红色奴卡氏放线菌细胞壁骨架用于治疗肝脏疾病的新用途制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种红色奴卡氏放线菌细胞壁骨架的医药新用途，即治疗肝脏疾病的新用途。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种红色奴卡氏放线菌细胞壁骨架的医药新用途，即治疗肝脏疾病的新用途。
技术介绍
红色奴卡氏放线菌(Nocardia rubra)是自土壤分离的一种放线菌，分类学上属于细菌域，厚壁菌门，放线菌纲，奴卡氏菌属。目前国内已有研究者从该菌中分离制备得到一种天然混合产物——红色奴卡氏菌细胞壁骨架(Nocardia rubra cell wall skeleton，简称N-CWS)，也称红色诺卡氏菌细胞壁骨架。主要成分为类脂化合物(枝菌酸17.1％)、多糖(阿拉伯半乳聚糖46.3％)和粘肽(主要为丙氨酸、谷氨酸、二氨基庚二酸、葡萄糖胺和胞壁酸)等(Zhang ZL，Lin S，Tang WL，et al.Studies on thephysico-chemical properties，composition and content determination of Nocardia rubra cell wallskeleton[J].J China Antibiotic，2002，27(9)532-534)。临床上已用于治疗体外炎症、妇科疾病、疱疹病毒引起的感染的临床治疗药物。目前，国内外学者已通过荷瘤小鼠整体动物模型，验证了N-CWS具有显著预防和抑制肿瘤增生，并治疗癌性并发症(癌性胸水、癌性腹水)的作用，包括膀胱癌、乳腺癌、肺癌，辅助治疗恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤、晚期胃癌和食道癌等。除此之外，目前未见有关于N-CWS其它药效作用的报导。近年来，各种慢性肝炎、病毒性肝炎、酒精性肝炎以及因肥胖导致的脂肪肝呈明显上升趋势，肝脏疾病已成为严重危害人类身体健康的重大疾病之一，但是，市场上尚未见有特效低毒的各类抗肝炎药物，发现更多肝脏类疾病的治疗新药已成为药物研究领域的重点之一。
技术实现思路
本专利技术公开了红色奴卡氏放线菌细胞壁骨架(以下简称N-CWS)的治疗新用途，即其可以用于治疗肝脏疾病，所述肝脏疾病包括慢性肝损伤、肝纤维化、急性肝损伤、化学性肝损伤、肝炎等，也可用于护肝。本专利技术的N-CWS在治疗肝脏疾病时可以将其制备成药剂学上常规的剂型，通过所属领域技术人员所熟知的给药方式来进行给药，例如口服、直肠、舌下、肺部、透皮、离子透入、阴道及鼻内给药。优选的给药方式是口服。给药剂量根据制剂形式和期望的作用时间以及治疗对象的情况而有所变化，实际治疗所需的量可以由医师根据实际情况(如，病人的病情、体重等)而方便地确定。对于一般的成人，每日需要给药5-600mg的量。本专利技术的N-CWS可以由固体发酵制备得到，具体制备方法已有文献报道，一般的方法如下1、菌种保存斜面保存法配制固体培养基(0.5％牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％氯化钠，0.03％Na2HPO4.12H2O，1％甘油，1.6％琼脂；以10％碳酸钠调pH值至7.2)，121℃灭菌后制成斜面培养基。以接种环从平板中挑取活化单菌落，斜面划线接种，31℃培养120h后，4℃保藏。2、发酵固体培养基牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、0.03％Na2HPO4.12H2O、甘油1％、蒸馏水配制；10％碳酸钠调节pH值至7.5；121℃灭菌后，铺平板备用。接种与发酵用无菌蒸馏水或液体培养基洗脱斜面菌种保藏管中的菌体，吹打均匀后制成一定浓度的菌悬液，按照一定的量涂布法涂布于直径15cm的平板上，31℃倒置培养120h。菌体收集将长出的菌苔用接种铲轻轻刮下，然后用一定体积的PBS缓冲液制成菌悬液，4℃下5000rpm离心5min，收集菌体后称重备用。3、N-CWS的制备与理化性质分析将发酵获得的菌体重悬于10倍体积PBS溶液，冰浴条件下间歇法超声破碎菌体，调节频率和功率，避免发生泡沫，使裂解尽快完成。裂解产物于4℃，10000g离心15min，取上清，适量DNase和RNase处理1h以消化菌体中的核酸，然后加入终浓度为1％TritonX-100处理24h，再用适量的胰蛋白酶和链蛋白酶处理12h，最后以正丙醇、无水乙醇/冰乙酸(1∶1)分别处理2h，蒸馏水洗涤三次后即得到白色的N-CWS，60℃烘干后称重。将收集获得的N-CWS配置成一定浓度混悬液，0.07Mpa下灭菌15min，4℃保存。 N-CWS无嗅无味，呈白色粉末状，不溶于水、乙醇、二甲亚砜、醚等试剂。附图说明图1.N-CWS处理对ALT的动态变化影响图2.N-CWS处理对AST的动态变化影响图3小鼠肝组织的病理学变化(HE染色，×20)，A为正常小鼠肝组织，B为100mg/kg联苯双酯处理组，C为模型组，D、E、F分别为150、15和1.5mg/kg N-CWS处理组(n＝10)图4.N-CWS对四氯化碳诱导的肝纤维大鼠血清AST的影响图5.N-CWS对四氯化碳诱导的肝纤维大鼠血清ALT的影响图6不同处理组大鼠肝组织的病理变化(HE染色，×400)A为正常组，B为模型组，C为阳性对照组，D为40mg/kgN-CWS高剂量组)，E为8mg/kgN-CWS中剂量组，F为1.6mg/kgN-CWS低剂量组为了便于理解，以下将通过具体的实施例和附图对本专利技术进行描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本专利技术范围的限制。具体实施例方式实施例1N-CWS对CCl4所致急性肝损伤小鼠的保护作用1、药物剂量高剂量组的剂量为150mg/kg，配制浓度7.5mg/ml，灌胃0.2ml/10g；中剂量组为15mg/kg，配制浓度0.75mg/ml，灌胃0.2ml/10g；低剂量组为1.5mg/kg，配制浓度0.075mg/ml，灌胃0.2ml/10g。试验对照空白对照用生理盐水，按与给药组等体积灌胃口服。阳性对照药为联苯双酯滴丸剂(1.5mg/粒)，北京协和药厂生产。临用时根据需要加入蒸馏水溶解混悬均匀，4℃保存备用。根据临床用量和动物耐受容量，设计动物实验剂量小鼠剂量100mg/kg，配制浓度5mg/ml，灌胃0.2ml/10g。2、实验动物健康昆明种小鼠，全雄，体重20±2g，购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场。3、其他实验材料四氯化碳，分析纯，南京化学试剂一厂生产。甲醛溶液，分析纯，南京化学试剂一厂生产。鲁花牌纯正花生油，莱阳鲁花浓香花生油有限公司。氯化钠注射液，金陵药业浙江天峰制药厂生产。转氨酶活性测定试剂盒为南京建成生物技术有限公司产品，批号为20040518。4、实验方法 4.1 N-CWS对四氯化碳所致急性肝损伤模型小鼠的保护作用将90只昆明种小鼠按体重随机分为六组，每组15只，即正常对照组(Control)、模型组(Model)、阳性药对照组(Bifendate，p.o 100mg/kg)和N-CWS高、中、低剂量组(p.o，剂量分别为150、15和1.5mg/kg)。给药体积为0.2ml/10g，正常组和模型组分别给予等体积生理盐水。造模前24h开始灌胃给药，每日早晚各给药一次，连续给药4日，第2d给药后1h，除正常对照组外，其余各组用0.2％的CCl4花生油溶液0.2ml/10g腹腔注射，建立小鼠急性肝损伤模型。48h后小鼠眼眶取血，3000rpm离心10min分离血清以改良赖氏法测定血清转氨酶；断头处死动物，取肝脏左叶以10％甲醛固定，石蜡包埋，HE染本文档来自技高网...

【技术保护点】
红色奴卡氏放线菌细胞壁骨架用于制备治疗肝脏疾病药物的用途。

【技术特征摘要】
1.红色奴卡氏放线菌细胞壁骨架用于制备治疗肝脏疾病药物的用途。2.权利要求1所述的用途，其中肝脏疾病是慢...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶波平，王颖，金国虔，陶俊，余江河，吴梧桐，刘煜，王鑫，刘慧，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]