一种器官保存液及其制备方法技术

本发明专利技术属于医学生物学技术，涉及一种器官保存液及其制备，按照每１０００ｍｌ配制量的步骤包括：分别取四氢生物蝶呤１．５７ｍｇ、二氮嗪６．９２ｍｇ溶于１ｍｌ二甲基亚砜作为母液；配制０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＣａＣｌ↓［２］１０ｍｌ备用；将８００ｍｌ双蒸水加入１０００ｍｌ容器中，依次加入ＫＣｌ１．１２ｇ、ＭｇＣｌ↓［２］２．６４ｇ、甘露醇１０．９３ｇ、组氨酸４．６３ｇ、谷胱甘肽０．９２ｇ、谷氨酸钠３．７４ｇ，搅拌至清晰；加入乳酸钠６．９０ｍｌ，搅拌至清晰；加入０．１ｍｏｌ／Ｌ　　ＣａＣｌ↓［２］２．５ｍｌ，搅拌至清晰；加入备用液和母液，搅拌至清晰。ｐＨ调至７．３～７．５，渗透压调至３２０　　Ｏｓｍ／Ｌ，双蒸水定容至１０００ｍｌ。放置４℃低温保存。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物学和医学
，涉及器官移植技术中的器官保存，更具体地涉及一 种器官保存液及其制备方法。
技术介绍
器官移植是20世纪人类医学科学的重大进展。目前，全世界在各领域的移植总数已超过 70万例(次)，存活最长的器官移植受者已近半个世纪。器官保存是器官移植的三大技术支 柱之一。为了提高患者长期存活率、缓解供器官短缺的矛盾，移植临床对器官保存技术提出 了更高的耍求。美国威斯康星大学(UW) Belzer教授等1988年研制成功的威斯康星大学溶液(University of Wisconsin Solution, UW液)极大地延长了肾、胰、肝、心脏等器官的保存时间。在UW液 应用的20多年来，其已逐渐成为了临床上器官移植工作中保存液的金标准，后续开发成 功的一系列器官保存也都以UW液为参照。Celsior液是1994年由Pasteur-Merieux研制成功 的一种新型的细胞外液型保存液，其心脏冷保存效果已被实验证实优于UW液和St.Thomas 液等传统的器官保存液。每升Celsior液的成分是甘露醇10.93g;组氨酸4.63g;谷胱甘肽0.92g; 谷氨酸钠3.74g;乳酸钠6.90ml; KC1 1.12g; MgCl22.64g; 0.1mol/L CaCl2 2,5ml。 Celsior液 对心肌的作用主要表现在(1)细胞外Na+为87-115mmol/L， lT为6. 3-6. 9mmol/L，是一种高钠 低钾溶液，与细胞外液相似，易于均匀扩散至组织间隙，改善灌注效果；(2)通过添加非渗 透性物质甘露醇、乳糖醛酸等大分子来维持细胞内外渗透压的平衡，减轻心肌细胞水肿；(3) 通过组氨酸/乳糖醛酸缓冲系统防止细胞酸化；(4)保存液中含有谷氨酸，保证充足的ATP供 应；(5)用还原型谷胱甘肽作为抗氧化剂，可防止氧自由基介导的损伤作用。临床证实Celsior 液在心脏移植中应用是安全有效的，可显著延长器官体外活性。但是目前此类保存液并不能 降低器官移植过程中的灌注再损伤，对进'步提高器官移植后的存活率存在一定障碍。本研究试图通过对Celsior液进行改良，研究开发出基于Celsior液的新的能防止减弱缺血 再灌注损伤的多器官保存液。四氢生物蝶呤(BH4)为喋啶类化合物，是一氧化氮合酶(NOS)重要的辅助因子，可与 NOS紧密结合，促进NO的合成与释放。内源性NO可抑制PMN对血管内皮粘附、聚集， 从而减轻组织器官的缺血损伤。NO也通过抑制PMN膜结合NADPH氧化酶活性，直接中和 超氧阴离子而减轻氧自由基对血管内皮的损伤。因此可将BH4作为一种抗氧化、抗缺血再灌注损伤的因子添加至Celsior液中以加强其器官组织保护作用。二氮嗪(diazoxide，DE)是一种苯丙噻二嗪类衍生物，作为一种血管扩张剂用于高血压危 象的治疗。近年来的研究证实，DE还是一种线粒体ATP敏感性钾通道的特异性开放剂，它 可模拟缺血预处理效应，对抗心肌缺血缺氧性损伤。在移植心脏保存领域，预先给予DE可 显著促进心脏保存后舒张功能的恢复，缓解心肌水肿程度。因此，可将DE直接添加在心麻 痹液中进行心脏保存。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能有效防止减弱缺血再灌注损伤的多器官保存液及其制备 方法。本专利技术是一种器官保存液，其特征在于，在1000ml器官保存液中含有 甘露醇 10.93g; 组氨酸4.63g; 谷胱甘肽0.92g;谷氨酸钠3.74g; 乳酸钠6.90ml; KC1 U2g;MgCl22.64g; 0.1mol/LCaCl2 2.5ml;四氢生物蝶呤 1.57mg;二氮嗪6.92mg; 余量为双蒸水。一种上述保存液的制备方法，其特征在于按照1000ml配置量的具体步骤如下(1) 分别取四氢生物蝶呤1.57mg、 二氮嗪6.92mg溶于lml二甲基亚砜(DMSO)作为母液备 用;配制0. lmoI/L的CaCl2 1 Oml备用;(2) 将800ml双蒸水加入〉1000ml容器中，再依次加入KC1 1.12g、MgCl22.64g、甘露醇10.93g、 组氨酸4.63g、谷胱甘肽0.92g、谷氨酸钠3.74g，搅拌至颜色变为清晰；加入乳酸钠6.90ml， 搅拌至颜色变为清晰；加入O.lmol/L CaCl22.5ml，搅拌至颜色变为清晰；加入备用的母液， 搅拌至颜色变为清晰。(3) pH调至7.3~7.5，渗透压调至320Osm/L，双蒸水定容至1000ml，放置4QC低温保存待用。本专利技术的优点在于低温能减慢心肌细胞的生化反应速度和细胞内的酶降解速度，延迟溶 酶体类的亚细胞器官的消散。而Celsior液是一种新型的细胞外液型保存液，其心脏冷保存效 果己被实验证实优于UW液和St.Thomas液等传统的器官保存液。它含有防渗透剂甘露醇、 还原型谷胱甘肽等氧自由基清除剂、组氨酸缓冲系统及能量底物谷氨酸，能维持细胞内外渗 透压的平衡、有效地对抗氧自由基损伤、有效抑制酸中毒的发生、提供心肌细胞无氧状态下 的能量来源、改善血管内皮功能。四氢生物蝶呤(BH4)是一氧化氮合酶(NOS)重要的辅助因子，可与NOS紧密结合， 促进NO的合成与释放。缺血再灌注损伤引起内源性BH4减少，进而导致内皮细胞和心肌细 胞功能减退。外源性供给BH4后明显减少了NOS依赖的02—及其代谢产物H202的数量，并提高了 NO的净产量。适量的NO具有清除细胞内低水平氧自由基的作用。增加的NO通过 抑制ICAM-1表达和PMN膜结合NADPH氧化酶活性，直接中和超氧阴离子而减轻氧自由基 对血管内皮的损伤。同时，NO本身作为内皮衍化舒张因子，具有强大的扩张冠状动脉的作 用，因而可增加再灌注时的冠脉流量，促进有害物质排出，从而减轻心肌损伤。二氮嗪(diazoxide，DE)是一种线粒体ATP敏感性钾通道的特异性开放剂，对心肌缺氧 损伤后线粒体的膜结构和功能的完整性具有较好的保存作用。将DE添加在心麻痹液中，开 放mitoKATP通道，可通过降低线粒体膜电位，对抗线粒体钙超载；调节线粒体基质容积，提 高氧代谢率和促进线粒体呼吸；抑制氧应激引起的细胞调亡。应用该保存液可有效延长器官移植的存活时间，提高移植器官在宿主体内的存活率，还 可以减轻缺血再灌注损伤，它可以替代Cdsior液应用于包括心脏、肝脏、肾脏等重要脏器的 移植。具体实施例方式实施例1器官保存液的制备(以配制1000ml为例)原材料的准备甘露醇10.93g;组氨酸4.63g;谷胱甘肽0.92g;谷氨酸钠3.74g;乳酸 钠6.90ml; KCI 1.12g; MgCl2 2.64g; 0.1mol/L CaCl2 2.5ml;四氢生物蝶呤1.57mg; 二氮嗪 6.92mg;足量的双蒸水。制备过程具体步骤如下分别取四氢生物蝶呤1.57mg、 二氮嗪6.92mg溶于lml 二甲基亚砜(DMSO)作为母液 备用；配制0.1mol/L的CaCl210ml备用；将800ml双蒸水加入M000ml容器中，再依次加入 KC11.12g、 MgCl22.64g、甘露醇10.93g、组氨酸4.63g、谷胱甘肽0.92g、谷氨酸钠3.74g， 搅拌至颜色变为清晰；加入乳酸钠6.90ml，搅拌至颜色变为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种器官保存液，其特征在于，在每１０００ｍｌ器官保存液中含有：甘露醇１０．９３ｇ；组氨酸４．６３ｇ；谷胱甘肽０．９２ｇ；谷氨酸钠３．７４ｇ；乳酸钠６．９０ｍｌ；ＫＣｌ１．１２ｇ；ＭｇＣｌ↓［２ ］２．６４ｇ；０．１ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ↓［２］２．５ｍｌ；四氢生物蝶呤１．５７ｍｇ；二氮嗪６．９２ｍｇ；余量为双蒸水。

【技术特征摘要】
1、一种器官保存液，其特征在于，在每1000ml器官保存液中含有甘露醇10.93g； 组氨酸 4.63g； 谷胱甘肽 0.92g；谷氨酸钠 3.74g；乳酸钠 6.90ml；KCl 1.12g；MgCl2 2.64g； 0.1mol/L CaCl2 2.5ml；四氢生物蝶呤 1.57mg；二氮嗪6.92mg； 余量为双蒸水。2、按权利要求1所述器官保存液的制备方法，其特征在于按照每lOOOml配置量的具体步骤如下(1) 分别取四氢生物蝶呤1.57mg、 二氮嗉6.92mg溶于lml 二甲基亚砜(D...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓明，王丽娜，朱一苗，沈岳良，郑鸣之，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]