使用电泳的快速均相免疫测定制造技术

本发明专利技术涉及检测和／或测定靶分子浓度的方法、组合物和装置。在优选的实施方式中，所述方法包括：允许靶分子形成具有结合到检测分子的第一结合剂和结合到捕获分子的第二结合剂的复合物，允许所述复合物进一步与能够结合到所述捕获剂、基本上不带有电荷的聚合物结合，和进行垂直梯度电泳以与未结合靶、第一和第二结合剂以及聚合物分离所述复合物。完整的复合物通过电泳聚集在堆积层并且所述检测分子被检测和／或定量。因为复合物含有高质荷比，所以它在堆积层变为基本不动，而未结合成分迁移穿过堆积层并与复合物分离。这提供了非常快速和灵敏的测定，所述测定可以在短时间内检测非常低浓度的靶分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用电泳的快速均相免疫测定相关申请因此，在本公开中，多相测定包括在检验过程期间将抗体-靶蛋白复合物结合到表面，并随后在测量样品中蛋白质的量之前清洗 掉任何残余的未结合样品和抗体。在另一方面，均相测定允许样品和 抗体混合在一起并允许结果在没有任何结合到表面或者清洗情况下被 测定。每种方法既有明确的益处，也有明确的局限(Ronkainen-Matsuno， 等2002)。均相测定可以是非常快的、容易适应于新的蛋白质和平台， 并且可以很有成本效益。局限包括潜在的较低特异性和灵敏性。另外， 这些方式一般局限于小的靶抗原。目前检测和/或测定溶液中分子浓度的方法没有将短的测定 时间、高的灵敏性和测定较大样品体积的能力进行结合，所述测定较 大样品体积的能力是检测和/或定量以非常低的浓度存在的靶分子所需 要的。在本领域存在提高分子检测和/或分子浓度测定的分析技术的需 要。专利技术概述图l-在等式中使用的符号列表。在大多数情况下，数量以用 厘米'克'秒为单位(c'g's单位)。图7A-等式6a将颗粒的斯维德贝格系数(Svedberg Coefficient )定义为它的沉降速度除以离心加速度。图8B-等式7b从等式6b计算IgG抗体的迁移率。8图9-荧光素(a)与第一抗体(b)结合而形成信号产生抗体 (Signal Generating Antibody) (c)。图不是按比例的，并且单个图表示 反应中特定成分的存在，不表示每种成分的化学计量的量。附图说明图10-生物素衍生物(d)与第二抗体(e;)结合而形成捕获抗体 (f)。图不是按比例的，单个图表示在反应中特定成分的存在，不表示 每种成分的化学计量的量。图15-在每个图中的深色痕迹代表在捕获层中生物素化的葡聚糖存在下的FITC标记的中性抗生物素蛋白浓度，而淡色痕迹代表在捕获层中没有生物素化的葡聚糖存在下的FITC标记的中性抗生物素蛋白浓度。图16-来自人IL-6完整夹心测定的剂量反应数据。虽然以上的实例描述了IL-6的EVEIA技术的应用，但是技术 人员将会意识到所描述的方法、组合物和装置可以容易地应用于检测 和/或测定任何选择的分子的浓度，所述选择的分子的抗体是商业可得 的或者容易制备的。在要求保护的方法的实践中应用的、针对各种靶 分子的抗体生成杂交瘤的商业来源，在本领域内是熟知的(例如 American Type Culture Collection, Manassas, VA)。针对实际上任何感兴 趣靶的单克隆或者多克隆抗体或者其片段的制备技术也是本领域众所 周知的，并且可以容易地被技术人员使用，而不需要过多的实验(参见， 例如，Harlow和Lane， 1988，在此通过引用并入其全部)。引用的参考文献 Gold L, Polisky B, Uhlenbeck O， and Yarus M. Diversity of Oligonucleotide Functions. Annual Review of Biochemistry, vol. 64, 1995 (pp 763-797). Harlow， E. and Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1988.0077Oda RP and Landers JP. Introduction to Capillary Electrophoresis, in Handbook of Capillary Electrophoresis. Landers JP， editor. CRC Press, 1997 (pp. 1-48).[0078J Ronkainen隱Matsuno NJ， Thomas JH, Halsall B, Heineman WR. Electrochemical ImmunoAssay Moving into the Fast Lane. Trends in Analytical Chemistry. Vol 21 ， No. 4, 2002 (pp. 213-225).[0079Schultz 雨，Tao L， Rose DJ, and Kennedy RT. Immunoassays and Enzyme Assays Using Capillary Electrophoresis, in Handbook of Capillary Electrophoresis. Landers JP， editor. CRC Press, 1997 (pp. 611-638).10080Shahdeo K and Karnes HT. Combining Immunoassays with Chromatographic and Electrophoretic Separation Techniques — a Review. Mikrochimica Acta ,Vol. 129, 1998 (pp. 19-27).权利要求1.一种检测靶分子的方法，包括a)获得可能含有所述靶分子的样品；b)在结合检测分子的第一结合剂和结合捕获分子的第二结合剂存在的情况下，对所述样品进行垂直堆积电泳，其中所述靶分子结合所述第一和第二结合剂而形成复合物；和c)检测由所述靶分子和第一及第二结合剂形成的所述复合物的存在。2. 根据权利要求l所述的方法，还包括i)在基本上不带电荷的聚合物存在下进行所述电泳，所述不带电 荷的聚合物能够结合所述捕获分子而成为所述复合物的部分。3. 根据权利要求l所述的方法，其中所述结合剂是抗体或者其抗原结合片段。4. 根据权利要求l所述的方法，其中所述结合剂的一种或者两种是生物受体或其片段。5. 根据权利要求3所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。6. 根据权利要求l所述的方法，其中所述靶分子是蛋白质或者多肽。7. 根据权利要求l所述的方法，其中所述电泳是在最小流体动力学半径——等于两倍横切面面积除以周长——为0.5mm的管、槽或容器 中进行的。8. 根据权利要求7所述的方法，其中样品被装载在所述管、槽或者容器的顶部，并且所述电泳在密度和/或粘度从所述管、槽或容器的 顶到底部逐渐增加的梯度中进行，所述梯度包括不同密度或粘度 的至少两个相。9. 根据权利要求7所述的方法，其中所述样品被装载在所述管、槽或者容器的底部或底部附近，并且所述电泳在密度和/或粘度从所述 管、槽或容器的顶到底部逐渐增加的梯度中进行，所述梯度包括 不同密度或粘度的至少两个相。10. 根据权利要求8或9所述的方法，其中所述梯度包括样品层、捕获 层和堆积层。11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述梯度包括与所述捕获层混 合的样品层和堆积层。12. 根据权利要求10所述的方法，其中所述捕获分子是生物素，并且 所述电泳在生物素结合蛋白存在的情况下进行。13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述生物素结合蛋白选自抗生 物素蛋白、链酶抗生物素蛋白和中性抗生物素蛋白。14. 根据权利要求12或13所述的方法，其中所述电泳在结合生物素的 中性聚合物存在下进行。15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测靶分子的方法，包括：　ａ）获得可能含有所述靶分子的样品；　ｂ）在结合检测分子的第一结合剂和结合捕获分子的第二结合剂存在的情况下，对所述样品进行垂直堆积电泳，其中所述靶分子结合所述第一和第二结合剂而形成复合物；和　ｃ ）检测由所述靶分子和第一及第二结合剂形成的所述复合物的存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：SP蒂雷尔，B范特赫尔，
申请(专利权)人：里泽尔诊断公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]