鼠心脏移植存活期的延长作用。图中,“control”表示对照,“LacZ-heart”表示采用表达LacZ的重组腺病毒处理的小鼠心脏,“sTNFr-sIL-1r-heart”表示采用表达sTNFr的重组腺病毒以及表达sIL-1r的重组腺病毒处理的小鼠心脏。图2显示了心脏移植后不同时间小鼠外周血sTNFr和sIL-1r的表达。图3显示了本专利技术的器官移植保存液抑制移植物浸润细胞(GIC)的同种反应活性。图4显示了本专利技术的器官移植保存液抑制移植物浸润细胞(GIC)的同种细胞杀伤活性(CTL)。具体实施例方式本专利技术人经过广泛而深入的研究,对器官保存液的各成分进行了筛选,发现当添加适量的可溶性TNF受体或TNF拮抗剂和适量的可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂时,可以有效降低器官移植过程中的宿主抗移植物和移植物抗宿主反应,延长移植物的存活时间,提高移植物再宿主体内的存活率,因而可有效地应用于器官移植,包括肾、肝、心脏等重要脏器的移植。用于配制本专利技术器官保存液的各组分都是现有技术中已知的,可用现有技术中常规的方法制备或直接购得。如本文所用,术语“可溶性TNF受体或TNF拮抗剂”指可溶性肿瘤坏死因子受体p55以及可溶性肿瘤坏死因子受体p75以及抗TNF的单克隆抗体以及可以抑制TNF表达分泌的蛋白质或化合物,本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种器官保存液,其特征在于,它含有以下组分:(a)30-300ug/L的可溶性TNF受体或TNF拮抗剂,或者1×10↑[9]-10↑[14]PFU/升表达可溶性TNF受体或TNF拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;(b)30- 600ug/L的可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂,或者1×10↑[9]-10↑[14]PFU/升表达可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;以及(c)药学上可接受的稀释剂。

【技术特征摘要】
1.一种器官保存液,其特征在于,它含有以下组分(a)30-300ug/L的可溶性TNF受体或TNF拮抗剂,或者1×109-1014PFU/升表达可溶性TNF受体或TNF拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;(b)30-600ug/L的可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂,或者1×109-1014PFU/升表达可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;以及(c)药学上可接受的稀释剂。2.如权利要求1所述的保存液,其特征在于,所述保存液含有(a)30-300ug/L的可溶性TNF受体或TNF拮抗剂,按保存液的总体积计和(b)30-600ug/L的可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂,按保存液的总体积计。3.如权利要求1所述的保存液,其特征在于,它含有以下组分(a)1×1010-1013PFU/升表达可溶性TNF受体或TNF拮抗剂的载体,按保存液的总体积计;(b)1×1010-1013PFU/升表达可溶性IL-1受体或IL-1拮抗剂的载体,按保存液的总体积计。4.如权利要求1所述的保存液,其特征在于,所述的载体选自下组真核表达载体和重组病毒载体。5.如权利要求1所述的保存液,其特征在于,所述的重组病毒载体是选自下组的载体重组腺病毒、逆转录病毒、重组痘苗病毒、单纯疱疹病毒。6.如权利要求1所述的保存液,其特征在于,它还含有选自下组的一种或多种添加剂(d1)9±0.5克 NaCl;(d2)20-200克白蛋白;(d3)40U...

【专利技术属性】
技术研发人员:王建莉万涛王青青曹雪涛
申请(专利权)人:浙江大学
类型:发明
国别省市:86[中国|杭州]

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