一种谷氨酰胺转氨酶制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新的谷氨酰胺转氨酶制备方法，其步骤包括首先选择一株高产谷氨酰胺转氨酶转基因菌株，经过放大培养后接种４％量于种子培养基，３０℃，２１０ｒ／ｍｉｎ培养２４ｈ后按８％接种量接入发酵培养基培养。发酵培养过程中采用分批补料发酵法培养，有效地解决了发酵过程中产物抑制作用和蛋白质交联反应等，还通过变温法缩短细胞生长延滞期，减少总发酵时间提高糖的利用率和谷氨酰胺转氨酶的发酵水平。最后，采用超滤－真空浓缩法分离和纯化谷氨酰胺转氨酶，通过该法制得的谷氨酰胺转氨酶酶活力高，产率高，操作比较简便，适用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种谷氨酰胺转氨酶制备方法，其特征包括以下几个步骤：（１）菌种选择选择了一株产谷氨酰胺转氨酶转基因菌株，该菌株是通过将来自茂原链霉菌产谷氨酰胺转氨酶基因克隆分离后，构成该基因原核表达载体，并通过轮枝链霉菌表达。（２）菌种培育将斜面培养基上的菌种以４％的接种量接入种子培养基，于３０℃，２１０ｒ／ｍｉｎ培养２４ｈ。（３）摇瓶发酵培养以８％的接种量，将种子培养基菌种接入发酵培养基，于３２℃，２１０ｒ／ｍｉｎ培养１８ｈ，降低温度至２８℃，培养２４ｈ。（４）补料发酵发酵液发酵２４ｈ时，补加１．５％甘油作为碳源，同时添加１．５％蛋白胨作为氮源培养１８ｈ。（５）谷氨酰胺转氨酶提取将发酵液以４０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，上清液为粗酶液，粗酶液经微滤膜微滤处理，进一步除去细菌等杂质，滤液再经超滤膜处理，截留得到的产物再经真空浓缩后，喷雾干燥得到纯的谷氨酰胺转氨酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴菁，史利斌，
申请(专利权)人：湖州来色生物基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：33