利用迷你内含子蛋白介导人胰高血糖素样肽（ＧＬＰ－１）的制备制造技术

本发明专利技术利用微型蛋白内含子制备胰高血糖素样肽－１。Ｓｓｐ?ＤｎａＢ蛋白质内含子（ｉｎｔｅｉｎ）其Ｎ－末端的１０６个氨基酸（ｉｎｔｅｉｎＮ）和Ｃ－末端的４８个氨基酸（ｉｎｔｅｉｎ?Ｃ），形成的Ｓｓｐ?ＤａｎＢ微型蛋白质内含子具有完整的剪接功能。将ｉｎｔｅｉｎ?Ｃ与胰高血糖素样肽－１融合蛋白（ｉｎｔｅｉｎＣ－ＧＬＰ）在大肠杆菌内进行表达，ｉｎｔｅｉｎ?Ｎ在大肠杆菌中进行表达，并以Ｎｉ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ进行纯化。纯化后的ｉｎｔｅｉｎＣ－ＧＬＰ与ｉｎｔｅｉｎ?Ｎ在ｐＨ６．２的磷酸盐缓冲体系中进行拼接，释放出重组胰高血糖素样肽－１。拼接产物上样于Ｎｉ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，ＧＬＰ－１存在于穿过液中，其它蛋白被吸附于Ｎｉ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上。将ＧＬＰ－１粗品进一步浓缩纯化得到纯品，ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱分析，与理论分子量相符合。葡萄糖耐受实验结果证明，与对照相比ＧＬＰ－１（７－３６）能有效降低小鼠血糖水平。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
通过迷你内含子蛋白（ｉｎｔｅｉｎ）介导胰高血糖素样肽的制备。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建宁，孙自勇，蒋爱芹，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]