用于治疗宫颈糜烂的红色诺卡氏菌细胞壁骨架制剂及其制法制造技术

技术编号:619197 阅读:272 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种生物制剂,特别是红色诺卡放线菌细胞壁骨架制剂。先培养红色诺卡放线菌CGMCCNo.0712,再经增菌培养、菌体收集、细胞粉碎、酶纯化除脂后的所得物,经配制灌装冻干而成,其中含有红色诺卡放线菌细胞壁骨架和右旋糖酐40,两者的含量按配方的配比。通过一系列的试验和临床结果表明,本发明专利技术的制剂对适应症的疗效显著,治愈率达88%,总有效率达100%,对正常组织无损伤、无毒,安全性好,副作用小,使用简便,成本低,取代进口是治疗宫颈糜烂的首选外用药物。(*该技术在2022年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种生物制剂,特别是红色诺卡放线菌细胞壁骨架制剂,是治疗宫颈糜烂患者首选的外用药物。使用的微生物用来生产本专利技术所述产品的是一种属于诺卡氏菌所属的菌株,其具有生产红色诺卡放线菌细胞骨架制剂的能力。红色诺卡放线菌(Nocardia rubra)Nr-8026(以下简称Nr-8026菌株)就具有上述特性,适于生产本专利技术所述的产品。该菌株经在甘油琼脂培养基上,33℃培养5天而得,其于2002年2月5日在中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCCNo.0712。Nr-8026菌株的菌学特征1、菌落形态特征在甘油琼脂培养基上,33℃培养48小时,菌落隆起,呈桔红色,表面干燥皱起,外观呈砂粒状,略有光泽。接种环接触易碎。显微镜下观察菌体呈分枝状有横隔膜,形成纤细的菌丝体。整个菌丝分裂成规则的柱形短粗细胞,培养5天菌体成短杆状和球形。2、染色性革兰氏染色阳性,抗酸染色阴性。3、生化特性取甘油琼脂斜面培养基上经33℃,48小时培养的培养物接种于以下各种培养基内,经33℃,24小时后开始观察结果,连续观察8天,生化反应见下表红色诺卡放线菌生化反应结果 符合以上标准者可用于生产+阳性产酸-阴性培养与提取方法用红色诺卡氏菌属通过常规的微生物生产方法,可以培养Nr-8026菌株,并经传代、扩增、超声波粉碎,提取获得该细胞壁骨架,酶纯化、有机溶剂除脂后,再加入适量的赋形剂后冻干制成。其培养方式既可为固体培养,也可为液体培养。对培养基中的营养源并无特殊的规定,可使培养基中含有通常用于微生物培养的碳源、氮源及其它营养源。其中碳源可为淀粉、糊精、甘露醇、蔗糖、甘露糖、乳糖、山梨醇、麦牙糖、福寿草醇等。氮源可为肉膏、蛋白胨、铵盐、硝酸盐以及其它有机或无机含氮化合物。至于其它营养源则可适当添加一些无机盐类。例如食盐、磷酸盐类。对温度、时间等培养条件并无严格的限制,以利于使用菌的生长为准,并以选择使其产量最高的条件为好。例如培养基的PH值以接近中性为好,培养温度宜在22-37℃,当然这些培养基的组分、氢离子浓度、培养温度等均应根据所使用的菌株不同及外部条件等进行适当的调节,以获得最好的效果。通过常规培养微生物的方法,将Nr-8026菌株接种在甘油琼脂基上培养菌种,经检定合格的菌种增菌培养、菌体收集、细胞粉碎后经酶纯化、除脂后即为本专利技术产品的有效成分细胞壁骨架,添加药用微生物制剂所能接受的赋形剂,如右旋糖酐40,灌装后冻干即为成品。本产品每瓶为0.5ml,其组成与配比如下红色诺卡放线菌细胞壁骨架 60μg右旋糖酐4015mg经检测其质量指标见下表 本专利技术与现有技术相比,由于是利用微生物的细胞壁骨架做为有效成分,制成的生物制剂,该细胞壁骨架是一种免疫增强剂,它能增强机体抗肿瘤作用和对某些病毒和细菌感染具有保护作用,增强巨噬细胞的吞噬能力并被一系列的实验和医院临床实验所证明,对适应症取得了令人满意的疗效,治愈率达88%,总有效率达100%,对正常组织无损伤、无毒、安全性好,副作用小,是一种高效、安全、使用简便,成本低,取代进口的治疗宫颈摩烂的外用药物。本专利技术所使用的红色诺卡放线菌Nr-8026,于2002年2月5日在北京中关村,中国微生物保藏管理中心普通微生中心保藏,登记入册编号CGMCCNo.0712,并经检测表明所寄存的菌株存活,无失活者。1、一般药理试验1)、用相当于临床剂量的20、40、80倍静脉注射后,对麻醉猫血压、呼吸、心率和心电均未产生明显影响;2)、用相当于临床剂量的1000倍静脉注射后,对小鼠的协调运动和学习记忆功能未产生明显的影响。从而可见本专利技术的制剂对动物精神、神经系统、心血管系统、呼吸系统均无明显影响。2、安全试验(无菌、毒性)1)、无菌试验结果阴性,证明无菌试验合格;2)、通过小白鼠急性毒性试验实验组分别以皮下注射及腹腔注射方式给药,其剂量是人用量的5倍,对照组以无菌生理盐水0.5ml/支代替品,连续观察7-8天,小鼠状态良好,体重均较注射前增加,均无异常,剖检小鼠各脏器均无异常变化,毒性试验合格。3、长期毒性试验高于临床剂量30倍,每日一次,连续阴道给药三个月,未发现狗有毒性作用,心电图、各项血液生化及血液指标均在正常范围内与给药前比较均未发现明显毒性变化,停药两周后,留待观察的狗各项指标亦正常,未见到延迟毒性反应,从而表明本专利技术的产品在所用剂量,时间范围内无毒性作用。4、药品稳定性试验在生产工艺无改变情况下,药品在常温下,放置1、2、3个月、8个月、14个月,21个月时,该制剂中含有的丙氨酸、胞壁酸其含量与该产品生产当月时相比无明显差异,从而说明该条件下,产品的稳定性很好;又通过效力试验表明与该三批当月时的吞噬率和吞噬指数均无明显变化,表明产品稳定性很好,冻干后可常温保存二年。5、免疫力试验表明免疫吞噬鸡红细胞能力很强,其吞噬率为59-74.4%,吞噬指数0.6---0.9而右旋糖酐40其吞噬率和吞噬指数较生理盐水都低,从而说明本专利技术的产品免疫吞噬能力很强,而右旋糖酐40、生理盐水无此作用。2、 宫颈有糜烂,已除外癌变者。3、 月经规律周期不少于25天者。4、 能坚持完成疗程者。5、 受试期间不用其他治疗方法。(二)受试对象排除条件1、 阴道细胞学涂片检查结果为IIB以上者。2、 宫颈有癌变者。3、 有各种阴道炎或急性、亚急性盆腔炎者。4、 产后3个月以内。5、 多种药物有过敏史者。(三)受试对象例数总共75例,按2∶1随机表分配在试验组上50例,对照组25例。(四)使用的药物和方法1、试验组药物为红色诺卡放线菌细胞壁骨架制剂(以下简称诺卡擦剂),规格为每安瓶内含细胞壁骨架(以下简称Nr-CWS)60μg冻干粉,为申请人单位的研制品,批号950321。使用方法除去宫颈表面分泌物后,用2.0ml生理盐水溶解诺卡擦剂60μg冻干粉后,用药物浸湿无菌带尾绳棉球置于宫颈糜烂处,24小时后由患者自行取出。每周上药2次,共6次。2、对照组药物为爱宝疗浓缩液,每克含爱宝疗360mg,为德国BYK公司产品,批号J940475。使用方法首先用1∶5稀释液冲洗宫颈,用纱布块清除宫颈粘液及阴道内分泌物,然后将浸透浓缩液的棉花块紧贴糜烂处三分钟后即取出,此时糜烂面全已变白。上述治疗每周二次,共6次。试验组和对照组均于月经干净后2-3天开始治疗。(五)宫颈糜烂诊断标准1、分度轻度糜烂面小于整个宫颈面积的1/3。中度糜烂面占整个宫颈面积的1/3-2/3。重度糜烂面占整个宫颈面积的2/3以上。2、分型按糜烂深浅程度分为单纯型糜烂表面平滑。颗粒型糜烂表面呈乳头状突起,不平。(六)观察事项1、用药前(1)常规询问病史,做妇科检查。(2)阴道分泌物检查清洁度,分为I、II、III度,查滴虫霉菌。(3)做阴道细胞学涂片检查,除外癌变。(4)目测宫颈糜烂面积,按诊断标准进行分度,分型。(5)查血、尿常规,肝功能(GPT或ALT)肾功能(BUN、Cr)。(6)安排专人进行治疗和观察,以便统一标准。2、用药期间(1)治疗期间建议患者避免性生活。(2)询问药物的全身和局部的不良反应情况。(3)每次上药前注意观察外阴、阴道局部的不良反应,白带变化(性状和量)。宫颈糜烂局部变化(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红色诺卡放线菌细胞壁骨架制剂,其特征是先培养红色诺卡放线菌CGMCCNo.0712,再以增菌培养、菌体收集、细胞粉碎、酶纯化除脂后的所得物,经配制灌装冻干而成,每瓶为0.5ml,其组成与配比如下: 红色诺卡放线菌细胞壁骨架 60μg 右旋糖酐40 15mg。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员:张策张轶洪晓明张国英
申请(专利权)人:沈阳胜宝康生物制药有限公司
类型:发明
国别省市:89[中国|沈阳]

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