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一种冰结构蛋白的制造方法技术

技术编号:4237137 阅读:211 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种冰结构蛋白的制造方法,属于食品加工技术领域。本发明专利技术以女贞叶为基体,经过冷藏,与Tris-HCl缓冲液及碎冰混合匀浆,再经沸水浴灭酶、冰水浴冷却、冷冻离心取上清液;再将上清液加入预冷丙酮,低温过夜沉淀,再经冷冻离心和冷冻干燥等工艺过程,制造冰结构蛋白冻干粉。本发明专利技术工艺过程简单,成本低廉,简单易行。制造出的冰结构蛋白分子量为66Kda,热滞活性为0.678℃,为纯天然产品,不含有任何有毒有害物质,可以广泛应用于农业、食品、医药等行业。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,属于食品加工

技术介绍
冰结构蛋白能以非依数性地降低水溶液的冰点而对熔点影响甚微,导致水溶液的熔点和 冰点之间出现差值,即冰结构蛋白具有热滞活性;且冰结构蛋白还能够特异性地与冰晶结合, 吸附到冰晶表面的冰结构蛋白,阻止了吸附位置处冰晶的生长,冰晶表面被蚀刻得凹凸不平, 导致冰晶新的生长半径较原来小,阻止冷冻食品体系中冰晶长大,即冰结构蛋白具有抑制冰 晶重结晶功能。基于此,冰结构蛋白可用于冷冻食品体系,控制冰晶重结晶,减小冰晶对食 品体系造成的破坏,具有广阔的应用前景。女贞叶在全国分布广泛,来源丰富。它能耐受-12'C的低温,在越冬期间保持长青。越冬 女贞叶,经受冷应激,会产生冰结构蛋白以抵抗外界的寒冷。且女贞叶中不含毒副成分,由 其提取出的天然冰结构蛋白可以广泛应用于农业、食品、医药等领域。
技术实现思路
本专利技术的目的在于开发一种女贞叶冰结构蛋白的制造方法,最大限度地降低成本、简化 工艺,为冰结构的广泛应用奠定基础。 本专利技术的技术方案女贞叶,经冷藏,与Tris-HCl缓冲液及碎冰混合匀浆,再经沸水浴灭酶,冰水浴冷却, 冷冻离心,收集上清液;再将上清液加入预冷丙酮(上清液丙酮=1: 4)混合,-20°(:过夜, 沉淀,再冷冻离心,收集沉淀,冷冻干燥,得到冰结构蛋白冻干粉。工艺为(1) 冷藏用清水洗净女贞叶,勿干燥,带水置于4C冰箱中冷藏4周,诱导产生冰结 构蛋白;(2) 匀浆将冷藏女贞叶投入pH7.4、 20mmol/L Tris-HCl缓冲液(Vc lmg/1),其中女贞 叶质量/缓冲液体积比为2/5,然后加入碎冰,混合匀浆;(3) 灭酶匀浆后,经八层纱布过滤,将滤液沸水浴15min,使酶失活,再经冰水浴冷却;(4) 冷冻离心于温度4。C、离心力10,000 g条件下,离心15min,收集上清液。(5) 沉淀上清液按照l: 4 (上清液丙酮)比例加入预冷丙酮中,混合,-20°(:过夜,沉淀;(6) 冷冻离心、干燥于温度4。C、离心力10,000 g条件下,离心30min,收集沉淀,3经冷冻干燥得冰结构蛋白冻干粉产品。本专利技术制备的冰结构蛋白为纯天然产品,不含有任何有毒有害物质,可以广泛应用于农 业、食品、医药等行业。本专利技术与已有技术相比具有以下优点本专利技术制造过程简单,成本低廉,简单易行,所得冰结构蛋白冻干粉天然、无毒,为冰 结构蛋白的广泛应用奠定了基础。 附图说明图1为一种冰结构蛋白制造方法工艺流程图。图2为冰结构蛋白冻干粉的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图。 图3为部分熔融重冻结的冰结构蛋白的DSC曲线。具体实施方式 实施例一用清水洗净女贞叶,置于4'C冰箱中冷藏4周。称取女贞叶100g,投入250mLpH7.4、 20mmol/LTris-HCl缓冲液(Vclmg/1),再加入碎冰,混合匀浆;八层纱布过滤,将滤液沸水 浴15min,再经冰水浴冷却,于温度4'C、离心力IO,OOO g条件下离心15min,收集上清液; 然后,按照l: 4 (上清液丙酮)比例加入预冷丙酮,混合,-201:过夜,沉淀,于温度4。C、 离心力10,000 g条件下,离心30min,收集沉淀,冷冻干燥,得到冰结构蛋白冻干粉。将上述冰结构蛋白冻干粉经SDS-PAGE分析,如图2,泳道M为低分子量标准蛋白,泳 道l为制造出的冰结构蛋白,分子量约为66Kda。经差示扫描量热仪测定其热滞活性,如图 3,所得到的冰结构蛋白的热滞活性为0.678'C,较通常植物中冰结构蛋白的热滞活性高。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冰结构蛋白的制造方法,其特征是以女贞叶为基体,经过冷藏后,与Tris-HCl缓冲液及碎冰混合匀浆,再经沸水浴灭酶,冰水浴冷却,冷冻离心,收集上清液;再将上清液加入预冷丙酮(上清液∶丙酮=1∶4)混合,-20℃过夜,沉淀,再冷冻离心,收集沉淀,冷冻干燥,得到冰结构蛋白粉。工艺为:    (1)冷藏:用清水洗净女贞叶,勿干燥,带水置于4℃冰箱中冷藏4周,诱导产生冰结构蛋白;    (2)匀浆:将冷藏女贞叶投入pH7.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液(Vc 1mg/l),其中女贞叶质量/缓冲液体积比为2/5,然后加入碎冰,混合匀浆;    (3)灭酶:匀浆后,经八层纱布过滤,将滤液沸水浴15min,使酶失活,再经冰水浴冷却;    (4)冷冻离心:于温度4℃、离心力10,000g条件下,离心30min,收集上清液。    (5)沉淀:冷却液按照1∶4(上清液∶丙酮)比例加入预冷丙酮中,混合,-20℃过夜,沉淀;    (6)冷冻离心、干燥:于温度4℃、离心力10,000g条件下,离心30min,收集沉淀,经冷冻干燥得冰结构蛋白冻干粉产品。

【技术特征摘要】
1、一种冰结构蛋白的制造方法,其特征是以女贞叶为基体,经过冷藏后,与Tris-HCl缓冲液及碎冰混合匀浆,再经沸水浴灭酶,冰水浴冷却,冷冻离心,收集上清液;再将上清液加入预冷丙酮(上清液∶丙酮=1∶4)混合,-20℃过夜,沉淀,再冷冻离心,收集沉淀,冷冻干燥,得到冰结构蛋白粉。工艺为(1)冷藏用清水洗净女贞叶,勿干燥,带水置于4℃冰箱中冷藏4周,诱导产生冰结构蛋白;(2)匀浆将冷藏女贞叶投入pH7.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液(Vc 1mg/l),其中女贞叶质量/缓冲液体积比为2/5,然后加入碎冰,混合匀浆;(3)灭酶匀浆后,经八层纱布过滤,将滤...

【专利技术属性】
技术研发人员:黄卫宁廖祥儒任士贤贾春利
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]

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