血液样品的多重分析制造技术

本发明专利技术涉及用于检测红细胞携带的多个抗原性分子和／或个体的多个抗红细胞抗体的方法，包括使样品与可辨别的珠子相接触，在珠子上结合有ａ）特异性针对所述抗原的抗体，或ｂ）红细胞、红细胞膜片段或血型抗原。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血液样品的多重分析 本专利技术涉及红细胞类型和表现型的分析，也涉及非典型抗红细胞抗体的筛选，涉及供体与受体之间相容性的确定，并涉及包被有抗体或包被有活化的血清补体级份的红细 胞的验证。 如今，输血是静脉内供给从供血者获得的血红细胞浓縮物(血细胞浓縮物)制剂。 在输血时，主要的风险与抗体及其红细胞抗原在接受者(被输血的个体)体内再结合的可 能性有关。事实上，在红细胞、也被称为血红细胞的表面，存在有能够被免疫系统识别并能 够引发免疫应答、使血红细胞溶血的膜抗原，特别是血型(或系统)抗原。这种免疫反应的 结果，其范围可以从没有临床征兆的无效输血，到轻微临床反应(焦虑、颤抖)，严重临床反 应(休克、血红蛋白尿(haemoglobi皿rea)、肾机能不全)或导致死亡的剧烈临床反应(休 克、弥散性静脉内溶血)。 如果接受者不具有任何针对供体红细胞抗原的循环系统抗体，则供体的血红细胞 被称为是与接受者的血液相容的。 在构成血型的红细胞膜抗原的所有抗原性变异体中，到目前为止已经在人类中 鉴定了超过20种红细胞抗原系统具有抗原A、 B禾P H的AB0系统，尤其是具有抗原D (不 存在抗原D被标注为d) 、 C、 E、 c禾P e的Rhesus (RH)系统，尤其是具有两种抗原K禾P k的 Kell (KEL)系统，尤其是具有抗原Fya和Fyb的Duffy (FY)系统，尤其是具有抗原Jka和 Jkb的Kidd(JK)系统，或者可选的其它在实践中不太经常研究的系统，例如丽S系统、 Lewis (LE)系统等。具有同样的红细胞抗原群集的个体属于相同的的红细胞血型。 除了病理学情况、例如自体免疫疾病的情况之外，个体的血清可以含有两种类型 的针对红细胞抗原的抗体 -(i)被称为典型的并针对ABO系统的抗原的抗体(例如在B型个体中的抗A抗 体)。 -(ii)被称为非典型的(或免疫)抗体，它在血清或血浆中的存在是与环境有关 的，更具体来说针对非AB0系统的抗原。"典型的"或"常规的"抗体是M和/或A同种型的免疫球蛋白，能够在体外凝集红 细胞。这种现象被用于通过Beth-Vincent和Simonin测试确定个体的ABO血型(分别为 正向和反向血型测定)，Beth-Vincent测试使确定个体的血红细胞所携带的抗体(抗原性 表型)成为可能，而Simonin测试使进行互补性研究、即确定个体血清中存在的循环系统抗 A和/或抗B抗体，成为可能。 在Beth-Vincent测试中，将个体的血红细胞与具有精确的抗体特异性、针对ABO 系统的抗原的测试血清或测试抗体相接触。因此它是使用测试血清的血红细胞凝集测试。 在Simonin测试、也称为反向测试中，将个体的含有循环系统抗体的血清或血桨， 与属于ABO系统的精确的抗原性血型的测试血红细胞或测试红细胞相接触。因此它是使用 测试血红细胞的血清凝集测试。"非典型"或"非常规"或"免疫"抗体，最常见的是G同种型的，它们在存在外源血 红细胞的抗原性剌激时出现，例如在输血过程中针对一种或多种抗原进行免疫后，或者在5怀孕过程中，由母体针对胎儿的不属于母体血型的红细胞抗原的免疫反应所引起，特别是 在分娩时。 这些"非典型"抗体的筛选被称为非典型凝集素筛选(AAS)。这种测试用于检测个 体血液中针对各种不同红细胞抗原的抗体的存在或不存在。为此，需要设法验证这些抗体 (IgG和/或IgM)与抗原已知的测试血红细胞的结合。使用大量类型的血红细胞进行平行 操作，对结果进行的比较使得推断出存在的抗体的特异性或多种特异性成为可能。 与免疫反应有关的风险，如果该反应涉及了最具免疫原性的抗原，则全都较高，例 如Rhesus系统的抗原(该系统的危险性梯度如下D > E > c > e > C)，其次，按照免疫原 性降低的次序，是Kell系统的K抗原、Duffy系统的Fya和Fyb抗原、Kidd系统的Jka和 Jkb抗原，等等。 在实践中，为了进行输血，不可能考虑到所有这些抗原，否则人们将永远不会在正 确的时间获得正确的血型，更不必说某些抗原组合非常罕见。因此，标准的输血最通常只考 虑AB0系统和Rhesus D系统(Rh+或Rh-)中的类型。然而，在存在出现非典型凝集素的风 险的形势下，需要考虑一定数量的其它系统，特别是Rhesus C、 c、E和e以及Kell，或甚至 其它系统。对于这些有风险的情况来说，情况将是使供体血型的相容性服从接受者血型的 相容性，考虑这些非典型凝集素的存在或出现的风险。 因此，在带有非典型抗红细胞抗体的受体患者中，或在有风险情况下，例如特别是 在不具有非典型抗红细胞抗体的多次输血患者中或在怀孕妇女中，必需要选择待输的红细 胞浓縮物单位，使得供体的血红细胞必须不含有接受者的抗体所针对的或容易出现的抗 原。 目前，在输血实践中，专业人员可以采用两种态度-他们在患者的血清或血浆中系统地筛选非典型抗体的存在，如果这样的抗体存 在，他们选择不含所述抗原性结构的红细胞浓縮物(这种情况在法国最常遇到)， -或者他们在存在接受者的血清或血浆的情况下与供体的血红细胞进行直接的交 叉配血，其中应该观察不到凝集反应和/或溶解反应。 在输血的临床实践中，红细胞表型定型既包括接受者也包括供体，该表型定型对 应于筛选和鉴定血红细胞表面上的血型抗原(除了具体的ABO系统之外，其中相应的典型 抗体的存在也被筛选)。 在接受者和供体水平上，对于给接受者提供相容的红细胞浓縮物来说，存在三种 作为风险情况函数的红细胞表型水平-确定AB0血型表型(或AB0血型)和标准Rhesus表型(存在或不存D抗原)；-确定Kell Rhesus表型(存在或不存在C、 E、 c、 e和K抗原)；以及-确定扩大的(或拓宽的)表型，即确定Duffy系统的抗原Fya和Fyb、Kidd系统的抗原Jka和Jkb、 MNS系统和Lewis系统的抗原、以及其它根据风险和/或接受者血清中显示的非典型抗体的性质也可以调查的其它抗原的存在或不存在。 —般来说，常用于表型定型的技术，包括使用含有适合抗体的测试血清，筛选所调 查的抗原是否存在。优选情况下，包含在这些测试血清中的这些抗体，在性质上是凝集的 (IgM或IgA)，因此当被表型定型的红细胞带有对应于测试血清中存在的抗体的抗原时，可 以获得该红细胞的完全或部分凝集。然而，也可以使用非凝集的测试抗体(IgG类型的)，它们的存在利用抗免疫球蛋白抗体通过凝集来证实("间接Coombs"技术)。 为了在被测试患者的血清或血浆样品中筛选和鉴定抗血型抗原的抗体，该抗体是 用于ABO分型的典型抗体或AAS情况下的非典型抗体， 一般来说，将患者的血清或血浆，与 在一定数量的血型系统中(ABO、 Rhesus、 Kell、 Duffy、 Kidd、 MNS等)抗原性已知的测试 红细胞(也称为测试血红细胞)进行接触。对于其中易于存在的抗体倾向于非凝集类型 的AAS来说，使用的技术是间接Coombs类型的，通过使用抗免疫球蛋白抗体进行凝集，或 通过免疫粘附在固相上，并使用包被有抗免疫球蛋白抗体的血红细胞进行显示，如专利EP 0367468中所描述的。 在AAS的情况下，在第一步中，使用了一组"筛选本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于鉴定红细胞携带的抗原性分子和／或个体的抗红细胞抗体的体外方法，包括ａ）通过下列步骤鉴定生物样品中红细胞携带的多种抗原性分子（ｉ）在允许红细胞与抗体结合并且不产生凝集的条件下将所述含有红细胞的样品，在单一测试容器或在几个分离的测试容器中，与多组可辨别的珠子相接触，每组可辨别的珠子带有给定的、特异性针对红细胞携带的抗原性分子的抗体，所述抗体在一组珠子与另一组珠子之间不同，所述红细胞在与所述的多组珠子进行接触之前或之后被标记，（ｉｉ）除去不与所述抗体结合的红细胞，以及（ｉｉｉ）鉴定与标记的红细胞结合的珠子组，从而鉴定到由所检测的红细胞携带的抗原；和／或ｂ）通过下述步骤鉴定生物样品中的多种抗红细胞抗体，（ｉ）在允许样品中存在的抗体或活化的血清补体级份与红细胞或红细胞膜片段结合的条件下，将所述样品，在单一测试容器或在几个分离的测试容器中，与多组可辨别的珠子相接触，每组可辨别的珠子带有已知表型的（１）红细胞或（２）红细胞膜片段，所述已知表型在一组珠子与另一组珠子之间不同，（ｉｉ）除去不与所述红细胞或所述红细胞膜片段结合的抗体或活化的血清补体级份，（ｉｉｉ）对结合的抗体和／或结合的活化血清补体级份进行标记，以及（ｉｖ）鉴定与标记的抗体或标记的活化血清补体级份结合的珠子组，从而鉴定存在的抗红细胞抗体。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗雷德里克比菲埃，伊夫瑞森，埃利亚内里瓦兰，安帕鲁圣胡安，
申请(专利权)人：博瑞巴斯德公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]