本发明专利技术公开了一种从中国产茶叶中制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法。包括如下步骤：以一种甲基化儿茶素含最较高的中国产茶叶为原料，经热水提取与干燥得到粗提取物；粗提取物经过大孔树脂A处理之后，得到富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I(甲基化儿茶素含量18％左右)；富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I经过Toyopearl?HW-40S树脂分离纯化后，分别得到(-)-表没食子儿茶素3-O(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)和(-)-3-O-甲基-表儿茶素没食子酸酯(ECG3’Me)的单体成分(纯度均大于95％)；富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I经过大孔树脂B处理之后，得到富含甲基化儿茶素的茶多酚II(甲基化儿茶素含量＞60％)。作为一种成本低、效率高、环境友好的制备工艺，本发明专利技术易于工业化生产，具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种利用吸附层析柱法，以中国产茶叶为原料，利用大孔树脂对茶叶 中功能性成分的特异性吸附，制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法。
技术介绍
很久以来，茶叶一直受到人们的喜爱，仅次于水，是世界上最广受欢迎的饮料。除 了脍炙人口的色香味之外，还以其祛病健身的功效折服人类，而茶的风味与保健功能正是 茶叶所特有的多酚化合物所赋予的。茶多酚是儿茶素(黄烷醇类)、花色素类(花青素和花白素)、花黄素类(黄酮与 黄酮类)等集于茶叶中的一群多酚复合物的总称。其中儿茶素占60%-80%，分为酯型儿 茶素和游离型儿茶素，酯型儿茶素占儿茶素的70%左右。酚类物质早就被报道具有多种生 理活性，尤其是表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。近几年研究发现茶叶中含有另一种 儿茶素，即儿茶素的甲基化衍生物，以(-)_表没食子儿茶素3-0(3-0-甲基)没食子酸酯 (EGCG3'le)和(_)_表没食子儿茶素3-0(4_0_甲基)没食子酸酯(EGCG4"Me)为主。目前 关于甲基化儿茶素生理功能的研究主要集中在对甲基化EGCG的抗过敏作用的研究方面， 尤其是对最常见的花粉过敏症具有显著的预防和抑制作用。在日本，部分富含甲基化EGCG的产品已经进入商业发展阶段，在食品行业，饼干、 口香糖、茶饮料等添加甲基化EGCG给食品行业注入了新的卖点，得到了更多消费者的青 睐。因此，甲基化儿茶素的研究至关重要，在学术、生物学方面都具有非常重要的意义。目前，研究报道的甲基化儿茶素的体外合成主要有化学法和生物酶法。但是，化学 合成法中需要使用大量有机溶剂和各种基团保护剂，合成反应条件较为苛刻，专一性差，副 产物多，因此，化学合成不宜作为甲基化儿茶素的体外合成方法。体外酶法合成虽然专一性 强、反应条件温和、安全性高，但目前甲基化儿茶素的体外转化研究均没有对合成反应物进 行分离纯化与结构解析，没有实现酶法合成产物的大量制备。从茶叶中直接提取甲基化儿 茶素，由于其来源于天然产物，有着较好的安全性。从食品工业角度看，作为一种大量使用 的功能性基料，必须考虑原料充足，方便，易得，无毒性，生产成本低等问题。因此，合理的方 法是从茶叶中直接提取甲基化儿茶素。经过实验分析测定，比较一些中国产茶叶中甲基化 儿茶素的含量，发现中国产茶叶中一些茶叶的甲基化儿茶素含量较高。因此可以利用这些 茶叶为原料，结合吸附柱层析法的工艺，制备出富含甲基化儿茶素的茶多酚产品。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是以中国产茶叶为原料，提供一种制备富含甲基化儿茶 素茶多酚的方法，能够保证提取的产品纯度高、成本低、效率高、环境友好，且工艺易于实现 工业化生产。为解决上述问题，本专利技术提供了一种利用中国产茶叶作为原料制备富含甲基 化儿茶素茶多酚的方法，包括如下工艺步骤1)茶叶经热水提取，干燥，得到茶多酚粗提取物；2)采用特定的大孔树脂A处理茶多酚相提取物，先用水充分洗脱，去除色素和咖 啡碱；3)接着用一定浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，经浓缩和干燥，得到富含甲基化 儿茶素的茶多酚组分I (甲基化儿茶素含量18%左右)；4)采用Toyopearl HW-40S树脂处理富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I，用一定 浓度的乙醇溶液洗脱，收集不同时间的洗脱液，经浓缩和干燥，分别得到(-)_表没食予儿 茶素3-0(3-0-甲基)没食子酸酯(EGCG3" Me)和(-)-3-0-甲基-表儿茶素没食子酸酯 (ECG3’ Me)的单体成分(纯度均大于95% )；5)采用特定的大孔树脂B处理富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I，用一定浓度的 乙醇溶液洗脱，收集特定时间的洗脱液，经浓缩和干燥，得到富含甲基化儿茶素的茶多酚 II (甲基化儿茶素含量> 60% )。本专利技术所述工艺提取的EGCG3" Me和ECG3，Me纯度均大于95%，制备得到的富含 甲基化儿茶素的茶多酚II中甲基化儿茶素含量大于60%，大孔吸附树脂再生性能好，可以 再生重复利用，洗脱剂乙醇无毒无害，也可以回收多次利用。本工艺成本低、效率高、环境友 好，易于实现工业化生产。附图说明图1为富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I的HPLC图谱(其中8. 33anin和 10. 286min 分别为 EGCG3" Me 和 ECG3，Me)图 2 为 EGCG3" Me 的 HPLC 图谱图3为EGCG3" Me的核磁共振氢谱4为ECG3’ Me的核磁共振氢谱图具体实施方法1)茶多酚粗提取物茶叶用热水浴浸提30min，料液比1 20，水浴温度为80°C， 浸提之后在40°C下进行减压浓缩；2)大孔树脂A处理选取大孔树脂A，用pH3. 0缓冲液平衡，上样液也调整成同样 的PH，上样后用水充分洗脱，水的洗脱流速为每小时2个柱床体积；3)富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I 使用80%浓度的乙醇溶液洗脱大孔树脂A， 流速为每小时1个柱床体积，收集洗脱液，在50°C下进行减压浓缩；4) Toyopearl HW-40S树脂处理选取Toyopearl HW-40S树脂，富含甲基化儿茶素 的茶多酚组分I上样后使用40%浓度的乙醇溶液洗脱树脂，流速为每小时1个柱床体积，分 别收集不同时间的洗脱液，将收集的不同组分在40°C下减压浓缩、干燥；5)大孔树脂B处理选取大孔树脂B，富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I上样后使 用70%浓度的乙醇溶液洗脱树脂，流速为每小时1个柱床体积，收集特定时间的洗脱液，在 40°C下减压浓缩、干燥。权利要求1.制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法，包括如下步骤1)茶叶(甲基化儿茶素含量较高的中国产茶叶)经热水提取，干燥，得到茶多酚粗提取物；2)采用特定的大孔树脂A处理茶多酚粗提取物，先用水充分洗脱，去除色素和咖啡碱；3)接着用一定浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，经浓缩和干燥，得到富含甲基化儿茶 素的茶多酚组分I (甲基化儿茶素含量18%左右)；4)采用ToyopearlHW-40S树脂处理富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I，用一定浓 度的乙醇溶液洗脱，收集不同时间的洗脱液，经浓缩和干燥，分别得到(-)_表没食子儿茶 素3-0(3-0-甲基)没食子酸酯(EGCG3" Me)和(-)-3-0-甲基-表儿茶素没食子酸酯 (ECG3’ Me)的单体成分(纯度均大于95% )；5)采用特定的大孔树脂B处理富含甲基化儿茶素的茶多酚组分I，用一定浓度的乙醇 溶液洗脱，收集特定时间的洗脱液，经浓缩和干燥，得到富含甲基化儿茶素的茶多酚11(甲 基化儿茶素含量>60%)；2.根据权利要求1所属的制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法，其特征在于步骤1)中 茶叶提取的料液比为1 20，在80°C下水浴浸提30min。3.根据权利要求1所属的制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法，其特征在于步骤2)中 选取的大孔树脂A，用pH2. 0-3. O的缓冲液平衡，上样液也调整成相同的pH值，上样后用水 充分洗脱，水的洗脱流速为每小时1-2个柱床体积。4.根据权利要求1所属的制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法，其特征在于步骤3)中 使用一定浓度的乙醇溶液(30% -50% )洗脱大孔树脂A，流速为每小时1-2个柱床体积，收 集洗脱液，在40-50°C下减压浓缩。5.根据权利要求1所属的一种制备富含甲基本文档来自技高网...
【技术保护点】
制备富含甲基化儿茶素茶多酚的方法，包括如下步骤：１）茶叶（甲基化儿茶素含量较高的中国产茶叶）经热水提取，干燥，得到茶多酚粗提取物；２）采用特定的大孔树脂Ａ处理茶多酚粗提取物，先用水充分洗脱，去除色素和咖啡碱；３）接着用一定浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，经浓缩和干燥，得到富含甲基化儿茶素的茶多酚组分Ⅰ（甲基化儿茶素含量１８％左右）；４）采用Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ－４０Ｓ树脂处理富含甲基化儿茶素的茶多酚组分Ⅰ，用一定浓度的乙醇溶液洗脱，收集不同时间的洗脱液，经浓缩和干燥，分别得到（－）－表没食子儿茶素３－Ｏ（３－Ｏ－甲基）没食子酸酯（ＥＧＣＧ３″Ｍｅ）和（－）－３－Ｏ－甲基－表儿茶素没食子酸酯（ＥＣＧ３’Ｍｅ）的单体成分（纯度均大于９５％）；５）采用特定的大孔树脂Ｂ处理富含甲基化儿茶素的茶多酚组分Ⅰ，用一定浓度的乙醇溶液洗脱，收集特定时间的洗脱液，经浓缩和干燥，得到富含甲基化儿茶素的茶多酚Ⅱ（甲基化儿茶素含量＞６０％）；。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曾晓雄，高远，张鑫，周蓓，王琳，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。