本发明专利技术公开了地非三唑在制备治疗恶性肿瘤疾病药剂中的应用。地非三唑，为三氮唑类化合物，化学名３－（２－乙基苯基）－５－（３－甲氧苯基）－１Ｈ－１，２，４－三氮唑。地非三唑对多种肿瘤细胞，包括对人卵巢癌ＨＯ－８９１０细胞、小鼠淋巴样瘤Ｐ３８８细胞、人口腔表皮样癌ＫＢ细胞、回盲肠腺癌ＨＣＴ－１１６细胞、慢性髓原白血病Ｋ５６２细胞、人肺癌Ａ５４９细胞、人鼻咽癌ＣＮＥ细胞、人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤ＲＤ细胞、原髓细胞白血病ＨＬ－６０细胞、前列腺癌ＰＣ－３细胞、人肝癌Ｂｅｌ－７４０２细胞等１２种肿瘤细胞均具有较强的体外抑制作用，可在制备多种恶性肿瘤药中应用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及地非三唑在制药领域中的新用途。
技术介绍
地非三唑最早由意大利Galliani等于1978年报道其合成路线，并发现具有抗生育活性。地非三唑作为终止早孕已有报道和应用。该药在意大利无正式名称，Galliani等用代号名为DL111-IT。经检索曽有4项国外专利，即西德专利2819372(1978)，2943326(1980)；美国专利4379155(1978)，4370336(1983)。公布了3，5-双取代1H-1，2，4三氮唑衍化物的制备方法，共40多个衍化物(其中有DL111-IT)，并证明对动物具有抗生育作用和镇静作用。地非三唑(Diphenytriazol，简称DPTZ)，化学名为3-(2-乙基苯基)-5-(3-甲氧苯基)-1H-1，2，4-三氮唑，英文化学名为3-(2-ethylphenyl)-5-(3-methoxyphenyl)-1H-1，2，4triazol。其化学结构式为 分子式为C17H17N3O 分子量为279.34本品的理化性状白色结晶性粉末。无臭，无味，在无水乙醇，氯仿中易溶，植物油中微溶，难溶于水。熔点76～81℃。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供地非三唑治疗恶性肿瘤疾病的新用途，即在制药中的新应用。具体说，本专利技术涉及地非三唑作为制备治疗卵巢癌，宫颈癌，淋巴瘤，白血病，肺癌，肝癌，大肠癌，前列腺癌，鼻咽癌，口腔癌，恶性横纹肌瘤等多种恶性肿瘤疾病的药中应用。制备地非三唑注射液取注射用植物油(茶油，大豆油等)1000ml，在150℃干热灭菌1小时，放冷至50℃，取出部分油液加入1g地非三唑，搅拌使溶解，最后添加溶媒至全量。用干燥的3号垂熔漏斗过滤，灌封于1ml干燥的灭菌安瓿中，100℃流通蒸汽灭菌30分钟，制成每支安瓿1ml含地非三唑1mg的注射液。制备地非三唑纳米乳胶丸将地非三唑溶解在非水性液体或半干固体的复合辅料，制备成软胶丸，每丸含地非三唑0.5mg这种复合辅料一旦与水或胃肠液相混合就会迅速和自发地形成纳米大小的水包油乳液，药物就溶解在这些极小的油滴中，并迅速分散到胃肠道中的吸收部位。在整个吸收过程中由于药物始终保持分子状态，而且这些极小的含药油滴能增加其在肠道上皮细胞的吸附，延长吸收时间，增加药物通过淋巴系统的转运和通过肠道Payer’s区M细胞吞噬进入体内循环，避免了首过消除。提高了生物利用度，增加了药物的靶向性。制备地非三唑微球注射液将生物相容性和生物降解性聚合物制备成地非三唑注射用微球，每支注射液含地非三唑2mg。肌注后，在给药部位此聚合物将缓慢释放药物与吸收，使作用时间延长。这种聚合物释药后水解为对人体无害的降解物(水和二氧化碳)。长效地非三唑微球注射液肌注1次，可维持药效一个月。用于恶性肿瘤术后，防止癌细胞转移复发。为了更好地了解本专利技术的实质，以下将地非三唑的药理毒理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。1.地非三唑对多种肿瘤细胞的体外抑制作用取培养3～4天的人卵巢癌HO-8910细胞一瓶，加入适量胰蛋白酶使贴壁细胞脱落，用含10％胎牛血清的RPMI1640营养液配成细胞悬液，计数后用完全培养液稀释成浓度约为4×104个/ml的细胞悬液，取24孔板，每孔加细胞悬液1ml，放入培养箱48小时后，加入受试物10μl，使终浓度分别为地非三唑40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml，每个浓度4孔，加药后培养48小时，每孔加入5mg/ml MTT60μl，温育4小时吸去上清液，加入0.5mlDMSO摇匀，用酶标仪于550nm处测定每个小孔的OD值，细胞存活率的计算公式为细胞存活率％＝(加药细胞OD值/对照细胞OD值)×100％。用Bliss法求出IC50。重复三次。对小鼠淋巴样瘤P388细胞、人口腔表皮样癌KB细胞、回盲肠腺癌HCT-116细胞、慢性髓原白血病K562细胞、人鼻咽癌CNE细胞、人宫颈癌Hela细胞、人恶性胚胎横纹肌瘤RD细胞、人肺癌A549细胞、原髓细胞白血病HL-60细胞、前列腺癌PC-3细胞、人肝癌Bel-7402细胞的体外抑制作用试验方法同上。结果表明，地非三唑对HO-8910、P388、KB、HCT-116、K562、CNE、RD、A549、Hela、HL-60、PC-3、Bel-7402等细胞共孵育48小时后，均显示较强的抑制细胞增殖作用。地非三唑40μg/ml作用于以上各肿瘤细胞48小时后，抑制率分别为94.1％、98.6％、87.1％、99.7％、96.5％、65.5％、98.0％、68.7％、92.3％、90.0％、93.9％、100.0％，其IC50及95％可信限分别为15.1(12.5-18.4)、4.1(1.3～13.5)、10.7(7.4～15.6)、6.2(1.8～21.6)、9.9(5.3～18.4)、17.3(10.5～28.5)、12.6(8.0-20.2)、17.4(13.0～23.4)、9.9(4.8～19.6)、14.1(7.4-26.7)、19.7(8.6-40.5)、5.6(1.4-15.7)μg/ml。见表1。表1.地非三唑作用48小时对多种肿瘤细胞的体外抑制作用肿瘤 地非三唑(μg/ml)IC50及95％可信限细胞 2.5 5.0 10 20 40 (μg/ml)HO-89100.7 6.1 28.957.694.115.1(12.5-18.4)CNE11.323.447.751.765.517.3(10.5-28.5)A549 18.322.840.150.468.717.4(13.0-23.4)P388 42.160.068.378.298.64.1(1.3-13.5)K562 14.217.632.271.096.59.9(5.3-18.4)Hela 13.721.939.572.692.39.9(4.8-19.6)HL-60 - 2.4 26.985.590.014.1(7.4-26.7)PC-3 - - 6.6 50.693.919.7(8.6-40.5)Bel-7402 31.241.362.789.2100.0 5.6(1.4-15.7)KB 15.728.249.257.787.110.7(7.4-15.6)RD 1.6 11.327.754.798.012.6(8.0-20.0)2.地非三唑对人卵巢癌HO-8910细胞的体外抑制作用的时效关系取培养4～5天的HO-8910细胞一瓶，加入适量胰蛋白酶使贴壁细胞脱落，用含10％胎牛血清的RPMI1640营养液配成细胞悬液，计数后用完全培养液稀释成浓度约为4×104个/ml的细胞悬液，取24孔板，每孔加细胞悬液1ml，放入培养箱48小时后，加入受试物10μl，使终浓度分别为地非三唑40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml。每个浓度4孔。加药后培养24小时、48小时、72小时、96小时，每孔加入5mg/ml MTT60μl，温育4小时吸去上清液，加入0.5mlDMSO摇匀，每孔吸出0.1ml于96孔板，用酶标仪于550nm处测定每个小孔的OD值，细胞存活率的计算公式为细胞存活率％＝(加药细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
地非三唑药剂在治疗卵巢癌，宫颈癌，淋巴瘤，白血病，肺癌，肝癌，大肠癌，前列腺癌，鼻咽癌，口腔癌，恶性横纹肌瘤疾病的药中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何俏军，方瑞英，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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