藏红花球茎提取物及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供藏红花球茎提取物及制备方法，以及在制备抗肿瘤活性药物中的应用。本发明专利技术是从传统中药材藏红花（ｓａｆｆｒｏｎ，Ｃｒｏｃｕｓ　　ｓａｔｉｖｕｓ　　Ｌ．）中提取药用部位－球茎，用三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ）缓冲液或甲醇、乙醇等极性溶剂或水浸提，浸膏具有广谱抗肿瘤活性，体外抗肿瘤活性检测对六种不同类型的实体瘤或白血病均有强烈的抑制效应，半数致死率ＩＣ↓［５０］基本在２５－５０ｕｇ／ｍｌ之间，其半数致死率ＩＣ↓［５０］约２５－５０ｕｇ／ｍｌ，而对人的正常细胞的半数致死率ＩＣ↓［５０］约２５０／ｍｌ，毒性较肿瘤细胞低５－１０倍，因此与药用赋形剂组合，可在制备治疗抗肿瘤活性药物中应用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属从天然药用植物中提取有效成分，尤其是从藏红花球茎中提取有效成分及制备方法，并在制备抗肿瘤活性药物中的应用。
技术介绍
藏红花(saffron，Crocus sativus L.)为鸢尾科(Iridaceae)番红花属多年生草本植物，又名番红花，西红花，原产于西班牙、希腊、南欧各国以及伊朗等地，印度日本也有栽培，经印度传入我国西藏，因此在我国称为藏红花，目前在我国浙江、江苏、山东、北京等地也有栽培。自古以来，藏红花就作为药材、香料、染料在东西方广泛应用，其柱头强烈的活血化淤、散郁开结功效使其成为传统的妇科良药。由于其药用部位柱头的产量极低，采收耗时费力，在我国被列为珍稀名贵中药材。近年来，科学家发现藏红花柱头中的一些化学物质，如藏红花素、藏红花苦素、藏红花醛及藏红花酸具有明显的抗癌作用，可以从分子水平抑制原癌基因的启动及癌细胞DNA和RNA的合成，且对正常组织无明显的毒副作用，因此藏红花成为新型抗癌药物再次引起人们的重视，但其球茎中所含的生化成分和药用功能却一直被忽视。
技术实现思路
本专利技术的目的是从藏红花球茎中提取有效成分，本专利技术将藏红花(saffron，Crocus sativus L.)鲜球茎或冻干后球茎，用溶剂浸提，获得藏红花球茎提取物，浸提用溶剂选用三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液或极性溶剂或水，极性溶剂常用乙醇、甲醇等。本专利技术的另一个目的是将藏红花球茎提取物作为有效成分与药用赋形剂组合在制备抗肿瘤活性药物中的应用。抗肿瘤活性药物包括治疗白血病药物、治疗实体瘤药物，治疗实体瘤药物主要包括治疗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、肺腺癌等药物。本专利技术提供的含藏红花球茎提取物的药物，其制剂形式主要包括液体制剂和固体制剂。固体制剂包括颗粒剂、片剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂或气雾剂。本专利技术提供含藏红花球茎提取物的药物，制剂的给药形式主要包括口服给药或非肠道给药，优选口服给药。非肠道给药形式主要包括口含或喷雾。本专利技术藏红花球茎浸提部份具有广谱抗肿瘤活性，在进行中药抗肿瘤药效的体外筛选过程中发现，藏红花球茎提取物对人的肝癌SMMC7721、宫颈癌HeLa、红白血病K562、乳腺癌BCAP37、乳腺癌MCF-7、肺腺癌SPC-A1等肿瘤细胞株系具有强烈的细胞毒活性，其半数致死率IC50约25-50ug/ml，而对人的正常细胞的半数致死率IC50约250/ml，毒性较肿瘤细胞低5-10倍，因此与药用敷料组合，可在制备治疗恶性肿瘤药物中应用。本专利技术有效利用了长期不被利用的藏红花球茎，开拓了藏红花的综合利用；为临床治疗恶性肿瘤提供有效治疗途径。本专利技术方法简便，制备成本低廉，具有实用价值。附图说明图1为不同浓度藏红花球茎提取物杀伤红白血病K562的显微照片图；图2为流式细胞仪检测藏红花球茎提取物对红白血病K562的杀伤效果；图3为藏红花球茎提取物抗红白血病K562的IC50图；图4为不同浓度藏红花球茎提取物杀伤肝癌SMMC7721的显微照片图；图5为流式细胞仪检测藏红花球茎提取物对肝癌SMMC7721的杀伤效果；图6为藏红花球茎提取物抗肝癌SMMC7721的IC50图；图7为不同浓度藏红花球茎提取物杀伤乳腺癌BCAP37的显微照片图；图8为流式细胞仪检测藏红花球茎提取物对乳腺癌BCAP37杀伤效果；图9为藏红花球茎提取物抗乳腺癌BCAP37的IC50图；图10为不同浓度藏红花球茎提取物杀伤宫颈癌HeLa的显微照片图；图11为流式细胞仪检测藏红花球茎提取物对宫颈癌HeLa的杀伤效果；图12为藏红花球茎提取物抗宫颈癌HeLa的IC50图；图13为不同浓度藏红花球茎提取物杀伤乳腺癌MCF-7的显微照片图；图14为流式细胞仪检测藏红花球茎提取物对乳腺癌MCF-7的杀伤效果；图15为藏红花球茎提取物抗乳腺癌MCF-7的IC50图；图16为不同浓度藏红花球茎提取物杀伤肺腺癌SPC-A1的显微照片图；图17为流式细胞仪检测藏红花球茎提取物对肺腺癌SPC-A1杀伤效果；图18为藏红花球茎提取物抗肺腺癌SPC-A1的IC50图；图19为藏红花球茎提取物杀伤正常人外周血淋巴细胞的显微照片图；图20为藏红花球茎提取物对人正常和肿瘤细胞的抑制趋势图。具体实施例方式本专利技术将结合具体实施例和附图作进一步说明，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本专利技术范围。实施例1藏红花球茎提取物的制备方法取藏红花鲜球茎或冻干后的球茎，按重量比1∶10-30加入乙醇溶液浸提，浸提液浓缩后得浸膏，于-20℃冰箱保存备用。可用甲醇、丙醇、异丙醇、正丁醇溶液替换乙醇溶液浸提。实施例2藏红花球茎提取物的制备方法取藏红花鲜球茎或冻干后的球茎，按重量比1∶10-30加入水溶液浸提，浸提液浓缩后得浸膏，将浸膏保存于-20℃冰箱备用。实施例3藏红花球茎提取物的制备方法取藏红花鲜球茎或冻干后的球茎，按重量比1∶10-30加入Tris缓冲液，浸提液浓缩后得浸膏，将浸膏保存于-20℃冰箱备用。实施例4藏红花球茎提取物的制备方法(四步法)参照实施例1的方法，取藏红花球茎，依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醇(或甲醇)、水浸提，浸提液浓缩后得浸膏，将浸膏保存于-20℃冰箱备用。实施例5不同方法所得浸膏的抗肿瘤活性比较将实施例1-4方法获得的浸提液，作抗肿瘤活性比较，结果参见表1。表1不同提取方法所得浸膏的抗肿瘤活性比较 从表1可以看出，依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醇(或甲醇)、水四步法浸提所得浸膏中，只有乙醇(或甲醇)部份有抗肿瘤活性，其余部分无活性或活性很低；而用水或缓冲液直接浸提，其抗肿瘤活性更高。实施例6藏红花球茎提取物对红白血病K562的作用效应方法1.株系及来源共做六个肿瘤株系分别是红白血病K562，肝癌SMMC7721，乳腺癌BCAP37，宫颈癌HeLa，乳腺癌MCF-7，肺腺癌SPC-A1，来自于浙江大学肿瘤研究所，正常人外周血淋巴细胞来自浙江省血液中心捐赠者。2.细胞培养所有细胞均培养于RPMI 1640完全培养液，(SIGMA)，加10％体积的新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，100U/ml链霉素和100U/ml青霉素，选择对数生长期细胞，按200000个细胞/孔接种于六孔板中按浓度加入药物，置37℃，5％CO2培养箱中，培养48小时后用OlympusIX70万能显微镜(penguin 600CL CCD，Pixera)拍照记录，用FCM检测计数并检测死亡细胞％，实验分上午、下午及晚上重复三次。3.取藏红花球茎Tris缓冲液提取物浸膏溶解在Tris缓冲液中，用培养液稀释成终浓度分别为0、5、10、25、50ug/ml。4、细胞死亡率检测流式细胞仪BD-FACS CALIBUR结果参见附图1、图2，图2中从左到右、从上到下依次代表药物浓度为0、5、10、25、50ug/ml及不加荧光染色剂的对照，从图中所列数据可以清楚地看到，随着药物浓度的增加，死亡细胞百分比急剧增加，分别是2.16％、1.64％、5.56％、32.79％、41.41％，不加荧光染色剂PI的对照为0.13％。重复三次的实验结果例于表2(另两次流式细胞仪检测图略)表2、不同浓度藏红花球茎提取物对红白血病K562的杀伤效果 以药物浓度(ug/ml)为横坐标，实际存活细胞百分率本文档来自技高网...

【技术保护点】
藏红花球茎提取物，其特征是通过以下方法制备：以藏红花球茎为原料，用溶剂浸提，浸提液浓缩后得浸膏，－２０℃冰箱保存。

【技术特征摘要】
1.藏红花球茎提取物，其特征是通过以下方法制备以藏红花球茎为原料，用溶剂浸提，浸提液浓缩后得浸膏，-20℃冰箱保存。2.根据权利要求1所述的藏红花球茎提取物的制备方法，其特征是选用藏红花鲜球茎或冻干后的藏红花球茎为原料。3.根据权利要求1或2所述的藏红花球茎提取物的制备方法，其特征是浸提用溶剂选自极性溶剂或水或盐溶液中任一种。4.藏红花球茎提取物，其特征是作为有效成分与药用赋形剂组合在制备抗肿瘤活性药物中的应用。5.根据权利要求4所述的藏红花球茎提取物在制备治疗白血病药物中的应用。6.根据权利要求4所述的藏红花球茎提取物在制备治疗实体瘤药物中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴平，刘非燕，胡汛，莫肖蓉，陈云龙，刘晓月，潘杰，吴世华，蒋欣杭，王国强，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]