本发明专利技术涉及免疫分析法，其使得能以比现有技术中分析法更高的灵敏度检测样品中的多肽。本发明专利技术还涉及试剂盒，其提供了进行所述免疫分析法所需的组分。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及免疫分析领域，其使得能检测样品中的肽和蛋白质并提供了比现有技 术的分析法更高的灵敏度。本专利技术还涉及试剂盒，其提供进行所述免疫分析所需的组分。
技术介绍
阿尔茨海默病(AD)为中枢神经系统的进行性的退行性疾病，特征为进行性和不 断加重的记忆丧失，接着是四肢控制和身体功能的丧失以及最终死亡。它是目前为止最为 常见的痴呆病因，影响到超过65岁人群的1 %至6 %，超过80岁人群的10至20 %。AD在几个病理特征方面与其它类型的痴呆不同，包括在患者脑内神经元之间的细 胞外空隙进行性出现老年斑。该老年斑具有淀粉样沉积物中央核心，主要由称为淀粉样3 肽(A0)的40-42氨基酸肽的纤维形成，周围是退化的神经炎和胶质细胞。这种肽源于称为 3淀粉样前体蛋白(0APP)的前体蛋白的蛋白水解加工。在生物体内发现0APP有不同亚 型，这些亚型源自0APP编码基因的初级转录本的可变剪接。这些亚型主要是0APP-695、 3APP-751和0APP-77O，其中数字指氨基酸的数量。0APP基因存在于人21号染色体中， 该染色体的三体型(唐氏综合征)导致0APP蛋白的过表达以及患者脑内过早出现淀粉样 斑(Selkoe D.J. (2001) Physiol. Rev. 81，741-766)。3 APP 为跨膜蛋白，可被不同的蛋白 水解酶(分泌酶)加工而产生不同的产物。通常，0APP在其胞外区被a分泌酶切割，产 生可溶性长分泌片段和称为C83的较短膜锚定片段，C83被Y _分泌酶进一步切割产生P3 肽(p34(l或p342)以及被其它蛋白酶进一步降解的57或59肽。当3APP被分泌酶切割 时，其产生可溶性分泌片段(S0APP-0)和C99片段，该C99片段可被分泌酶切割而产 生淀粉样肽A3和锚定在膜内的57或59氨基酸肽(SelkoeD. J. (2001)Physiol. Rev. 81, 741-766)。根据出现的年龄，可以将AD分类为早期发作型(低于60岁)和晚期发作型(高 于60岁)，以及根据常染色体显性遗传的存在，可以将AD分类为家族性AD或散发性AD。早 期发作的家族型AD可与编码0APP、早老蛋白1和早老蛋白2的基因(分别位于第21、14 和1号染色体上)中的已知突变相关。这些分类并不是相互排斥的。最常见的形式为散发 性晚期发作型。在临床实践中，采用基于典型的临床标志的存在来进行AD诊断，并采用神经成像 技术和血液分析来排除其它类型的痴呆。采用这些标准，诊断可靠性是可接受的，尽管根据 采用脑尸检进行的研究，有10-20%的诊断为AD的患者患有不同的疾病。另外，只有当神经 退行性过程进展至患者患有严重痴呆和脑损伤广泛至治疗措施的数量有限时，目前的诊断 方法才能实施。明确诊断有赖于对死后脑组织的病理检查。因此，亟需鉴定用于AD早期诊断的灵敏和特异的生物标志物，其使得能区分年老 引起的认知损害和与该过程的早期症状相关的认知损害，以及区分AD引起的变化和其它 退行性疾病引起的变化。根据Growdon等人(Neurobiol. Aging，1998，19 :109_116)，用于 AD的理想标志物应满足以下条件5-其应该检测神经病理学的基本特征-其应该在该疾病的神经病理学证实的病例中得到验证-对于检测AD，其应该显示至少80%的灵敏度-对于区分AD和其它类型的痴呆，其应该显示至少80%的特异性，以及-其应该是可靠的、可重复的、非侵入性的、易于操作的和廉价的。现有技术中已知通过检测患者脑或CSF内存在的生物标志物的水平来诊断AD的 方法。已经对在CSF内测定的不同生物标志物进行了表征。CSF直接反映了中枢神经系统的 细胞外空隙的成分，因此提供了较高浓度的生物标志物。但是，只能通过腰椎穿刺获取CSF， 这不是容易被患有痴呆的患者接受的常规诊断方法，更不用说具有记忆病症的患者。因此， 亟需这样的AD生物标志物，其可在通过非侵入性方式从身体获取的样品中被检测到。现有技术中描述的可在血浆中检测的适合AD生物标志物包括(i)源于淀粉样斑 的标志物，(ii)针对A3或3APP的自身抗体，(iii)炎性标志物，例如IL-6，其受体或gp 130，C反应性蛋白或氧化应激(异构前列腺素)，(iv)脂代谢的标志物(apoE，氧固醇)以 及(v)血管性疾病标志物(同型半胱氨酸，脂蛋白b Clq) (Scheuner D et al. (1996) Nature Med 2,864-870)。然而，鉴于A3在AD患者脑内累积并且为AD发病机制中的中心要素，该蛋白被 认为是AD标志物的最适合候选者。但是，将A0用作AD的血浆生物标志物面临A3肽 (A3 (1-40)和A0 (1-42))在血清中的浓度极低的问题，以致没有足够灵敏的能可靠检测 所述肽类的分析法。Scheuner等人(Nature Med.，1996，2 :864_870)进行了初步研究来检测在携带家 族性AD相关突变的家族患者中早老蛋白1、早老蛋白2或0APP的胞外浓度是否升高。尽 管在具有 FAD 相关 PS1 (P < 0. 0001)、PS2N141I (P = 0. 009)、APPK67(1N, M671L，(P < 0. 0001)和 APPV7171 (—例个体)突变的个体血浆中观察到升高水平的A 0 1-42(43)，但是这些研究对 于分析其中A0肽在血清中的浓度低得多的散发性AD无效。本文中使用的测定试剂盒为 Suzuki,N.等人(Science, 1994，264 1336-1340)之前描述的ELISA夹心测定法，其使用捕 获抗体和过氧化物酶结合的检测抗体。已有人指出，A3水平与散发性AD之间没有关联性。相应地，Tamaoka A等人(J Neurol Sci.，1996，141,65-68)测量了来自28例散发性AD患者、40例具有不同神经学过程 的痴呆患者以及40名健康对照的血浆中的A0水平。这些作者得出结论，A0 40和A3 42 的血浆水平在对照个体和患有散发性AD的患者中是类似的。Kosaka等人(Neurology， (1997)48,741-745)得到了类似的结果。Tamaoka及其同事使用的测定法就测量血浆中 的A0 1-40在W0200722015中有进一步的说明。该测定法为ELISA夹心测定法，其中采用 1A10单克隆抗体(mAb)将A0 40和A0 42肽捕获在固体支持物上并采用过氧化物酶结合的 14FlmAb进行检测。这种测定法提供了个位数pg/ml范围内的灵敏度水平。Vanderstichele H 等人(Amyloid，2000，7，245-258)测定了 12 名健康对照、39 例 AD患者和6例患有路易体痴呆的患者、10例具有其它类型痴呆的患者以及9例具有其它神 经学病状而不表现痴呆的患者的CSF、血浆和尿中的A0 (1-42)水平，但是在A0 (1-42)水 平和诊断结果、性别或MMSE结果之间没有观察到关联性。对于这些研究，使用了基于ELISA 夹心测定法的INNOTEST0-淀粉样蛋白(1-42)测试，其中采用识别A0 (1-42)的N-末端区的21F12mAb将A0 (1-4本文档来自技高网...
【技术保护点】
测定选自Ａβ４２、Ａβ４０及其混合物的靶多肽的试剂盒，其包含：（ｉ）第一抗体或抗体组合，其识别所述靶多肽，（ｉｉ）第二抗体或抗体组合，其识别与所述第一抗体或抗体组合识别区域不同的所述靶多肽的区域，（ｉｉｉ）对所述第二抗体显示出亲和性的试剂，其被偶联至结合对的第一成员，以及（ｉｖ）结合对的第二成员，其被偶联至可检测标签。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J曼纽尔萨拉萨巴里欧，
申请(专利权)人：艾拉科隆生物技术公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]
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