抗肥胖致免疫杂交多肽及含有所述多肽的抗肥胖疫苗组合物制造技术

本发明专利技术公开一种预防和治疗肥胖病的致免疫杂交多肽，其中将载脂 蛋白B-100的B细胞表位的模拟肽、狂犬病病毒辅助T细胞表位或乙型 肝炎病毒表面抗原辅助T细胞表位以及小鼠载脂蛋白CII的C末端肽片 段或载脂蛋白B-100的B细胞表位的模拟肽以从该致免疫杂交多肽的N 末端到C末端方向的顺序相互融合。此外，公开了一种包含该致免疫杂 交多肽的用于预防和治疗肥胖病的疫苗组合物、编码该致免疫杂交多肽 的多聚核苷酸、携带该多聚核苷酸的重组表达载体、固定有该重组表达 载体的宿主细胞，以及通过培养由该重组表达载体转化的宿主细胞来制 备所述致免疫杂交多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种致免疫杂交多肽，其中将载脂蛋白B-100的B细胞 表位的模拟肽、狂犬病病毒辅助T细胞表位或乙型肝炎病毒表面抗原辅 助T细胞表位以及小鼠载脂蛋白CII的C末端肽片段或载脂蛋白B-100 的B细胞表位的模拟肽以从该致免疫杂交多肽的N末端到C末端方向的 顺序相互融合。此外，本专利技术涉及一种用于预防和治疗肥胖病的疫苗组 合物，其包含所述致免疫杂交多肽作为活性成分。进一步地，本专利技术涉 及编码所述致免疫杂交多肽的多聚核苷酸、携带该多聚核苷酸的重组表 达载体、由该重组表达载体转化的宿主细胞以及通过培养由该重组表达 载体转化的宿主细胞来制备所述致免疫杂交多肽的方法。
技术介绍
近来，由于向西方饮食习惯的转变，导致在韩国糖尿病、动脉硬化 和冠状动脉粥样硬化疾病(CAD)逐渐增多，其不仅对人而且对于宠物 如狗或猫均是如此。引起这些疾病的血脂包括胆固醇、甘油三酯(TG)、 游离脂肪酸和磷脂。这些血脂形成具有载脂蛋白的脂蛋白，并且通过血 流输送。其中，极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)输送 大部分甘油三酯和胆固醇的功能以及LDL-胆固醇水平的变化是疾病预 后的指标。成人脂类代谢相关疾病的主要因素LDL-胆固醇结合于每种组 织中细胞质膜的LDL受体上，并在组织中保存并利用。选择性地，由清 除细胞吸收LDL-胆固醇并将其水解，然后将游离胆固醇转化为HDL， 与载脂蛋白E (apoE)脂蛋白一起在肝中再循环，或者将其转化为胆盐 释放。在该过程中，载脂蛋白表现出维持脂蛋白结构性体内稳态的重要 功能，充当酶脂蛋白脂肪酶的辅助因子，并且在与质膜上特定受体的结 合中起重要作用。载脂蛋白B-100(载脂蛋白B-100)是低密度脂蛋白的主要蛋白组分， 并且还存在于中密度脂蛋白(IDL)和VLDL中。因此，当将血液中的 抗体诱导识别载脂蛋白B-100时，由吞噬细胞来清理LDL就容易发生了。5在这方面，某些最新研究集中于利用疫苗来降低血桨LDL-胆固醇水平并减少动脉硬化的发生。由这种抗胆固醇疫苗疗法诱导的抗体是IgM型， 其被认为结合于VLDL、 IDL和LDL，并且该策略暗示了研制疫苗用于 预防和治疗高胆固醇血症和动脉粥样硬化的可能性(Bailey等人， Cholesterol vaccines, Science 264， 1067-1068， 1994; PalinskiW等人， Proc Natl Acad Sci U.S.A. 92， 821-5， 1995; Wu R, de Faire U等人， Hypertension. 33， 53-9， 1999)。此外，载脂蛋白B-100是巨大的蛋白 分子，其由4560个氨基酸残基组成，包含24个氨基酸残基的信号肽并 具有超过500kDa的分子量(Elovson J等人，Biochemistry, 24:1569-1578， 1985)。因为载脂蛋白B-100主要由肝脏分泌，并且是两性分子，所以 其可与血浆脂蛋白的脂类组分和水相环境相互作用(Segrest J. P等人， Adv. Protein Chem.， 45:303-369， 1994)。载脂蛋白B-100稳定LDL颗 粒的大小和结构，并且在通过结合于其受体来控制血浆LDL-胆固醇的体 内平衡中起关键作用(Brown MS等人，Science, 232:34-47， 1986)。本专利技术人所发表的韩国专利号10-0639397公开了一种用于载脂蛋白 B-100的表位的模拟肽，其显示对于肥胖病的抑制作用； 一种致免疫杂交 多肽(B4T)，其中上述模拟肽融合于辅助T细胞表位，以及含有致免 疫杂交多肽的抗肥胖病组合物。但是，由于在免疫相关物质和代谢中的 差异，不能预期由载脂蛋白B-100的B细胞表位的模拟肽与辅助T细胞 表位融合所产生的杂交多肽对于动物的预防和治疗如同在人类中同样有 效。另外，虽然在一个群体之内具有免疫性，但是因为其折叠稳定性较 低，所以依照个体而言，融合的多肽引起免疫应答具有很大程度的偏差。另一方面，做了很多努力将半抗原与载体蛋白融合以增强半抗原的 免疫原性，但是未能获得一致的增强效果。特别地，如本专利技术的B细胞 表位和T细胞表位的线性连接导致依表位方向、每个表位类型等的免疫 原性的丧失(Francis, M. J.等人，Nature 330:168-170， 1987)，并且连 接子的存在导致抗原性减低(Partidos, C.等人，Mol. Immunol. 29:651-658， 1992)。也就是说，没有一常不变的规律可适用于肽疫苗设 计，并且设计的疫苗的效力也是不可预知的。基于同样的理由，当载脂 蛋白B-100的B细胞表位的高度疏水性模拟肽与狂犬病病毒辅助T细胞6说明书第3/23页表位、乙型肝炎病毒表面抗原辅助T细胞表位或载脂蛋白CII融合时， 抗原区域可以内化到融合蛋白中，导致其诱导抗体应答的能力降低。
技术实现思路
为了得到本专利技术，本专利技术人对适用于动物(例如狗、牛等以及人) 并能在个体中引起一致的抗体反应的稳定的抗肥胖病疫苗进行了充分而 彻底的研究。因此，本专利技术人令人惊讶地发现本专利技术的杂交多肽除了显示极好的 免疫刺激作用以外，可以有效地用于预防或治疗动物以及人的肥胖病，所述杂交多肽包含载脂蛋白B-100的B细胞表位的四聚体模拟肽(B4)、 狂犬病病毒辅助T细胞表位(R)或乙型肝炎病毒表面抗原辅助T细胞表位(T)以及载脂蛋白cn的c末端肽片段(cn)或载脂蛋白B-ioo的B细胞表位的二聚体模拟肽(B2)以从该致免疫杂交多肽的N末端的 顺序融合，从而完成本专利技术。因此，本专利技术的一个目的在于提供了一种致免疫杂交多肽，其中将 载脂蛋白B-100的B细胞表位的四聚体模拟肽、狂犬病病毒辅助T细胞 表位或乙型肝炎病毒表面抗原辅助T细胞表位以及载脂蛋白CII的C末 端肽片段或载脂蛋白B-100的B细胞表位的二聚体模拟肽以从该致免疫 杂交多肽的N末端的顺序相互融合。本专利技术的另一目的在于提供了一种用于预防或治疗肥胖病的疫苗组 合物，其包含致免疫杂交多肽。本专利技术的又一目的在于提供了一种编码所述致免疫杂交多肽的多聚 核苷酸。本专利技术的又一目的在于提供了一种包含该多聚核苷酸的重组表达载体。本专利技术的又一目的在于提供了一种用该重组表达载体转化的宿主细胞。本专利技术的又一目的在于提供了一种通过培养用该重组表达载体转化 的宿主细胞来生产所述致免疫杂交多肽的方法。附图说明图1 (a)是在每孔2pl负载的TBE缓冲系统的2%琼脂糖凝胶上电 泳载脂蛋白CII基因的PCR产物(在道2中)以及25/100bp混合DNA 梯(在道1中)之后的照片。图1 (b)是显示将目的多聚核苷酸片段插入转化到大肠杆菌JM109 中的重组载脂蛋白CII (ApoCn) /pQE30载体中的照片。图2 (a)是在每孔2pl负载的TBE缓冲系统的2%琼脂糖凝胶上电 泳RVNP基因的PCR产物(在道2中)以及100bp梯度(Bioneer)(在 道1中)之后的照片。图2 (b)是显示Sal I消化片段以适当的方向插入转化到大肠杆菌 JM109中的重组B4RCII/pQE30载体中的照片。图2 (c)是显示Sal I消化片段以适当的方向插入转化到大肠本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种致免疫杂交多肽，包含（ｉ）具有选自由序列编号１、序列编号２和序列编号３所组成的组的氨基酸序列的肽的单体或多聚体；（ｉｉ）狂犬病病毒辅助Ｔ细胞表位，或乙型肝炎病毒表面抗原辅助Ｔ细胞表位；以及（ｉｉｉ）小鼠载脂蛋白Ｃ　Ⅱ的Ｃ末端肽片段，或具有选自由序列编号１、序列编号２和序列编号３所组成的组的氨基酸序列的肽的单体或多聚体，顺序是从所述致免疫杂交多肽的Ｎ末端到Ｃ末端方向。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2006.9.25 KR 10-2006-00931301.一种致免疫杂交多肽，包含(i)具有选自由序列编号1、序列编号2和序列编号3所组成的组的氨基酸序列的肽的单体或多聚体；(ii)狂犬病病毒辅助T细胞表位，或乙型肝炎病毒表面抗原辅助T细胞表位；以及(iii)小鼠载脂蛋白C II的C末端肽片段，或具有选自由序列编号1、序列编号2和序列编号3所组成的组的氨基酸序列的肽的单体或多聚体，顺序是从所述致免疫杂交多肽的N末端到C末端方向。2. 根据权利要求1所述的致免疫杂交多肽，其中上述(i)所述的 多聚体包含两至八个肽，每个肽具有选自由序列编号1、序列编号2和序 列编号3所组成的组的氨基酸序列。3. 根据权利要求2所述的致免疫杂交多肽，其中所述多聚体包含四 个肽，每个肽具有选自由序列编号1、序列编号2和序列编号3所组成的 组的氨基酸序列。4. 根据权利要求3所述的致免疫杂交多肽，其中所述多聚体包含四 个具有序列编号1的氨基酸序列的肽。5. 根据权利要求4所述的致免疫杂交多肽，其中所述多聚体具有序 列编号5的氨基酸序列。6. 根据权利要求l所述的致免疫杂交多肽，其中所述狂犬病病毒辅 助T细胞表位具有序列编号6的氨基酸序列。7. 根据权利要求l所述的致免疫杂交多肽，其中所述乙型肝炎病毒 表面抗原辅助T细胞表位具有序列编号7的氨基酸序列。8. 根据权利要求l所述的致免疫杂交多肽，其中所述载脂蛋白CII 的C末端肽片段具有序列编号8的氨基酸序列。9. 根据权利要求1所述的致免疫杂交多肽，其中上述(iii)所述的 多聚体包含两至四个肽，每个肽具有选自由序列编号1、序列编号2和序列编号3所组成的组的氨基酸序列。10. 根据权利要求9所述的致免疫杂交多肽，其中所述多聚体包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：金晓骏，李禧宗，
申请(专利权)人：SJBIOMED株式会社，
类型：发明
国别省市：KR